发光免疫检测技术的临床应用及其应注意的问题课件

发光免疫检测技术的临床应用

及其应注意的问题发光免疫检测技术的临床应用

及其应注意的问题1由于化学反应（通常是氧化）产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象。化学发光

（Chemiluminescence）生物发光和化学发光均属于冷光，即发光不是由于发光体温度升高所至，发射波长也与其温度无关由于化学反应（通常是氧化）产生电子能级处于激发态的物质，后者2按化学反应类型化学发光的分类酶促化学发光：辣根过氧化物酶系统碱性磷酸酶系统黄嘌呤氧化酶系统非酶促化学发光：

吖啶酯系统草酸酯系统三价铁-鲁米诺系统闪光（Flash）:按发光持续时间发光时间在数十分钟以上，如：HRP-Luminol系统AP-AMPPD系统黄嘌呤氧化酶系统无须原位进样、以速率法测量。发光时间在数秒内，如吖啶酯以原位进样(InSituInjector)和时间积分法测量辉光（Glow）:按化学反应类型3时间发光信号辉光坪区速率法测量原位进样积分法测量闪光尖峰闪光与辉光及其测量方式的差别时间发光信号辉光坪区速率法测量原位进样积分法测量闪光尖峰闪光4鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统H2O2+NH2OONHNHN2OH-HRPNH2CO2-CO2-+Photon(425nm)ROHROHNSRBOHOH增强剂（Enhancer）商业化产品中常见的化学发光系统鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统H2O2+NH2OONH5AMPPD及其衍生物的化学发光系统+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3商业化产品中常见的化学发光系统AMPPD及其衍生物的化学发光系统+*光子(477nm)AP6CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光子+CO2+CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO商业化产品中常见的化学发光系统吖啶酯化学发光系统CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光7发光信号检测光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD）结构简单、性能稳定但灵敏度低、线性范围较窄。主要特点原理光信号光电转换器件电压或电流信号放大发光信号检测光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD）结构简8单光子计数器是目前高灵敏度发光分析仪的核心部件光电倍增管高压高速放大器高速比较器高速分频器发光样品产生光子激发光阴极产生光电子在阳极上形成较强信号脉冲信号相对发光单位数字脉冲(RLU)在各打拿极之间得到能量和数目的倍增单光子计数器是目前高灵敏度光电倍增管高压高速放大器高速比较器9单光子计数式发光检测仪计算机打印机发光仪控制模块发光仪执行模块控制器程控高压计数/贮存器单光子计数器样品运动/定位装置程控自动门锁及检测装置原位注射泵单光子计数式发光检测仪计打发光仪控制模块发光仪执行模块控制器10光生物学技术的应用范围军事侦测公安稽查卫生检疫药物筛查医学诊断环境检测航天遥感生命科学……

已成为现代生物技术最活跃的领域之一光生物学技术的应用范围军事侦测已成为现代生物技11光生物学检测技术的优越性彻底消除了放射性危害无半衰期限制，试剂稳定性和有效期大大延长容易实现连续、动态、重复测定适合于复合标记系统进行多指标并行测定操作简单，反应速度快，容易实现自动化灵敏度和线性范围超过以往技术光生物学检测技术的优越性彻底消除了放射性危害适合于复合标记系12几种标记/检测技术灵敏度的比较酶标荧光放免发光灵敏度(mol/L)10-1810-1510-1210-9几种标记/检测技术灵敏度的比较酶标荧光放免发光灵敏度(mol13几种标记/检测技术线性范围的比较酶标荧光放免发光线性范围105104103102几种标记/检测技术线性范围的比较酶标荧光放免发光线性范围1014几种标记/检测试剂的有效期比较酶标荧光放免发光有效期（月）1815129630几种标记/检测试剂的有效期比较酶标荧光放免发光有效期（月）115020,00040,00060,00080,000100,000试剂盒仪器特殊防护治理污染人民币人民币三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用放免酶标发光020,00040,00060,00080,000100,016抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物质的球蛋白。免疫分析技术基本原理利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。免疫分析技术基本17免疫测定技术分类反应结束后是否需要分离均相法（Homogeneous）非均相法（Heterogeneous）免疫测定技术分类反应结束后是否需要分离均相法非均相法18均相法（Homogeneous）免疫凝集法：自然凝集：血型测定肥达氏反应；敏化凝集：血球凝集法凝胶（微粒）比浊法免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法，酶--辅酶（亚基）配位法荧光偏振法，荧光共振法吖啶酯水解法，生物传感器均相法（Homogeneous）免疫凝集法：免疫扩散法；免疫19非均相法（Heterogeneous）免疫印迹（Western-blot）：基因表达分析、HIV感染确认实验免疫组织化学技术：原位基因表达分析、临床病理学分析纸片法：早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测放射免疫法（RIA）：沉降法（放免）、固相法（免放，IRMA）荧光免疫法（FIA）；酶联免疫法（EIA，ELISA）酶联荧光法（FEIA）、化学发光法（LIA）酶联化学发光法（ELIA）、时间分辨荧光法（DELFIA）、电化学发光法（ECLIA）；……非均相法（Heterogeneous）免疫印迹（Wester20双抗体夹心法（三明志法）原理固相支持物表面包被抗体标记抗体待测物双抗体夹心法（三明志法）原理固相支持物表面包被抗体标记抗体待21夹心法的剂量--反应关系曲线信号强度（Y）线性范围待测物浓度（X）Hook(前滞)效应分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）：S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。功能灵敏度：测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。线性范围：（分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度相关系数≥0.99的曲线范围夹心法的剂量--反应关系曲线信号强度（Y）线性范围待测物浓度22竞争法的原理固相支持物表面待测物包被抗体标记抗原竞争法的原理固相支持物表面待测物包被抗体标记抗原23竞争法的剂量--反应关系曲线待测物浓度（X）信号强度（Y）线性范围分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）：S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值功能灵敏度：测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度线性范围：

