导学案 微生物的分离和纯培养

微生物的分离和纯培养导学案【课前预习】（10分钟）凡事预则立，不预则废一、学习目标1.学习划线接种法，进行微生物的分离和纯培养2.运用火焰灼烧法进行灭菌。3.通过菌落特征的观察，识别微生物。4.德育目标：通过微生物培养技术的学习，体会生物技术对人类的巨大贡献。二、问题与思考大肠杆菌的分离和纯培养：1.材料器具：含的混合菌液；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、水；酒精灯、接种环、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、培养皿、试管等。2．活动程序：（1）配置培养基（下节课学习）（2)接种：采用进行接种。准备：将所有实验器材全部放入超净工作台或无菌箱，紫外灯照射。消毒液清洁双手，换好工作服、鞋帽，戴上口罩。接种环烧灼灭菌：接种环环端在酒精灯火焰上，再将接种环斜放，沿环向上，烧至，来回数次。试管口灭菌：在附近冷却接种环。左手拿取，让缓缓通过火焰灭菌。沾取混合菌液：将接种环伸入试管内，沾取一环混合菌液。接种：左手持并开启一条缝隙，右手将接种环迅速，进行划线。划线方法：，。（3）培养：划线完毕后，盖上，将培养皿，放入的恒温箱中培养24h.（4）观察记录（5）纯化培养：挑取单个大肠杆菌菌落接种到培养基，仍在37℃恒温培养箱中培养24h，可获得大肠杆菌的纯培养。如果发现有杂菌，则应进一步划线挑菌直至纯化。（6）结果分析：三、背景资料“微生物学之父”——巴斯德路易斯﹒巴斯德（1822--1895）法国著名的微生物学家。他在同分异构现象、微生物发酵、细菌培养和疫苗等方面的研究中取得重大成就，奠定了工业微生物学和医学微生物学的基础，并开创了微生物生理学，从而被后人誉为“微生物学之父”。巴斯德还把微生物发酵原理广泛应用于指导工业生产，开创了“微生物工程”，又被人们尊称为“微生物工程之父”。巴斯德的主要贡献之一是他彻底地否定了统治长久的微生物“自然发生”学说。该学说认为一切生物是自然发生的，可以从一切没有生命的材料中产生。巴斯德设计了具有细长曲颈的玻璃瓶（现称巴斯德烧瓶），他把有机物浸汁装入瓶内煮沸灭菌后，瓶口虽然开放，瓶内的有机物却不腐败。一但将瓶颈打破，或将瓶内的浸汁倾湿管壁厚再倒回去，瓶内的有机物浸汁就会腐败变质。这个实验现象否定了自然发生说，表明没有生命的物质中不能自然产生微生物。巴斯德的另一个重要贡献是对微生物发酵研究的成就。他所工作的法国里尔市盛产啤酒和葡萄酒，酒类的腐败问题干扰着生产的发展。巴斯德通过多年的研究证明了酒、醋的酿造师微生物引起的发酵，而不是发酵产生了微生物，并且不同的发酵是由不同种类微生物引起的。这个研究成果给当时的法国葡萄酒业在酿造过程中出现的酒变酸、变味等问题找到了原因。为了防止产品的腐败，提出了著名的巴氏灭菌法：先将需要灭菌的物质加热到65℃（30分钟）或72℃（15分钟），然后迅速冷却到10℃以下。这样既不破坏营养成分，又能杀死细菌的营养体。这一发明拯救了法国的酿酒业。直到今天，巴氏灭菌在乳制品和酒制品等食品工业中仍在使用。巴斯德还通过研究弄清了蚕病的原因，并提出了合理可行的防治措施，从而使法国的丝绸工业摆脱了困境。巴斯德还研究了动物的炭疽病、鸡的霍乱病等证明了传染病是由病原微生物引起的，并在世界上最早成功研制出炭疽病减毒活性疫苗。1881年，制成巴斯德狂犬疫苗。巴斯德一生为微生物学、免疫学、医学等学科的发展做出了不朽的贡献。【课堂互动学习】一、情境导入：观看录像了解微生物培养技术相关。二、学导结合：（一）无菌技术操作的讨论：1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。2.请你判断以下材料或用具是否需要毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：（1）（2）需要灭菌；（3）需要消毒。（二）平板划线操作的讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，为什么仍然需要灼烧接种环吗？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。三、总结反思：四、巩固提高1.将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放人37℃恒温箱的目的是（）A．对比观察培养基有没有被微生物利用B．对比分析培养基上是否生有杂菌C．没必要放人未接种的培养基D．为了下次接种时再使用2.有关平板划线操作正确的是（）A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C．将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养3.培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是（）①糖、有机酸等②CO2、碳酸盐③蛋白质④无机氮化物A.①③B.①④C.②③D.②④4.不同物理形态的培养基其作用不一样，用于菌种分离、鉴定时可选用（）A．液体培养基B．固体培养基C．半固体培养基D．以上都可以5.对灭菌的理解不正确的是（）A．消灭杂菌B．防止杂菌污染C．灭菌必须在接种前D．培养基和发酵设备都必须灭菌6.下列操作与灭菌无关的是（）A．接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双手B．接种前用火焰烧灼接种针（环）C．培养基在50℃左右时搁置斜面D．在酒精灯的火焰旁完成7.细菌培养基常在121℃压力锅中灭菌。如果只是在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活（）A．大肠杆菌B．一种青霉C．枯草杆菌芽抱D．沙门氏菌8.高温灭菌的原理是（）A．每种微生物生长的最适温度是一定的B．微生物对于高温环境不适应C．高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动D．高温降低了环境中氧的浓度9.在斜面培养基上接种时，其正确的操作顺序是（）①用左手大拇指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种的斜面试管，管口并齐，使斜面向上成水平状态②右手拧松棉塞，但不取下③在火焰边用右手无名指和小指夹两个棉塞，将它们取下，同时左腕转动，灼烧管口一周④将接种环伸人管内，让环先接触培养基上未长菌的部位，使环冷却，然后轻轻挑取少量菌体⑤右手拿接种环，在火焰上灼烧灭菌⑥在火焰旁边迅速将沾有菌体的接种环伸到培养基的底部，由里向外轻轻画蛇形细线⑦抽出接种环，再用火焰灼烧管口，并在火焰上方将棉塞塞上A．①②③④⑤⑥⑦B．①②⑤③④⑥⑦C．①③②④⑤⑥⑦D．②③①④⑤⑦⑥10.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是（）A．对接种环进行灼烧处理B．带菌培养基须经高压蒸气灭菌锅灭菌后才能倒掉C．带菌培养基须经加热后才能倒掉D．接种后双手须经肥皂洗净，再用75％的酒精棉球擦拭11．（验证性实验）在微生物实验中，一般用琼脂培养基来培养细菌等微生物，它在加热后呈液化的溶胶状态，在室温下又呈半透明的凝胶状态。在凝胶状态下其表面及内部的不同部位可生长大量的不同代谢类型的肉眼可见的细菌菌落。请用下列材料和用具，设计一个实验来判定某种细菌的异化作用类型。(l）材料用具：某种细菌菌种、琼脂试管培养基2支、无菌接种设备、恒温箱、水浴锅。（2）写出实验过程：①②③（3）实验可能会出现哪些结果？并对每一结果做出相应的鉴定。①②③④答案1——5BDABA6——10CCCBC11．(2）①将2支琼脂培养基试管置于水浴锅中加热熔化；②待培养基冷却至凝固前，用无菌接种设备将某细菌接种于一试管培养基中，摇动试管，使细菌均匀混于培养基内，另一支试管不接种作对照；③将恒温箱内调至适宜