在Lager酵母发酵产生二氧化硫过程中线粒体可能扮演的角色

在Lager酵母发酵产生二氧化硫过程中线粒体可能扮演的角色付臣译自ASBCJ-2012-0828-01摘要：二氧化硫是酿造家寻求控制的Lager酵母主要的代谢产物之一，因为它对Lager啤酒的质量有多重复杂的影响。酵母细胞当在高葡萄糖麦汁中发酵时，易受影响而产生较高的二氧化硫已经被广泛报道，但是确切的机理仍然没有得到充分的了解，已知当酵母细胞利用葡萄糖作为初始碳源作为生长物质时，这会对线粒体进化产生负面影响，特别是在它的仅有的膜脂，双磷脂酰甘油中。在本研究中，我们给出了一个用双磷脂酰甘油合成促进剂L-甲状腺氨酸和甘油）和抑制剂（肌糖），来针对改变双磷脂酰甘油的形成和线粒体进化的培养试验结果，这些结果证实在促进双磷脂酰甘油形成的条件下以适应乙醇产生，有明显低的亚硫酸盐含量（P<0.05），另外，用呼吸缺陷型突变菌株发酵与其亲代菌株对比，通过测量亚硫酸盐产量与摄入的硫酸盐数量之比，也显示出呼吸缺陷型突变菌株有明显低的亚硫酸盐转化效率（P<0.05）。这些发现暗示，这种被忽略的细胞器对亚硫酸盐产生可能有至关重要的作用，我们推测它与一个关键的酶复合体辅基，亚硫酸盐还原酶有关。这个辅基，也就是[4Fe-4S]铁硫簇，提供了亚硫酸盐还原酶电子的催化部位，以减少二氧化硫变成其它硫化物。假设线粒体ATP水平的限制，影响了[4Fe-4S]的簇状构造或者由于胞液脱辅基蛋白的变化影响了簇的输出。关键词：双磷脂酰甘油，铁硫簇，线粒体，亚硫酸盐还原酶，SO2导言二氧化硫（SO2）是酵母在发酵期间形成的一种重要的代谢物，它影响啤酒质量的许多特性，它作为啤酒中一种抗氧化剂的角色已经被证实，但是它在啤酒风味稳定性方面的角色是引起争议的，因为已经证明在发酵期间二氧化硫将键合风味活性羰基形成风味中性的a-羟基磺酸盐，Dufour先生暗示这些化合物在发酵期间不能被酵母还原，但在包装的成品酒中会被释放，如此导致早期的风味败坏。二氧化硫也提供了一个胶体稳定性的角色，而且众所周知在葡萄酒发酵中作为一个抗氧化剂的作用。但是，过了一个世纪后，知道通过人类挑战实验，二氧化硫的摄入能导致咽喉刺激、胃与肠刺激及呕吐、头痛、低色指数性贫血和其它方面的影响，因此许多国家的监管机构都制定了一个包装产品中的SO2法定限量。再者，已经报道二氧化硫与异味有关，因此懂得在酿造过程中二氧化硫形成的控制对酿造者来说是很重要的。在发酵麦汁中二氧化硫的形成已经被很好的描述过了。在硫的生物合成期间，包括氨基酸蛋氨酸和半胱氨酸，硫酸盐被主动运输穿过质膜，硫酸盐通过NADPH直接还原成亚硫酸盐是不可能发生的，因为这个反应要吸收很高的能量（△G°/=+45.2kJ/mol），但是这个反应能够通过ATP硫酸化酶，通过硫酸盐的腺嘌呤基化，使它的电位降低而完成。图1中给出了相应的步骤，图示说明了酸性亚硫酸盐（HSO3-）如何形成，哪一个是还原hso3-为硫化物的亚硫酸盐还原酶（SiR）的底物。尽管酵母对细胞内HSO3-的累积有一个基本的耐受性，但它可能是细胞毒素，因此通过SSU家族基因调节的防护机制存在以便向细胞外泵出有毒中间物。减少SIR活性将会使发酵麦汁中SO2含量提高已经被提出，目标对准MET