（分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度相关系数≥0.99的曲线范围竞争法的剂量--反应关系曲线待测物浓度（X）信号强度（24间接法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗体（二抗）间接法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗体25俘获法原理俘获抗体（二抗）待测抗体标记抗原包被体俘获法原理俘获抗体待测抗体标记抗原包被体26双抗原夹心法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗原双抗原夹心法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗原27间接包被夹心法原理包被体待测抗原包被连接物标记抗体俘获抗体特点：所有试剂盒均采用同一包被物和包被工艺间接包被夹心法原理28发光免疫分析基本操作步骤（一步法）待测样品标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物发光底物仪器检测包被抗体或抗原的反应管反应30-60分钟反应0-5分钟发光免疫分析基本操作步骤（一步法）待测样品标记抗体或抗原29发光免疫分析基本操作步骤（二步法）待测样品洗涤去除未结合的反应物发光底物仪器检测包被抗体或抗原的反应管反应30-60分钟反应0-5分钟标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物反应30-60分钟发光免疫分析基本操作步骤（二步法）待测样品洗涤去除未结合30发光免疫分析技术的现状及应注意的问题发光免疫分析技术31目前已商品化的光生物学标记检测技术整体性能比较技术类型标记、反应体系主要优点主要不足化学发光酶促过氧化物酶、鲁米诺、氧化剂、增强剂等测量方式简单（速率法）成本较低、灵敏度较高工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移螺旋金刚烷环氧化物、碱性磷酸酶测量方式简单（速率法）灵敏度较高非酶促吖啶酯、过氧化氢灵敏度较高试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积分法）需原位进样(InSituInjector)仪器成本及维护费用较高试剂成本较高时间分辨荧光铕（Eu）、镝(Dy)、钐（Sm）、铽（Tb）、等络合物脉冲光源激发灵敏度较高、试剂较稳定测量方式复杂（脉冲激发、间歇式测量、流动池）仪器成本及维护费用高环境及样品中同类元素可导致本底干扰电化学发光钌(Ru)的络合物脉冲电场激发时间分辨荧光（也称时间延迟光致发光）：TimeResolvedFluorescence（TimeDelayedPhotoluminescence）解离增强荧光免疫分析（DEFIA）电化学发光（也称场致发光）：Electrochemiluminescence（Electroluminescence）化学发光：Chemiluminescence目前已商品化的光生物学标记检测技术整体性能比较技术类型标记32例如：电化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.005mIU/L第四代化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.001mIU/L原因在于抗体的亲合力，而不是检测技术。筛选抗体、屏蔽干扰，生产工艺、管理水平和技术服务是试剂生产的关键这些发光检测技术的灵敏度及线性范围都已经接近了免疫反应的极限。灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰免疫反应的因素，而不是检测技术。片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强弱，不仅毫无意义，而且也是荒谬的。例如：电化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.005mIU33发光技术——临床免疫分析划时代的进步以TSH(促甲状腺素)为例第一代TSH检测试剂盒普通放免功能灵敏度1-2mIU/L基本无法测到正常值下限以下的血清TSH浓度对甲亢的诊断意义不大固相放免功能灵敏度0.1-0.2mIU/L在甲亢的诊断中开始发挥作用第二代TSH检测试剂盒发光免疫功能灵敏度0.01-0.02mIU/L成为甲亢诊断的首选指标之一发光免疫功能灵敏度0.001-0.002mIU/L一系列新的临床现象改写了垂体甲状腺轴的调控状态第三代TSH检测试剂盒第四代TSH检测试剂盒发光技术——以TSH(促甲状腺素)为例第一代普通放免固相放免34目前商品化发光免疫分析产品的几个特点大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式多数采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使灵敏度进一步提高，反应时间大大缩短使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线部分产品采用流动池测定方式(适合于闪光型发光或电化学发光)目前商品化发光免疫分析产品的几个特点大多采用全自动工作方式，35流动池检测方式示意图检测器检测池负压泵废液四通阀冲洗液样品管计量泵干燥空气原位进样泵氧化剂流动池检测方式示意图检测器检测池负压泵废液四通阀冲洗液样品管36使用商品化发光免疫分析产品可能遇到的几个问题与以往方法（放免等）在检测指标的正常值及临床意义上的差异。如：免疫源性胰岛素与真胰岛素、HCG、性激素等采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较大差异。（单抗特异性好，受干扰小，因此测值低）不同厂家产品测定结果之间一致性差（未与国家标准品比对）。所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完善。部分产品不显示原始数据，无法监控其准确性。使用商品化发光免疫分析产品与以往方法（放免等）在检测指标的正37免疫分析结果的干扰因素温度氧化剂还原剂光线磁场金属离子防腐剂杂质本底物质免疫分析结果的干扰因素温度氧化剂还原剂光线磁场金属离子防腐剂38同一干扰因素对不同检测方法的不同影响待测物包被（结合）抗体放免法免放或发光法标记抗原TBG离心沉降洗涤祛除以甲状腺素结合蛋白（TBG）干扰竞争法测定T3为例信号↑结果↓信号↓结果↑同一干扰因素对不同检测方法的不同影响待测物包被（结合）放免法39使用商品化发光免疫分析产品必须做好的几个工作在厂家提供的数据基础上，自行建立正常参考值系统。明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况如：小分子激素之间，以及与自身前体或代谢物之间的交叉胰岛素与C-肽、胰岛素原之间的交叉FSH、LH、HCG之间的交叉。充分利用现有国标参考品校正结果（注意防腐剂干扰）（可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得到）自行建立多点质控（2-3点）监控每次实验的准确性。尽可能避免干扰因素采样：清洁样品管（防止还原剂干扰）、不使用酶抑制剂、及时送检实验室：恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修使用商品化发光免疫分析产品在厂家提供的数据基础上，自行建立正40正常值参考的意义及灰色区域的存在如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内20%）内，则需要进一步追踪检查。95%或99%-20%+20%正常值参考的意义及灰色区域的存在如果测定结果处于灰色41自身基础数据——最佳“正常参考值”对于患者来讲，最佳的参考值是自己以往的测定数据，即自身对照；因此积累病人的基础数据非常重要。尤其是性激素、生长激素、胰岛素等具有周期性分泌或释放规律的激素。时间FSH卵泡期排卵期黄体期月经期正常人平均值变化规律正常参考值范围某一患者变化规律（无排卵峰）自身基础数据对于患者来讲，最佳的参考值是自己以往的测定数据，42保证检验结果准确性的对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度检验医师必须牢记检验医师给临床所提供的一切服务仅限于保证检验结果准确性的不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终43化验结果与临床不符的原因由于个体差异或不明干扰因素的存在，总有少数病例的化验结果与其临床表现不符操作失误、仪器故障、试剂失活等因素某些夹心一步法试剂往往存在前滞效应药物以及其它基础疾病的干扰排除这些因素后重复测定或重复送样用同试剂盒的校准品A稀释后再重新测定及时与临床沟通结合说明书综合判断原因解决化验结果与临床不符的原因由于个体差异或不明干扰因素的存在，总44不同实验方法，或同一方法的不同厂家产品之间，其测定结果和临床正常值都会有所差异不同实验室环境和不同人群条件下，其测定结果和临床正常值也会有所不同在厂家提供的正常参考值基础上建立自己的正常参考系统待测物质的降解及其与血清蛋白结合状态的改变，某些化验项目的检测结果往往受标本存放时间及其贮存条件的影响及时采样、送检，实验室及时完成化验，严格按照试剂盒说明书要求存放不同实验方法，不同实验室环境和不同人群条件下，在厂家提供的正45常见临床免疫检测指标的意义及其限制因素常见临床免疫检测指标的意义46激素类型氨基酸：甲状腺激素蛋白（肽）：甲状旁腺激素、下丘脑激素、垂体激素、降钙素、胎盘激素、心肌激素、胃肠激素类固醇：性激素和皮质激素儿茶酚胺：肾上腺素下丘脑-垂体-内分泌轴及其调节关系长反馈：垂体或下丘脑激素受靶细胞分泌激素的反馈调节，以负反馈为主，但排卵时雌激素为正反馈。短反馈：垂体激素对于下丘脑的反馈负反馈超短反馈：下丘或垂体激素直接负反馈自身的合成和分泌激素类型下丘脑-垂体-内分泌轴及其调节关系长反馈：垂体或下47类固醇激素的合成男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。类固醇激素的合成男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成48甲状腺功能指标评价甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3＞FT4＞TT3＞TT4甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH＞TT4＞FT3＞TT3发光法TSH、FT3、FT4提高了灵敏度，使得其临床意义大于TT4和TT3两步法操作时间长灵敏度差准确性差类似物法操作时间短灵敏度较好准确性较好反向竞争法（标记抗体）操作时间短灵敏度更好准确性更好第一代第二代第三代血清FT3、FT4试剂盒的发展（消除结合蛋白对测定的影响）TGAbTMAb=TPO抗体甲状腺功能指标评价甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3＞FT49其生理作用需要通过生长介素(SM)介导SM也称胰岛素样生长因子(IGF)，主要在肝脏及多种GH靶细胞合成SM-C即IGFI，结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。生长激素（GH）生长激素紊乱生长激素缺乏症（侏儒）巨人症及肢端肥大症GH测定的临床意义垂体腺瘤、肾癌、肺癌运动刺激试验药物刺激试验（胰岛素-低血糖试验）GH分泌的抑制试验其生理作用需要通过生长介素(SM)介导生长激素（GH）生长激50胰岛素免疫源性胰岛素：采用多抗或普通单抗与胰岛素原和C肽有交叉正常值较高糖尿病分型：Ⅰ型空腹胰岛素低，OGTT后变化缓慢，甚至无变化；Ⅱ型空腹高胰岛素，OGTT后胰岛素释放延迟，总量不低。肝硬变：空腹胰岛素高于正常2－3倍。OGTT各个时相胰岛素升高。胰岛素瘤：静脉注入亮氨酸后血中胰岛素水平明显升高。甲亢：初期空腹胰岛素水平高，OGTT与正常人相似；长期严重甲亢可导致胰岛β细胞功能衰竭，发展为糖尿病。真胰岛素：采用胰岛素原掩蔽性胰岛素单抗与胰岛素原和C肽无交叉正常值较低胰岛素免疫源性胰岛素：糖尿病分型：Ⅰ型空腹胰岛素低，OGTT51C-肽胰岛素升高C肽正常，外周血C肽／胰岛素比值降低。糖尿病如患者存在胰岛素抗体或用外源性胰岛素治疗，则改为测定C肽肝硬化生理性升高：禁食及大量活动病理性升高：糖尿病，增高数值和糖尿病的严重程度有关胰高血糖素胰高血糖素静脉注射实验胰高血糖素瘤鉴别评价糖尿病人胰岛功能C-肽胰岛素升高C肽正常，外周血C肽／胰岛素比值降低。糖尿病52胰岛素抗体GAD是Ⅰ型糖尿病的关键始动靶自身抗原其抗体是Ⅰ型糖尿病及前期的重要标志长期用胰岛素的病人可产生未用过胰岛素的I型糖尿病人胰岛素抗体阳性是自身免疫性细胞损害的标志谷氨酸脱羧酶（GAD）抗体与抗胰岛细胞抗体（ICA）相比，GAD-Ab阳性率高、持续时间长、测定方法简单，有很好的临床预见性，可替代ICA。胰岛素抗体GAD是Ⅰ型糖尿病的关键始动靶自身抗原长期用胰岛53性激素LHFSH正常婴儿和小孩极微；在青春期前开始分泌；女性绝经后明显升高。成年男性含量比较恒定，老年男性因睾丸功能衰减，含量大大升高。垂体瘤切除术后患者LH和FSH减少，估计垂体瘤手术效果有一定价值性腺发育不良垂体瘤某些癌症（肺癌）慢性肾衰腺皮质激素治疗后异位激素分泌综合征……垂体性性功能衰退神经性厌食使用性激素溢乳闭经征青春期延期……性激素LH正常婴儿和小孩极微；在青春期前开始分泌；女性绝经后54催乳素瘤好发于女性表现为泌乳闭经多毛痤疮不育垂体催乳素（hPRL）垂体催乳素瘤、月经异常和不孕的病因鉴别，应激刺激可引起hPRL的分泌。男性以性功能减退阳萎不育垂体压迫症状为主偶见泌乳。催乳素瘤好发于女性垂体催乳素（hPRL）垂体催乳素瘤、月经异55睾酮睾丸间质细胞瘤真性男性性早熟女性多毛症皮质醇增多症完全性雄性激素不应综合征……原发生睾丸功能减退垂体前叶功能减退男性不育高hPRL血症红斑狼疮骨质疏松慢性肝病慢性肾衰……血液中睾酮98%与蛋白结合，只有游离态具有生物活性女性性早熟男性乳房发育红斑狼疮肝硬变子宫内膜癌乳腺癌糖尿病孕妇……女性性发育不全多囊卵巢综合症葡萄胎妊娠高血压症柯兴氏综合症卵巢囊肿……雌二醇灵敏度要求高睾酮睾丸间质细胞瘤原发生睾丸功能减退血液中睾酮98%与蛋白结56多胎妊娠17α-羟化酶缺乏症子宫内膜腺癌先兆子痫妊娠高血压妊娠合并糖尿病胎儿宫内生长迟缓卵巢颗粒层膜细胞瘤……无排卵性子宫功能性出血闭经不孕早产黄体功能不全异位妊娠……孕酮血浆中孕酮绝大部分为结合型，极小数为游离型。孕酮与黄体及胎盘关系密切，用于监测排卵、黄体功能以及判断妊娠继续。多胎妊娠无排卵性子宫功能性出血孕酮血浆中孕酮绝大部分为结合型57小分子性激素测定方法的进展（消除蛋白结合和类似物/前体/代谢产物的干扰）直接测定法经典方法消化样品↓萃取有机相↓分子筛柱分离各类甾体↓测定血清直接测定+高特异性单抗+结合蛋白屏蔽技术小分子性激素测定方法的进展（消除蛋白结合和类似物/前体/代谢58hCG游离β亚单位试剂β亚单位特异且不与完整的hCG分子结合的单抗专门测定hCG的游离β亚单位多用于唐氏综合征的早期筛查。绒毛膜促性腺激素（hCG）临床意义早孕、先兆流产的监护、异位妊娠、葡萄胎、绒癌、精原细胞瘤肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、肝癌、畸胎瘤、唐氏综合征等。普通型试剂多抗受其它激素干扰灵敏度不高βhCG试剂β亚单位特异单抗特异性和灵敏度较高hCG游离β亚单位试剂绒毛膜促性腺激素（hCG）临床意义早孕59分类:特异性——特定肿瘤时才会显著性升高

