LCMS在药物代谢动力学中的应用课件

LC-MS在药物代谢动力学中的应用LC-MS在药物代谢动力学中的应用1要点：(删除4-6片)一、几种现代分析方法介绍与比较二、LC-MS在药物动力学中的应用三、LC-MS在代谢物研究中的应用四、LC-MS在现代新药研究中的应用1、高通量筛选2、中药现代化要点：(删除4-6片)2体内药物分析中的现代分析方法与技术(标题一致性)一、气相色谱-质谱联用技术（GC-MS)*二、液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)*三、液相色谱-核磁共振联用技术(LC-NMR)四、毛细管电泳免疫分析(CEIA)五、柱切换高效液相色谱法六、高效毛细管电泳法(HPCE)体内药物分析中的现代分析方法与技术(标题一致性)一、气相色谱3LCMS在药物代谢动力学中的应用课件4气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）特点：灵敏度高、分析速度快、鉴别能力强；但它受到药物分子的极性和热稳定性等限制，要求分子具有挥发性或通过衍生化提高分子的挥发性，因此其有明显的局限性。气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）特点：5液相色谱-核磁共振联用技术(LC-NMR)特点：能提供最大量的分子结构信息，在体内药物分析中对代谢产物的鉴定具有显著优势，但是在做NMR分析前必须做大量的分离纯化工作，不利于样品的快速分离；另外，NMR检测灵敏度低是LC-NMR技术的瓶颈。液相色谱-核磁共振联用技术(LC-NMR)特点：6液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)基本组成：HPLC装置、接口装置与离子源、质量分析器。液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)基本组成：7目前商品化LC-MS仪主要用大气压离子化接口（API）。API不仅是一种较好的接口技术，同时也是一种离子化方法，该技术使样品的离子化在处于大气压条件下的离子化室中完成。目前商品化LC-MS仪主要用大气压离子化接口8API的操作模式分三种：一、电喷雾离子化（ESI)二、气动辅助电喷雾离子化三、大气压化学离子化（APCI)API的操作模式分三种：9液相色谱-质谱联用技术(LC-MS）特点：样品前处理简单，无需衍生化，适用范围广将色谱的高分离能力与质谱的高检测灵敏度、定性专属性集于一身随着接口装置和离子化技术的发展成熟，该技术在体内药物分析中逐渐发展成为一种常规的分离检测方法液相色谱-质谱联用技术(LC-MS）特点：10LC-MS在药物动力学中的应用介绍药物动力学研究，需对生物样品中的微量乃至痕量成分定量分析。而当今的药物研制日趋低剂量，使常规的分离检测技术难以满足复杂介质中痕量成分准确定量的要求。LC-MS技术的高灵敏度使之在这一领域的应用日趋广泛并趋于常规化。LC-MS在药物动力学中的应用介绍药物动力学11举例：闫小华等人用LC/MS联用法测定人血浆中氟西汀的浓度：举例：闫小华等人用LC/MS联用法测定人血浆中氟西12色谱条件色谱柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)柱温：30℃流动相：10mmol/L醋酸铵缓冲液-甲醇（20：80）流速：1.0ml/min色谱条件色谱柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)13质谱条件离子检测方式：选择性离子检测；离子极性：正离子离子化方式：气动辅助电喷雾离子化检测对象：苯磺酸氨氯地平传输区电压：100V干燥气流速：10L/min雾化室压力：40psi干燥气温度：350℃质谱条件离子检测方式：选择性离子检测；14以往文献中均以紫外检测器检测氨氯地平的浓度,但口服10mg氨氯地平后体内最高血浆浓度不到10ng·mL–1,最低只有0.2ng·mL–1,远远超出了紫外的检测范围,而本实验采用LC-MS法测定,结果最低检测浓度为0.12ng·mL–1，本法简便,灵敏,能满足测定血浆中药物浓度的要求。