DB37-T 3771-2019 枣疯病综合防控技术规程-（高清版）

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DB37山 东 省 地 方 标 准DB37/T3771—2019枣疯病综合防控技术规程Technicalregulationforintegratedmanagementofjujubewitches’-broom20192019120520200105山东省市场监督管理局发布前 言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省农业农村厅提出并组织实施。本标准由山东农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省果树研究所、山东省农业科学院植物保护研究所。枣疯病综合防控技术规程范围GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则NY/T393绿色食品农药使用准则NY/T1276农药安全使用规范总则下列术语和定义适用于本文件。下列术语和定义适用于本文件。3.1植原体Phytoplasma3.2枣疯病Jujubewitches’-broom（Jujubewitches’-broomphytoplasma）3.3枣疯病双抗夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测利用枣疯病植原体免疫膜蛋白抗体（来源于兔）及碱性磷酸酯酶标记的羊抗兔进行ELISA检测样品的吸光值（I）与健康植株（H）的吸光值。根据I/H的比值来判断枣疯植原体的存在与否。4发病规律4.1传播途径枣疯病植原体主要通过媒介昆虫、嫁接和带病苗木进行传播。4.2发病特点1～25～6初期表皮呈褐色，萌生的根蘖呈丛枝状，后期形成点发性溃疡斑，继而枯死。倍～6结果少或不结果，果实小、花脸，肉质硬，口感差。结果少或不结果，果实小、花脸，肉质硬，口感差。6普查与鉴定每年8月～10月进行逐株检查，枝条节间缩短、簇生，叶片黄化变小为病害诊断主要依据，对查出的病株做好明显标记，统计发病率。（PCR）检测方法见附录A。（DAS-ELISA）检测方法见附录B。7防治措施新建枣园宜在没有发生枣疯病的地块建园。cm～60cm0.360～70适度修剪，合理整形，提高树体通透性和光照强度。（7.5防治媒介昆虫主要传毒媒介为中华拟菱纹叶蝉（HishimonoideschinensisA.）、凹缘菱纹叶蝉（HishimonusselltusU.）（HishimonuslamellatusC.）（Typhlocybasp.）GB/T8321NY/T393和NY/T1276附录A（规范性附录）枣疯病病原聚合酶链式反应（PCR）检测方法DNA采取症状明显的和健康的枣树幼嫩枝条、叶片或者花样本，样本短时间（1周内）可于4℃冰箱保存，长时间需于-80℃冰箱保存。用商品化植物基因组DNA快速提取试剂盒提取。PCR16SrRNAR16mF2（5'-CATGCAAGTCGAACGGA-3'）/R16mR1（5'-CTTAACCCCAATCATCGAC-3'）进行PCRDNAPCRPCRTaq后9445s，601min，722min，357210minPCR产物于1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。阳性材料直接PCR扩增片段大小约1.4kb，阴性对照及空白PCR产物于1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。阳性材料直接PCR扩增片段大小约1.4kb，阴性对照及空白对照均应无扩增片段。A.4序列测定及分析PCRDNA进行Blast检索，初步确定病原种类。附录B（规范性附录）枣疯病植原体双抗夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测方法将疑似病样按照1:10或1:100的比例加入抗原包被缓冲液，研磨后取上清备用。取150μL稀释的检测样品液加入96孔酶标板中，以枣疯植原体阳性标准品为阳性对照，以健康枣树标准品为阴性对照，在4℃条件下孵育过夜或37℃孵育1h～2h。洗板将酶联板迅速反扣，弃去孔中液体，每孔加入PBST液200μL，静置3min～5min后迅速弃去孔中液体，并在吸水纸上扣打几下以尽量除去孔中液体，重复3次。B.4封闭B.4封闭去除酶标板中的PBST缓冲液，每孔加入150μL的封闭缓冲液，37℃恒温箱孵育1.5h。B.5洗板同步骤C.3。B.6加一抗用PBST稀释枣疯植原体免疫膜蛋白抗体（来源于兔）至合适的工作浓度（1:1000），每孔样品加150μL，37℃恒温箱孵育2h。B.7洗板同步骤C.3。B.8加酶标抗体每孔加入150μLPBST稀释的碱性磷酸酯酶标记的羊抗兔（1:5000），37℃恒温箱孵育2h。B.9洗板同步骤C.3。每孔加底物溶液150μL；室温避光显色30min～60min；酶联仪在405nm下读数。附录C（）药剂防治枣疯病的方法见表C.1。表C.1药剂防治枣疯病的方法药剂选择四环素类农用抗生素使用时间枣树展叶期，5月上旬使用方法配药4～6500mL打孔20cm452cm～3cm0.45cm的注药孔。若多侧均有疯枝时，打孔数量依据树干直径决定，树干直径＜10cm110cm210cm410cm附近不能有树洞和裂缝，避免造成漏液。输液1.5m常滴液后，放到最大输液速度处输液。输完液后用泥巴涂抹好孔口，以防药液挥发。使用药量10cm～