辅助性——正常情况下也可产生，在发生肿瘤时急剧升高肿瘤标志物定义：由肿瘤细胞合成、释放，或者是机体受肿瘤刺激而产生的物质。用途：高危人群的早期筛查肿瘤确诊病人的疗效观察和预后分析。性质：胚胎源性、含糖物质、酶、激素，其它蛋白质不能单纯依赖肿瘤标志物确诊肿瘤分类:特异性——特定肿瘤时才会显著性升高肿瘤标志物定义：由肿60原发性结肠癌（45－90%）腺胰、胆管、胃、食道、肺、乳腺癌和泌尿系肿瘤（50－70%）结肠癌术后1－3周内血CEA可下降到正常，如持续阳性说明切除不全或转移，提示预后差或有复发可能乳头状癌时胆汁CEA检测特异性100%良性肿瘤、炎症和退行性疾病、吸烟者可小幅升高原发性肝癌（90%）手术疗效和预后判断指标其它肿瘤（胃癌、结肠癌）

各种胎儿发育缺陷、低氧症、死胎肝良性病变（肝炎）轻度增高甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA）升高唐氏综合症降低原发性结肠癌（45－90%）原发性肝癌（90%）手术疗效和预61上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物浆液性子宫内膜样癌、透明细胞癌、输卵管癌、未分化卵巢癌卵巢癌复发早期增高良性卵巢疾患（3%-6%）、怀孕期前3个月、行经期、子宫内膜异位症、子宫纤维变性、急性输卵管炎、肝病、胸腹膜和心包感染可稍有上升CA15-3乳腺癌（30-50%）、肺癌、肺腺癌及卵巢癌乳腺癌术后复发转移妊娠可引起升高CA125胰腺癌和结、直肠癌，肿瘤切除后如再次上升表示复发。胆囊癌、胆管癌、肝癌、胃癌也升高胆道癌胆汁检测灵敏度100%胰腺癌胆汁检测灵敏度76.5%,特异性96.4%胰腺炎和黄疸时可呈一过性增高普遍性肿瘤标志相关抗原，不是特指某个器官的肿瘤标志物。胰腺癌、胆囊癌（90%）；肝癌、胃癌、结直肠癌、卵巢肿瘤胰腺炎、结肠炎和肺炎时，也会升高CA50CA199上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物CA15-3乳腺癌（30-562是目前小细胞肺癌最敏感最特异的肿瘤标志物之一，阳性率65%-100%NSE水平与小细胞肺癌转移程度相关，与转移的部位无关治疗前后动态观察血清NSE浓度可以监测小细胞肺癌的治疗效果。水溶性铁贮存蛋白，具有不同的同工铁蛋白图谱。酸性同分异构体铁蛋白增高与白血病、肺癌、乳腺癌有关肝癌时如果AFP测定值较低，可用铁蛋白测定结果作为补充证据色素沉着旺盛、炎症，尤其是肝炎时，铁蛋白也会升高神经元特异性烯醇化酶（NSE）铁蛋白（Frri）是目前小细胞肺癌最敏感最特异的肿瘤标志物之一，阳性率65%-63目前国际上强调用等克分子反应的单克隆抗体检测PSA，否则测定值偏高。但美国很多公司甚至大公司的多种PSA试剂盒均未采用等克分子抗体，目前在欧洲已被逐渐排挤出市场。前列腺特异抗原(PSA)前列腺癌筛查和治疗后监控良性前列腺疾病也可升高女性乳腺癌患者中可检出FPSA/TPSA值25%良性前列腺增生前列腺癌0100%前列腺癌的特异性标志物，少数几个器官特异性肿瘤标志物之一目前国际上强调用等克分子反应的单克隆抗体检测PSA，否则测定64地高辛测定易受地高辛的某些代谢物，以及某些内源性类固醇物质的干扰取血应在服药10天以后及最后一次服药16小时（出现中毒除外）0.82.03.04.0ng/ml血清浓度治疗剂量＞80%病人心律紊乱治疗心房纤颤和心房扑动除外高度怀疑中毒注意特征性心率失常和心电图改变必须停药考虑抢救措施地高辛测定易受地高辛的某些代谢物，以及某些内源性类固醇物质的65MoM正常人群中位数的倍数，即正常人群为1.0MoM唐氏综合征的实验室诊断母体血清AFP低于1.0MoM（0.47-0.86MoM，均值0.65MoM）母体血清游离β-hCG亚单位孕早期显著高于正常妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)孕早期显著降低PAPP-A和游离β-hCG亚单位联合应用8-14周时检出率62%，假阳性率为5%；孕15-22周检出率为59%MoM唐氏综合征的实验室诊断母体血清AFP低于1.0MoM661987年研究，1991年申请化学发光液专利（几乎与国外同步）。1995年获得上述专利，开始研制单光子计数式发光仪。1997年研制成功第一代微孔板单光子计数式发光分析仪,开发出部分发光免疫试剂盒。2000年获得单光子计数器专利，开始发光免疫检测试剂盒的新药申报。2003年获医疗器械和药品生产许可证，正式批量生产。源德的发展历程1987年研究，1991年申请化学发光液专利（几乎与国外同步67自主开发出具有国际水平的发光底物在国际上率先创立的分程增敏、辅助增敏、坪区延长和干扰屏蔽技术使发光灵敏度和线性范围均比同类技术提高一个数量级坪区（信号稳定期）和抗干扰能力也明显提高因而使试剂盒的稳定性、线性范围超过了国外同类产品而且还克服了酶促发光固有的工作曲线漂移、低端斜率非线性下降等不足自主开发出具有国际水平的发光底物在国际上率先创立的分程增敏、68发光免疫检测技术的临床应用及其应注意的问题课件69发光免疫检测技术的临床应用及其应注意的问题课件70本底噪音最低检测限线性范围稳定性（RLU/0.1秒)(HRPpg/样品)(HRPpg/样品)(平均变异系数)

