实验五、维生素C的定量测定课件

实验五—维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚法）一、目的与任务学习维生素C2，6-二氯酚靛酚定量测定法的原理和方法。进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。掌握果蔬类样品的处理及数据分析了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，又称抗坏血酸。对物质代谢的调节具有重要的作用。维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量丰富。二、实验原理易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。酸性溶液(pH＜4)较稳定，中性以上极不稳定。对光、热、金属离子（铁、铜）敏感。容易被氧化。维生素C的特性抗坏血酸分子中存在烯醇式结构

因而具有很强的还原性，氧化失去两个氢原子而转变成脱氢抗坏血酸。结构2,6-二氯酚靛酚钠盐特点

在酸性环境中氧化型2，6-二氯酚靛酚呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。2,6-二氯酚靛酚钠盐（C12H6O2NCl2Na)染料具有氧化性，可氧化抗坏血酸而其本身被还原为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。三、材料、试剂、器材准备试剂配制：材料：苹果、梨、青椒、VC饮料等1％、2％草酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液：称取0.21g碳酸氢钠，0.26g2,6-二氯酚靛酚，溶于250ml蒸馏水中，稀释到1000ml.过滤，装入棕色瓶内，置冰箱内备用，保存不超过3天。每次临用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。标准抗坏血酸溶液：准确称取纯抗坏血酸结晶100mg溶于1％草酸溶液定容到100ml。装入棕色瓶中贮存冰箱内。器材准备：微量滴定管（5ml）、匀浆器、离心机等四、操作方法样品制备：

水洗干净整株新鲜蔬菜或水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。称取5g，加入20ml2％草酸，匀浆，定容至50mL，8000rpm×10min离心，留上清。为什么要用2%草酸溶液配制样品？量取10ml样品提取液于锥形瓶中。用微量滴定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，呈微粉红色色，持续15秒钟不退色为终点，记录所用2，6-二氯酚靛酚的ml数。另取10ml2％草酸做空白对照滴定。样品及空白同时各做2份。滴定：整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被其他还原剂氧化。每次滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料应在1-4ml间。样品含VC太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。每个小组需测出8个数据，完成后数据教老师检查：标定、样品测定、1%草酸对照、2%草酸对照各2次。特别注意其他事项干扰滴定因素有：色素：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色。还原剂：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。

某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。注意各管滴定终点均为微红色五、结果计算

维生素C含量（mg/100g样品）=

VA为滴定样品提取液所用的2,6-二氯酚靛酚溶液的mL