基因，尤其是MET1、MET5、MET8和MET10基因的基因控制研究已经证明对亚硫酸盐产生有明显的影响。酿酒酵母的SIR是一个604KDa的蛋白质，它有一个a2P2构造，也包含参与HSO3-还原的辅基，这些基团的其中两个与基于细菌亚硫酸盐还原酶同化力的此反应密切相关。siroheme（可能叫白亚铁血红素）分子（图2A），一个包含四氢卟琳的铁，和一个由一个［4Fe-4S］五环辛烷组成的硫簇铁（ISC）（图2B）合作，把推挽式的6个电子转移到SIR催化部位的酸性亚硫酸盐键上，这个所推荐的HSO3-完全还原是由Crane等人的研究提供的（图3）,对于解释一旦hso3-键合到催化部位上便没有中间体被释放出来是很重要的。因此，siroheme（可能叫白亚铁血红素）或ISC的效能和结构的任何改变都能导致SIR活性的降低，似乎是合理的。SulphateTrutispifrienCellWall\LASTATPADPSulphateTrutispifrienCellWall\LASTATPADPPAPSN.ADPH.I'rjt(njd1PAFSReductasePAP+NADP+Snip/irtePumpHSRPAPSN.ADPH.I'rjt(njd1PAFSReductasePAP+NADP+Snip/irtePumpHSR；-SulphiteReductase6EI..OTowardcysandmetbiosynthesis,^<***图1.酿造酵母在硫酸盐同化途径过程中，亚硫酸盐的形成和排出。图2.亚硫酸盐还原酶复合体的辅基siroheme（可能叫白亚铁血红素）（a）和［4Fe-4S］硫簇铁（b）。研究者已经证明的一个现象是高葡萄糖含量麦汁的影响导致了亚硫酸盐生成的增加，Gyllang等人建议，较高的亚硫酸盐量是在糖酵解和酒精发酵期间，生成的乙醛和丙酮酸盐在细胞内积累的结果，两者都与亚硫酸盐键合，这就阻止了SIR酶使其减少。从另一个角度看，通过后来O'Conner-Cox先生及同事对于酿造过程中酵母线粒体角色的开创性研究，知道了当酵母利用葡萄糖作为碳源时，酵母线粒体的发育被束缚，线粒体是包含两个膜的细胞器，内膜和外膜，两者都含有独特的被称作双磷脂酰甘油（1,3-二［1',2'-二酰-3'磷酰基-sn-甘油］-sn-甘油;CL）的脂类（图4）。双磷脂酰甘油的生物合成与三个相继的反应有关（图5），磷脂酰甘油磷酸（PGP）合成酶催化了通过核苷酸胞腚-5'-三磷酸-1,2-二脂酰甘油（CDP-DG）和甘油-3-磷酸转化形成CL的关键步骤，通过PGP磷酸酯酶作用，PGP去磷酸作用形成磷脂酰甘油是中间步骤，最后的步骤与CL合成酶有关，在这个地方发生了磷脂酰基从CDP-DG转移到PG上。一些最新的证据表明，葡萄糖抑制了双磷脂酰甘油的形成，其它的研究也已经证实肌糖抑制了PGP合成酶的活性，这对于双磷脂酰甘油的形成是一个关键步骤。许多研究也显示甘油可能通过增强CRD1（结构基因编码CL合成酶）的表达而提高了线粒体的发育，并且甲状腺氨酸（甲状线素）已经显示出在老鼠心脏线粒体中对这些酶的活性起促进作用。CL和许多键合蛋白质的线粒体膜相互作用，它与呼吸链酶复合侬、III,IV和V（ATP合成酶）及腺嘌呤核苷酸转运体（AdN转移酶）相关联，它也在蛋白质进入线粒体过程中起了到关重要的作用。再者，CL的缺乏会导致线粒体DNA的不稳定、活力减小及在高温下能起作用的呼吸细胞减少。在最近的研究中，研究的焦点是用改变酵母中CL的含量，产生呼吸缺陷型

酵母细胞，评价对发酵的影响来确定线粒体与亚硫酸盐产生的相关性，测定到线粒体起了一个作用，机制与前面提到的一个关键的SIR辅基有关。尺口匚皿T11rti图3.Crane等人推荐的酸性亚硫酸盐还原成硫化物的反应。电子通过［4Fe-4S］簇被传递，siroheme（可能叫白亚铁血红素）键合到底物上，同时质子被转移到释放出的H夕中，氧原子被转移到酸性亚硫酸盐还原的6个电子上形成硫化物。图4.图示说明的4个不饱和酰基部分的双磷脂酰甘油（心肌磷脂抗原，CL）结构。图5.CL生物合成途径材料和方法实验室规模发酵发酵用安装有胶塞并顶部用石蜡膜封口的500ml无菌真空厄伦美厄烧瓶，在15℃冰箱中完成，为了把氧的进入降到最低，橡胶管被连接到另一端浸入水中的真空口上，以允许CO2的逸出及阻止氧气的进入。