某国外产品27±3.10.1±0.010.1--204.824.4自行研制7±0.90.01±0.010.01--819.25.5发光液的主要技术性能比较发光液的主要技术性能比较71本公司发光底物美国某知名公司发光底物本公司发光底物72国际领先的免疫测定试剂盒我们攻克了发光液贮存、抗体玻璃化及标记物稳定剂等相关配套技术，使试剂盒的有效期和稳定性达到了国际水平。国际领先的免疫测定试剂盒我们攻克了发光液贮存、抗体玻璃化及标73甲状旁腺功能类、肾上腺功能类、贫血类、维生素类、产前筛查、新生儿疾病筛查、甲型、丙型肝炎类、艾滋病检测……FSH、LH、PRL、T、P、E2、HCG、GH……ASA、AEA、ACA、AOA……肝炎标志物类HBV（定性、定量）……甲状腺激素类TT3、TT4、FT3、FT4、TSH糖尿病类INS、C-P、INS-Ab、GAD-Ab性激素类肿瘤标志类PSA、FPSA、CEA、AFP、NSE、Ferr、CA-50、CA-125、CA-153、CA-199……优生优育类TORCH（IgM、IgG）不育不孕类八大类近60个检测项目甲状旁腺功能类、肾上腺功能类、贫血类、维生素类、产前筛查、F74率先建立了用发光免疫法直接检测患者血清内SARS病毒的技术为更早期发现SARS病例提供了快速、简便、廉价的技术手段。第一个在中国境内注册并正式合法生产的发光免疫检测试剂盒。全球第一个SARS冠状病毒抗原检测试剂盒新药证书和药品生产批准文号率先建立了用发光免疫法直接检测患者血清内SARS病毒的技术全75国际领先的发光检测仪制造技术高线性度光电校正光源，大大提高了单光子计数仪的可靠性和一致性。我们还在国际上首先提出了双量程自动转换单光子计数器的设计思想在充分保持高灵敏度特性的基础上大大拓宽了线性范围，达到108左右而一般单量程计数器的线性范围不超过106。国际领先的发光检测仪制造技术高线性度光电校正光源，大大提高了76我们的仪器产品微孔板发光免疫分析系统新型模块化全自动发光免疫分析系统基于发光检测技术的食品农药残留检测设备微生物污染现场快速测试产品…我们的仪器产品微孔板发光免疫分析系统77JETLIA-96/2内置电脑自动加液型发光免疫分析仪JETLIA-96/278AUTOLIA-12/48型全自动发光免疫分析仪AUTOLIA-12/48型全自动发光免疫分析仪79国际上为数不多的在整个发光检测技术平台所有领域内都具备自主知识产权的企业之一。被美国《时代》周刊收入的某微型全自动发光免疫检测仪，在其技术更新中也曾征询过我们的建议。当选国际生物发光及化学发光学会（InternationalSocietyonBioluminescence&Chemiluminescence:ISBC）学术理事（CouncilMemberofScientificAdvisoryBoard）和申办ISBC国际会议为标志，我们已经成为国际化学发光检测技术研究中心之一。SUMMARY国际上为数不多的在整个发光检测技术平台所有领域内都具备自主知80试剂生产车间主楼试剂生产车间主楼81一楼接待大厅一楼接待大厅82二楼商务中心二楼商务中心83GMP洁净车间GMP洁净车间84质检中心质检中心85研发中心研发中心86仪器装配线局部仪器装配线局部87发光免疫检测技术的临床应用

及其应注意的问题发光免疫检测技术的临床应用

及其应注意的问题88由于化学反应（通常是氧化）产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象。化学发光

（Chemiluminescence）生物发光和化学发光均属于冷光，即发光不是由于发光体温度升高所至，发射波长也与其温度无关由于化学反应（通常是氧化）产生电子能级处于激发态的物质，后者89按化学反应类型化学发光的分类酶促化学发光：辣根过氧化物酶系统碱性磷酸酶系统黄嘌呤氧化酶系统非酶促化学发光：

吖啶酯系统草酸酯系统三价铁-鲁米诺系统闪光（Flash）:按发光持续时间发光时间在数十分钟以上，如：HRP-Luminol系统AP-AMPPD系统黄嘌呤氧化酶系统无须原位进样、以速率法测量。发光时间在数秒内，如吖啶酯以原位进样(InSituInjector)和时间积分法测量辉光（Glow）:按化学反应类型90时间发光信号辉光坪区速率法测量原位进样积分法测量闪光尖峰闪光与辉光及其测量方式的差别时间发光信号辉光坪区速率法测量原位进样积分法测量闪光尖峰闪光91鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统H2O2+NH2OONHNHN2OH-HRPNH2CO2-CO2-+Photon(425nm)ROHROHNSRBOHOH增强剂（Enhancer）商业化产品中常见的化学发光系统鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统H2O2+NH2OONH92AMPPD及其衍生物的化学发光系统+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3商业化产品中常见的化学发光系统AMPPD及其衍生物的化学发光系统+*光子(477nm)AP93CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光子+CO2+CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO商业化产品中常见的化学发光系统吖啶酯化学发光系统CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光94发光信号检测光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD）结构简单、性能稳定但灵敏度低、线性范围较窄。主要特点原理光信号光电转换器件电压或电流信号放大发光信号检测光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD）结构简95单光子计数器是目前高灵敏度发光分析仪的核心部件光电倍增管高压高速放大器高速比较器高速分频器发光样品产生光子激发光阴极产生光电子在阳极上形成较强信号脉冲信号相对发光单位数字脉冲(RLU)在各打拿极之间得到能量和数目的倍增单光子计数器是目前高灵敏度光电倍增管高压高速放大器高速比较器96单光子计数式发光检测仪计算机打印机发光仪控制模块发光仪执行模块控制器程控高压计数/贮存器单光子计数器样品运动/定位装置程控自动门锁及检测装置原位注射泵单光子计数式发光检测仪计打发光仪控制模块发光仪执行模块控制器97光生物学技术的应用范围军事侦测公安稽查卫生检疫药物筛查医学诊断环境检测航天遥感生命科学……

