实验三 酵母核糖核酸的提取及测定

实验三酵核核酸的提取及测定—习报告一研背生物大分子物质通常是指动物植物微生物进行新陈代谢时所产生的蛋白质和核酸等有机化合物它仅是生物科学工者研究者的重要对象与化学医学和食品等工业部门有密切关系在科研和医学方面讨结构与功能防某些疾病时常需要较纯的生物大分子物质这物质往往与自然界存在的各种不同的化合物结合在一起或自身之间相互结合在一起，离体后稳定性较差，含量偏低，且提取的材料复杂，因此纯化的方法也很多。微生物是工业上大量生产核酸的原料中酵母最为理想次实验以干酵母粉为实验材料，提取，测定其含量。二研目掌握核酸分离纯化的基本设计思想及主要操作细节和生物制品开发的基本思路。三研策酵母细胞中RNA通与蛋白结合。要提取RNA就要破细胞壁，让它释放出来。浓盐法通过改变细胞膜的通透性释放出胞内物质，然后沸水浴使R水酶失活。再通过调节pHRNA充沉淀，洗涤，干燥，量。四研方及行分浓盐法是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使NA释放出来。提取RNA时注意掌握温度，接在90~100浸提，避免在20~70℃之间的时间过长，磷二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA降解而降低提取率。洗涤沉淀时要反复抽提，离心以纯化RNA测定提取的核酸含量，只需测定组成核苷酸的任意一种组分即可。碱基在有吸收，采用紫外吸收法可测定核酸含量。五具实设、所主要材料：食品用干酵母粉；试剂：10%NaCl,6MHCl,乙氨水，沉剂钼酸铵+193ml水过氯酸仪器设备烘离机天紫外分光光度计液器恒温水浴锅玻匀浆器，计主要器皿：研钵，离心管，容量瓶25ml50ml；具塞试管；三角瓶；小烧杯。、具体操作步骤

提取：取酵母粉，于研钵中小心研成面粉状粉末，转移至三角瓶。量取倒三角瓶，使酵母粉完全彻底悬浮浸润高度盐溶液改变细胞膜的通透性释放胞内物质）小心置于沸水浴，浸提40minRNA解酶失活）分离：出上述提取液，冰浴冷却治酶复性）转入离心管，3500r/min,提取上清液。沉淀RNA：倾倒上清液于小烧杯中，冰浴冷却至1℃以下后拿去）用6M在搅拌下调节（等电点时RNA溶解度最小，沉淀量最大调节好后继续于冰浴中放置使沉淀颗粒变大。洗涤纯：将冰浴后的悬浮液轻柔彻底地充分搅拌，转入离心管离心15min。弃上清液，在离心管中用95%乙醇洗涤沉淀三次，每次用约15ml乙充分彻底悬浮搅拌洗涤，离。干燥：后一次洗涤RNA沉后，立即将预先在80℃烘箱内干燥的硫酸纸取出，精确称重后折成框（半厘米高药将RNA沉从离心管内转出，均匀涂布于硫酸上。置于80烘箱内使淀充分干燥，避免称误)干燥后的硫酸纸与沉淀一起称重。将大部分RNA制小心转移至玻璃匀浆器，记录剩余制品和硫酸纸总重量。紫外法量测定：提取的RNA小心转入玻璃匀浆器后，加入蒸水，沉稳垂直地匀浆至均一的胶体溶液。转移至洁净小烧杯。用10ml左的蒸馏水分次清洗匀浆器一并转入烧杯意烧杯刻度不能超过）混匀烧杯内RNA溶，氨调节。转入容瓶，蒸馏水分次清洗一并转入。定容，混匀取两支试管按下表配制：管号AB

RNA溶5ml5ml

H5ml--

沉淀剂--5ml

）各自混匀，冰浴转移入离心管，3500r/min离10min取上清液于另两支试管，分别混匀。各取0.5ml于个容量瓶，蒸馏水定容。紫外分光光度计下测定OD。260、预期原始数据记录）RNA的取硫酸纸质量______;0

干燥后硫酸纸与沉淀总质量m______;1转移后剩余制品与硫酸纸总质量m_______;2RNA总品质量=1

0定量样品质量=1

2RNA制品纯=）紫外法测RNA含量管号OD260

产率=________AB六、质疑及相关思考、作为商品开发，我们更多的是应该考虑市场需求的共性还是个性？为什么？相应，如何完成相关欲开发产品的定位？答：我应更多地考虑市场需的个性。随着社会的发展，市场由卖方市场转变为买方市场，商品丰富，货源充沛，消费者有了挑选商品的余地，而卖方之间在质量、价格、促销等方面展开竞争在争激烈的市中若有优于其他产品的特性并成功定位给自己贴上合理的标签，就能够抓住消费者的心，否则就只能在莫大的市场淹没。产品的定位应追求差异化如物制剂的开发从量上比其它制剂纯度更高格相对便宜等，都是合理的产品定位。、基于生物制品的产业开发，探讨实验室的科学研究和大学工业生产之间的关系和同之处？答实室是一个较小的环境大都可以在比较好的条件下进行实验在应用到工业生产的大环境中时可能会遇到更多细节方面的问题如器设备的精度等业产选择方案要尽量低成本少量物品的成本对实验室不是主要