以往文献中均以紫外检测器检测氨氯地平15LC-MS在代谢物研究中的应用在新药开发过程中，为了预防潜在的毒性，测定是否有代谢物和已知药物相关，是否和原药具有相同的治疗作用或对其他治疗有内在的活性，有必要对代谢物进行结构鉴定。LC-MS在代谢物研究中的应用在新药16举例：陈怀侠等人运用液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(LC-MSn)联用技术研究了樟柳碱大鼠肝匀浆中的代谢物：举例：陈怀侠等人运用液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(L17色谱条件：色谱柱：C18柱(150mm×2mmi.d.,5μm),流动相：甲醇/0.01%三乙胺溶液(用甲酸调节pH3.5)(60∶40,V/V)柱温：40℃流速：0.2mL/min。色谱条件：色谱柱：C18柱(150mm×2mmi.18质谱条件：采用电喷雾离子化方式,检测离子为正离子。离子源喷射电压5.0kV,毛细管电压45V,毛细管温度200℃,氮气为鞘气,其流速40个单位,其它通过碰撞诱导解离获得母分子离子的多级质谱,优化的多级质谱相对碰撞能量为30%。采用全扫描一级质谱及其源内碰撞诱导解离、全扫描二级质谱及三级质谱等方式进行测定。质谱条件：采用电喷雾离子化方式,检测离子为正离子。离19依据上述实验方法,在樟柳碱的大鼠肝匀浆培养液中发现了原药及其代谢物。本实验首先总结出樟柳碱电喷雾质谱的电离和裂解规律,由原药的特征碎片及特征中性丢失为依据,通过LC-MS数据鉴别代谢物,完全可以排除内源性物质的干扰。因此,本方法灵敏度高,专属性好。依据上述实验方法,在樟柳碱的大鼠肝匀浆20LC-MS在高通量筛选中的应用随着组合化学和高通量活性筛选技术的发展，大量的活性化合物被发现，这就对这些活性化合物的药代属性进行筛选提出要求。为解决体内外药代动力学筛选规模小及化合物相互影响的问题,国外实验室开发了快速的药代动力学筛选法,将样品收集周期短至6～8h,利用串联LC-MS-MS技术,计算AUC0～t。利用体外肝细胞培养和串联LC/MS可识别代谢产物。LC-MS在高通量筛选中的应用21

生物样品的分析借用LC-MS/MS技术,通过应用混合功能型色谱柱,样品不经处理就可以直接快速地分析,极大地提高了药代筛选的通量性。生物样品的分析借用LC-MS/MS技22LC-MS在中药现代化中的应用液相色谱-质谱联用技术自身的优点也决定了其在中药药动学方面将发挥不可替代的作用，对阐明和揭示中草药作用机制及其科学内涵，设计及优选给药方案，促进中药新药开发和剂型改进及提高质量水平，推动中医药走向世界，并最终实现中药现代化具有重要意义。LC-MS在中药现代化中的应用液相色谱-23ThankYou!ThankYou24LC-MS在药物代谢动力学中的应用LC-MS在药物代谢动力学中的应用25要点：(删除4-6片)一、几种现代分析方法介绍与比较二、LC-MS在药物动力学中的应用三、LC-MS在代谢物研究中的应用四、LC-MS在现代新药研究中的应用1、高通量筛选2、中药现代化要点：(删除4-6片)26体内药物分析中的现代分析方法与技术(标题一致性)一、气相色谱-质谱联用技术（GC-MS)*二、液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)*三、液相色谱-核磁共振联用技术(LC-NMR)四、毛细管电泳免疫分析(CEIA)五、柱切换高效液相色谱法六、高效毛细管电泳法(HPCE)体内药物分析中的现代分析方法与技术(标题一致性)一、气相色谱27LCMS在药物代谢动力学中的应用课件28气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）特点：灵敏度高、分析速度快、鉴别能力强；但它受到药物分子的极性和热稳定性等限制，要求分子具有挥发性或通过衍生化提高分子的挥发性，因此其有明显的局限性。气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）特点：29液相色谱-核磁共振联用技术(LC-NMR)特点：能提供最大量的分子结构信息，在体内药物分析中对代谢产物的鉴定具有显著优势，但是在做NMR分析前必须做大量的分离纯化工作，不利于样品的快速分离；另外，NMR检测灵敏度低是LC-NMR技术的瓶颈。