已成为现代生物技术最活跃的领域之一光生物学技术的应用范围军事侦测已成为现代生物技98光生物学检测技术的优越性彻底消除了放射性危害无半衰期限制，试剂稳定性和有效期大大延长容易实现连续、动态、重复测定适合于复合标记系统进行多指标并行测定操作简单，反应速度快，容易实现自动化灵敏度和线性范围超过以往技术光生物学检测技术的优越性彻底消除了放射性危害适合于复合标记系99几种标记/检测技术灵敏度的比较酶标荧光放免发光灵敏度(mol/L)10-1810-1510-1210-9几种标记/检测技术灵敏度的比较酶标荧光放免发光灵敏度(mol100几种标记/检测技术线性范围的比较酶标荧光放免发光线性范围105104103102几种标记/检测技术线性范围的比较酶标荧光放免发光线性范围10101几种标记/检测试剂的有效期比较酶标荧光放免发光有效期（月）1815129630几种标记/检测试剂的有效期比较酶标荧光放免发光有效期（月）1102020,00040,00060,00080,000100,000试剂盒仪器特殊防护治理污染人民币人民币三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用放免酶标发光020,00040,00060,00080,000100,0103抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物质的球蛋白。免疫分析技术基本原理利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。免疫分析技术基本104免疫测定技术分类反应结束后是否需要分离均相法（Homogeneous）非均相法（Heterogeneous）免疫测定技术分类反应结束后是否需要分离均相法非均相法105均相法（Homogeneous）免疫凝集法：自然凝集：血型测定肥达氏反应；敏化凝集：血球凝集法凝胶（微粒）比浊法免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法，酶--辅酶（亚基）配位法荧光偏振法，荧光共振法吖啶酯水解法，生物传感器均相法（Homogeneous）免疫凝集法：免疫扩散法；免疫106非均相法（Heterogeneous）免疫印迹（Western-blot）：基因表达分析、HIV感染确认实验免疫组织化学技术：原位基因表达分析、临床病理学分析纸片法：早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测放射免疫法（RIA）：沉降法（放免）、固相法（免放，IRMA）荧光免疫法（FIA）；酶联免疫法（EIA，ELISA）酶联荧光法（FEIA）、化学发光法（LIA）酶联化学发光法（ELIA）、时间分辨荧光法（DELFIA）、电化学发光法（ECLIA）；……非均相法（Heterogeneous）免疫印迹（Wester107双抗体夹心法（三明志法）原理固相支持物表面包被抗体标记抗体待测物双抗体夹心法（三明志法）原理固相支持物表面包被抗体标记抗体待108夹心法的剂量--反应关系曲线信号强度（Y）线性范围待测物浓度（X）Hook(前滞)效应分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）：S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。功能灵敏度：测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。线性范围：（分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度相关系数≥0.99的曲线范围夹心法的剂量--反应关系曲线信号强度（Y）线性范围待测物浓度109竞争法的原理固相支持物表面待测物包被抗体标记抗原竞争法的原理固相支持物表面待测物包被抗体标记抗原110竞争法的剂量--反应关系曲线待测物浓度（X）信号强度（Y）线性范围分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）：S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值功能灵敏度：测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度线性范围：

（分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度相关系数≥0.99的曲线范围竞争法的剂量--反应关系曲线待测物浓度（X）信号强度（111间接法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗体（二抗）间接法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗体112俘获法原理俘获抗体（二抗）待测抗体标记抗原包被体俘获法原理俘获抗体待测抗体标记抗原包被体113双抗原夹心法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗原双抗原夹心法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗原114间接包被夹心法原理包被体待测抗原包被连接物标记抗体俘获抗体特点：所有试剂盒均采用同一包被物和包被工艺间接包被夹心法原理115发光免疫分析基本操作步骤（一步法）待测样品标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物发光底物仪器检测包被抗体或抗原的反应管反应30-60分钟反应0-5分钟发光免疫分析基本操作步骤（一步法）待测样品标记抗体或抗原116发光免疫分析基本操作步骤（二步法）待测样品洗涤去除未结合的反应物发光底物仪器检测包被抗体或抗原的反应管反应30-60分钟反应0-5分钟标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物反应30-60分钟发光免疫分析基本操作步骤（二步法）待测样品洗涤去除未结合117发光免疫分析技术的现状及应注意的问题发光免疫分析技术118目前已商品化的光生物学标记检测技术整体性能比较技术类型标记、反应体系主要优点主要不足化学发光酶促过氧化物酶、鲁米诺、氧化剂、增强剂等测量方式简单（速率法）成本较低、灵敏度较高工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移螺旋金刚烷环氧化物、碱性磷酸酶测量方式简单（速率法）灵敏度较高非酶促吖啶酯、过氧化氢灵敏度较高试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积分法）需原位进样(InSituInjector)仪器成本及维护费用较高试剂成本较高时间分辨荧光铕（Eu）、镝(Dy)、钐（Sm）、铽（Tb）、等络合物脉冲光源激发灵敏度较高、试剂较稳定测量方式复杂（脉冲激发、间歇式测量、流动池）仪器成本及维护费用高环境及样品中同类元素可导致本底干扰电化学发光钌(Ru)的络合物脉冲电场激发时间分辨荧光（也称时间延迟光致发光）：TimeResolvedFluorescence（TimeDelayedPhotoluminescence）解离增强荧光免疫分析（DEFIA）电化学发光（也称场致发光）：Electrochemiluminescence（Electroluminescence）化学发光：Chemiluminescence目前已商品化的光生物学标记检测技术整体性能比较技术类型标记119例如：电化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.005mIU/L第四代化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.001mIU/L原因在于抗体的亲合力，而不是检测技术。筛选抗体、屏蔽干扰，生产工艺、管理水平和技术服务是试剂生产的关键这些发光检测技术的灵敏度及线性范围都已经接近了免疫反应的极限。灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰免疫反应的因素，而不是检测技术。片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强弱，不仅毫无意义，而且也是荒谬的。例如：电化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.005mIU120发光技术——临床免疫分析划时代的进步以TSH(促甲状腺素)为例第一代TSH检测试剂盒普通放免功能灵敏度1-2mIU/L基本无法测到正常值下限以下的血清TSH浓度对甲亢的诊断意义不大固相放免功能灵敏度0.1-0.2mIU/L在甲亢的诊断中开始发挥作用第二代TSH检测试剂盒发光免疫功能灵敏度0.01-0.02mIU/L成为甲亢诊断的首选指标之一发光免疫功能灵敏度0.001-0.002mIU/L一系列新的临床现象改写了垂体甲状腺轴的调控状态第三代TSH检测试剂盒第四代TSH检测试剂盒发光技术——以TSH(促甲状腺素)为例第一代普通放免固相放免121目前商品化发光免疫分析产品的几个特点大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式多数采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使灵敏度进一步提高，反应时间大大缩短使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线部分产品采用流动池测定方式(适合于闪光型发光或电化学发光)目前商品化发光免疫分析产品的几个特点大多采用全自动工作方式，122流动池检测方式示意图检测器检测池负压泵废液四通阀冲洗液样品管计量泵干燥空气原位进样泵氧化剂流动池检测方式示意图检测器检测池负压泵废液四通阀冲洗液样品管123使用商品化发光免疫分析产品可能遇到的几个问题与以往方法（放免等）在检测指标的正常值及临床意义上的差异。如：免疫源性胰岛素与真胰岛素、HCG、性激素等采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较大差异。（单抗特异性好，受干扰小，因此测值低）不同厂家产品测定结果之间一致性差（未与国家标准品比对）。所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完善。部分产品不显示原始数据，无法监控其准确性。使用商品化发光免疫分析产品与以往方法（放免等）在检测指标的正124免疫分析结果的干扰因素温度氧化剂还原剂光线磁场金属离子防腐剂杂质本底物质免疫分析结果的干扰因素温度氧化剂还原剂光线磁场金属离子防腐剂125同一干扰因素对不同检测方法的不同影响待测物包被（结合）抗体放免法免放或发光法标记抗原TBG离心沉降洗涤祛除以甲状腺素结合蛋白（TBG）干扰竞争法测定T3为例信号↑结果↓信号↓结果↑同一干扰因素对不同检测方法的不同影响待测物包被（结合）放免法126使用商品化发光免疫分析产品必须做好的几个工作在厂家提供的数据基础上，自行建立正常参考值系统。明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况如：小分子激素之间，以及与自身前体或代谢物之间的交叉胰岛素与C-肽、胰岛素原之间的交叉FSH、LH、HCG之间的交叉。充分利用现有国标参考品校正结果（注意防腐剂干扰）（可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得到）自行建立多点质控（2-3点）监控每次实验的准确性。尽可能避免干扰因素采样：清洁样品管（防止还原剂干扰）、不使用酶抑制剂、及时送检实验室：恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修使用商品化发光免疫分析产品在厂家提供的数据基础上，自行建立正127正常值参考的意义及灰色区域的存在如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内20%）内，则需要进一步追踪检查。