液相色谱-核磁共振联用技术(LC-NMR)特点：30液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)基本组成：HPLC装置、接口装置与离子源、质量分析器。液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)基本组成：31目前商品化LC-MS仪主要用大气压离子化接口（API）。API不仅是一种较好的接口技术，同时也是一种离子化方法，该技术使样品的离子化在处于大气压条件下的离子化室中完成。目前商品化LC-MS仪主要用大气压离子化接口32API的操作模式分三种：一、电喷雾离子化（ESI)二、气动辅助电喷雾离子化三、大气压化学离子化（APCI)API的操作模式分三种：33液相色谱-质谱联用技术(LC-MS）特点：样品前处理简单，无需衍生化，适用范围广将色谱的高分离能力与质谱的高检测灵敏度、定性专属性集于一身随着接口装置和离子化技术的发展成熟，该技术在体内药物分析中逐渐发展成为一种常规的分离检测方法液相色谱-质谱联用技术(LC-MS）特点：34LC-MS在药物动力学中的应用介绍药物动力学研究，需对生物样品中的微量乃至痕量成分定量分析。而当今的药物研制日趋低剂量，使常规的分离检测技术难以满足复杂介质中痕量成分准确定量的要求。LC-MS技术的高灵敏度使之在这一领域的应用日趋广泛并趋于常规化。LC-MS在药物动力学中的应用介绍药物动力学35举例：闫小华等人用LC/MS联用法测定人血浆中氟西汀的浓度：举例：闫小华等人用LC/MS联用法测定人血浆中氟西36色谱条件色谱柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)柱温：30℃流动相：10mmol/L醋酸铵缓冲液-甲醇（20：80）流速：1.0ml/min色谱条件色谱柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)37质谱条件离子检测方式：选择性离子检测；离子极性：正离子离子化方式：气动辅助电喷雾离子化检测对象：苯磺酸氨氯地平传输区电压：100V干燥气流速：10L/min雾化室压力：40psi干燥气温度：350℃质谱条件离子检测方式：选择性离子检测；38以往文献中均以紫外检测器检测氨氯地平的浓度,但口服10mg氨氯地平后体内最高血浆浓度不到10ng·mL–1,最低只有0.2ng·mL–1,远远超出了紫外的检测范围,而本实验采用LC-MS法测定,结果最低检测浓度为0.12ng·mL–1，本法简便,灵敏,能满足测定血浆中药物浓度的要求。以往文献中均以紫外检测器检测氨氯地平39LC-MS在代谢物研究中的应用在新药开发过程中，为了预防潜在的毒性，测定是否有代谢物和已知药物相关，是否和原药具有相同的治疗作用或对其他治疗有内在的活性，有必要对代谢物进行结构鉴定。LC-MS在代谢物研究中的应用在新药40举例：陈怀侠等人运用液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(LC-MSn)联用技术研究了樟柳碱大鼠肝匀浆中的代谢物：举例：陈怀侠等人运用液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(L41色谱条件：色谱柱：C18柱(150mm×2mmi.d.,5μm),流动相：甲醇/0.01%三乙胺溶液(用甲酸调节pH3.5)(60∶40,V/V)柱温：40℃流速：0.2mL/min。色谱条件：色谱柱：C18柱(150mm×2mmi.42质谱条件：采用电喷雾离子化方式,检测离子为正离子。离子源喷射电压5.0kV,毛细管电压45V,毛细管温度200℃,氮气为鞘气,其流速40个单位,其它通过碰撞诱导解离获得母分子离子的多级质谱,优化的多级质谱相对碰撞能量为30%。采用全扫描一级质谱及其源内碰撞诱导解离、全扫描二级质谱及三级质谱等方式进行测定。质谱条件：采用电喷雾离子化方式,检测离子为正离子。离43依据上述实验方法,在樟柳碱的大鼠肝匀浆培养液中发现了原药及其代谢物。本实验首先总结出樟柳碱电喷雾质谱的电离和裂解规律,由原药的特征碎片及特征中性丢失为依据,通过