95%或99%-20%+20%正常值参考的意义及灰色区域的存在如果测定结果处于灰色128自身基础数据——最佳“正常参考值”对于患者来讲，最佳的参考值是自己以往的测定数据，即自身对照；因此积累病人的基础数据非常重要。尤其是性激素、生长激素、胰岛素等具有周期性分泌或释放规律的激素。时间FSH卵泡期排卵期黄体期月经期正常人平均值变化规律正常参考值范围某一患者变化规律（无排卵峰）自身基础数据对于患者来讲，最佳的参考值是自己以往的测定数据，129保证检验结果准确性的对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度检验医师必须牢记检验医师给临床所提供的一切服务仅限于保证检验结果准确性的不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终130化验结果与临床不符的原因由于个体差异或不明干扰因素的存在，总有少数病例的化验结果与其临床表现不符操作失误、仪器故障、试剂失活等因素某些夹心一步法试剂往往存在前滞效应药物以及其它基础疾病的干扰排除这些因素后重复测定或重复送样用同试剂盒的校准品A稀释后再重新测定及时与临床沟通结合说明书综合判断原因解决化验结果与临床不符的原因由于个体差异或不明干扰因素的存在，总131不同实验方法，或同一方法的不同厂家产品之间，其测定结果和临床正常值都会有所差异不同实验室环境和不同人群条件下，其测定结果和临床正常值也会有所不同在厂家提供的正常参考值基础上建立自己的正常参考系统待测物质的降解及其与血清蛋白结合状态的改变，某些化验项目的检测结果往往受标本存放时间及其贮存条件的影响及时采样、送检，实验室及时完成化验，严格按照试剂盒说明书要求存放不同实验方法，不同实验室环境和不同人群条件下，在厂家提供的正132常见临床免疫检测指标的意义及其限制因素常见临床免疫检测指标的意义133激素类型氨基酸：甲状腺激素蛋白（肽）：甲状旁腺激素、下丘脑激素、垂体激素、降钙素、胎盘激素、心肌激素、胃肠激素类固醇：性激素和皮质激素儿茶酚胺：肾上腺素下丘脑-垂体-内分泌轴及其调节关系长反馈：垂体或下丘脑激素受靶细胞分泌激素的反馈调节，以负反馈为主，但排卵时雌激素为正反馈。短反馈：垂体激素对于下丘脑的反馈负反馈超短反馈：下丘或垂体激素直接负反馈自身的合成和分泌激素类型下丘脑-垂体-内分泌轴及其调节关系长反馈：垂体或下134类固醇激素的合成男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。类固醇激素的合成男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成135甲状腺功能指标评价甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3＞FT4＞TT3＞TT4甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH＞TT4＞FT3＞TT3发光法TSH、FT3、FT4提高了灵敏度，使得其临床意义大于TT4和TT3两步法操作时间长灵敏度差准确性差类似物法操作时间短灵敏度较好准确性较好反向竞争法（标记抗体）操作时间短灵敏度更好准确性更好第一代第二代第三代血清FT3、FT4试剂盒的发展（消除结合蛋白对测定的影响）TGAbTMAb=TPO抗体甲状腺功能指标评价甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3＞FT136其生理作用需要通过生长介素(SM)介导SM也称胰岛素样生长因子(IGF)，主要在肝脏及多种GH靶细胞合成SM-C即IGFI，结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。生长激素（GH）生长激素紊乱生长激素缺乏症（侏儒）巨人症及肢端肥大症GH测定的临床意义垂体腺瘤、肾癌、肺癌运动刺激试验药物刺激试验（胰岛素-低血糖试验）GH分泌的抑制试验其生理作用需要通过生长介素(SM)介导生长激素（GH）生长激137胰岛素免疫源性胰岛素：采用多抗或普通单抗与胰岛素原和C肽有交叉正常值较高糖尿病分型：Ⅰ型空腹胰岛素低，OGTT后变化缓慢，甚至无变化；Ⅱ型空腹高胰岛素，OGTT后胰岛素释放延迟，总量不低。肝硬变：空腹胰岛素高于正常2－3倍。OGTT各个时相胰岛素升高。胰岛素瘤：静脉注入亮氨酸后血中胰岛素水平明显升高。甲亢：初期空腹胰岛素水平高，OGTT与正常人相似；长期严重甲亢可导致胰岛β细胞功能衰竭，发展为糖尿病。真胰岛素：采用胰岛素原掩蔽性胰岛素单抗与胰岛素原和C肽无交叉正常值较低胰岛素免疫源性胰岛素：糖尿病分型：Ⅰ型空腹胰岛素低，OGTT138C-肽胰岛素升高C肽正常，外周血C肽／胰岛素比值降低。糖尿病如患者存在胰岛素抗体或用外源性胰岛素治疗，则改为测定C肽肝硬化生理性升高：禁食及大量活动病理性升高：糖尿病，增高数值和糖尿病的严重程度有关胰高血糖素胰高血糖素静脉注射实验胰高血糖素瘤鉴别评价糖尿病人胰岛功能C-肽胰岛素升高C肽正常，外周血C肽／胰岛素比值降低。糖尿病139胰岛素抗体GAD是Ⅰ型糖尿病的关键始动靶自身抗原其抗体是Ⅰ型糖尿病及前期的重要标志长期用胰岛素的病人可产生未用过胰岛素的I型糖尿病人胰岛素抗体阳性是自身免疫性细胞损害的标志谷氨酸脱羧酶（GAD）抗体与抗胰岛细胞抗体（ICA）相比，GAD-Ab阳性率高、持续时间长、测定方法简单，有很好的临床预见性，可替代ICA。胰岛素抗体GAD是Ⅰ型糖尿病的关键始动靶自身抗原长期用胰岛140性激素LHFSH正常婴儿和小孩极微；在青春期前开始分泌；女性绝经后明显升高。成年男性含量比较恒定，老年男性因睾丸功能衰减，含量大大升高。垂体瘤切除术后患者LH和FSH减少，估计垂体瘤手术效果有一定价值性腺发育不良垂体瘤某些癌症（肺癌）慢性肾衰腺皮质激素治疗后异位激素分泌综合征……垂体性性功能衰退神经性厌食使用性激素溢乳闭经征青春期延期……性激素LH正常婴儿和小孩极微；在青春期前开始分泌；女性绝经后141催乳素瘤好发于女性表现为泌乳闭经多毛痤疮不育垂体催乳素（hPRL）垂体催乳素瘤、月经异常和不孕的病因鉴别，应激刺激可引起hPRL的分泌。男性以性功能减退阳萎不育垂体压迫症状为主偶见泌乳。催乳素瘤好发于女性垂体催乳素（hPRL）垂体催乳素瘤、月经异142睾酮睾丸间质细胞瘤真性男性性早熟女性多毛症皮质醇增多症完全性雄性激素不应综合征……原发生睾丸功能减退垂体前叶功能减退男性不育高hPRL血症红斑狼疮骨质疏松慢性肝病慢性肾衰……血液中睾酮98%与蛋白结合，只有游离态具有生物活性女性性早熟男性乳房发育红斑狼疮肝硬变子宫内膜癌乳腺癌糖尿病孕妇……女性性发育不全多囊卵巢综合症葡萄胎妊娠高血压症柯兴氏综合症卵巢囊肿……雌二醇灵敏度要求高睾酮睾丸间质细胞瘤原发生睾丸功能减退血液中睾酮98%与蛋白结143多胎妊娠17α-羟化酶缺乏症子宫内膜腺癌先兆子痫妊娠高血压妊娠合并糖尿病胎儿宫内生长迟缓卵巢颗粒层膜细胞瘤……无排卵性子宫功能性出血闭经不孕早产黄体功能不全异位妊娠……孕酮血浆中孕酮绝大部分为结合型，极小数为游离型。孕酮与黄体及胎盘关系密切，用于监测排卵、黄体功能以及判断妊娠继续。多胎妊娠无排卵性子宫功能性出血孕酮血浆中孕酮绝大部分为结合型144小分子性激素测定方法的进展（消除蛋白结合和类似物/前体/代谢产物的干扰）直接测定法经典方法消化样品↓萃取有机相↓分子筛柱分离各类甾体↓测定血清直接测定+高特异性单抗+结合蛋白屏蔽技术小分子性激素测定方法的进展（消除蛋白结合和类似物/前体/代谢145hCG游离β亚单位试剂β亚单位特异且不与完整的hCG分子结合的单抗专门测定hCG的游离β亚单位多用于唐氏综合征的早期筛查。绒毛膜促性腺激素（hCG）临床意义早孕、先兆流产的监护、异位妊娠、葡萄胎、绒癌、精原细胞瘤肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、肝癌、畸胎瘤、唐氏综合征等。普通型试剂多抗受其它激素干扰灵敏度不高βhCG试剂β亚单位特异单抗特异性和灵敏度较高hCG游离β亚单位试剂绒毛膜促性腺激素（hCG）临床意义早孕146分类:特异性——特定肿瘤时才会显著性升高

辅助性——正常情况下也可产生，在发生肿瘤时急剧升高肿瘤标志物定义：由肿瘤细胞合成、释放，或者是机体受肿瘤刺激而产生的物质。用途：高危人群的早期筛查肿瘤确诊病人的疗效观察和预后分析。性质：胚胎源性、含糖物质、酶、激素，其它蛋白质不能单纯依赖肿瘤标志物确诊肿瘤分类:特异性——特定肿瘤时才会显著性升高肿瘤标志物定义：由肿147原发性结肠癌（45－90%）腺胰、胆管、胃、食道、肺、乳腺癌和泌尿系肿瘤（50－70%）结肠癌术后1－3周内血CEA可下降到正常，如持续阳性说明切除不全或转移，提示预后差或有复发可能乳头状癌时胆汁CEA检测特异性100%良性肿瘤、炎症和退行性疾病、吸烟者可小幅升高原发性肝癌（90%）手术疗效和预后判断指标其它肿瘤（胃癌、结肠癌）

各种胎儿发育缺陷、低氧症、死胎肝良性病变（肝炎）轻度增高甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA）升高唐氏综合症降低原发性结肠癌（45－90%）原发性肝癌（90%）手术疗效和预148上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物浆液性子宫内膜样癌、透明细胞癌、输卵管癌、未分化卵巢癌卵巢癌复发早期增高良性卵巢疾患（3%-6%）、怀孕期前3个月、行经期、子宫内膜异位症、子宫纤维变性、急性输卵管炎、肝病、胸腹膜和心包感染可稍有上升CA15-3乳腺癌（30-50%）、肺癌、肺腺癌及卵巢癌乳腺癌术后复发转移妊娠可引起升高CA125胰腺癌和结、直肠癌，肿瘤切除后如再次上升表示复发。胆囊癌、胆管癌、肝癌、胃癌也升高胆道癌胆汁检测灵敏度100%胰腺癌胆汁检测灵敏度76.5%,特异性96.4%胰腺炎和黄疸时可呈一过性增高普遍性肿瘤标志相关抗原，不是特指某个器官的肿瘤标志物。胰腺癌、胆囊癌（90%）；肝癌、胃癌、结直肠癌、卵巢肿瘤胰腺炎、结肠炎和肺炎时，也会升高CA50CA199上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物CA15-3乳腺癌（30-5149是目前小细胞肺癌最敏感最特异的肿瘤标志物之一，阳性率65%-100%NSE水平与小细胞肺癌转移程度相关，与转移的部位无关治疗前后动态观察血清NSE浓度可以监测小细胞肺癌的治疗效果。水溶性铁贮存蛋白，具有不同的同工铁蛋白图谱。酸性同分异构体铁蛋白增高与白血病、肺癌、乳腺癌有关肝癌时如果