所有发酵都是控制可发酵性糖90%是葡萄糖，10%是麦芽糖，没有麦芽三糖的17°P麦汁。发酵10天后，取样分析，所有样品都立即在温度4℃,3,300义g速度下离心30min以去除酵母。离心后，嫩啤酒样品转入另一容器立即冷藏直到分析，如果进行H2s分析，样品冷贮需要在24小时内分析。呼吸缺陷型酵母培养呼吸缺陷型（RD）酵母突变菌株收集自我们的常规酵母质量研究室RD平皿分析，一标准琼脂培养基用于在30℃下有氧培养酵母96小时，双倍的带有琼脂的磷酸缓冲液（6.1g的NaH2PO4,5.8g的Na2HPO4,15.0g的琼脂同500mL的DI水混合）和双倍的颜色指示剂（1.0g的2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）同500mlDI水混合）混合成等份的无菌混合物，倾倒在平皿上，平皿在室温下面向上培养4小时，包含TTC（2.og/L）的溶化的软琼脂用做颜色指示剂覆盖物。用无菌环从TTC覆盖的与RD相关的显示白色形态的两个菌落中挑取酵母，接种到培养烧瓶中，用于培养的麦汁初始体积是50ml。麦汁和酵母被转移到一个无菌的塑料厄伦美厄烧瓶中，放在一个轨道振荡器中振荡24小时，培养温度要准确控制在25℃,酵母要在同样的条件下使用250ml和1000ml更大规模的分别培养48小时和72小时，一旦足够的酵母数量产生，酵母就要再接种三次，以便增殖有氧生长的突变体，从每三次培养中收集啤酒样品，分析酒精、外观发酵度、CO2和残余的蛋氨酸和硫酸盐。RD酵母实验在添加酵母之前，收自于生产初始状态一系列控制发酵的健康新鲜酵母（活力97.2%）以与RD酵母进行对比，RD酵母和控制酵母菌落的细胞浓度用血球计分析以测定接种比例，目标是细胞浓度达到19.0义106个细胞/mL,麦汁用一个无菌气体分散装置充气，使氧气达到饱和度（8-10mg/L）,使用简单的完全随机化的设计，使每一个酵母实验都被接种三次。CL变更实验为了改变CL的形成，酵母在三个不同条件下培养，酵母泥以7ml的等分部分用上述讨论的各种处理方式在40ml的无菌水中培养18小时，以改变双磷脂酰甘油的形成：肌糖（1mg/mL）、甘油（40%体积）、15.0Pg/mL的甲状腺素、和无菌水。培养的酵母泥添加到氧气含量为12.0mg/L的麦汁中。肌糖购买于本地的小卖部，甘油从Sigma-Aldrich公司获得（纯度99.5%光谱测量级），甲状腺素（左旋甲状腺氨酸钠）药片从VirbacAH有限责任公司获得，作为完全的随机化设计，所有的实验都被接种三次。H2s分析啤酒中的硫化氢含量用气相色谱（GC）（安捷伦6890A）测量，气相色谱柱是一个MXT-1（100%二甲基聚硅氧烷交联），60m,0.53mmID,7pm膜厚度，编目号#70193,一个安捷伦顶空自动进样器（安捷伦G1888）用于净化和分离样品，一个Sievers355硫化学发光检测器（SCD）用于区分硫种类，发酵结束后离心的样品被冷贮（大约6℃）在干净的40ml的玻璃小瓶中（安捷伦顶空螺旋盖）直至分析。气相色谱灶温条件如下：初始温度50℃,以10℃/min的升温速率升到80℃,接着以10℃/min的升温速率220℃,运行9min。氨基酸用带有可编程荧光检测器和有柱前衍生化的四个一组泵的安捷伦1100系列的高效液相色谱仪（HPLC）测定氨基酸，首先用苯二醛和3-巯基丙酸控制伯氨基酸的衍生，然后仲氨基酸用9-荧光尼龙甲氧氯甲酸酯衍生，然后衍生物在一个反相ZorbaxEclipseAAA柱（安捷伦分析柱，4.6X150mm,3.5^m）上分离，并且用安捷伦1100系列可编程荧光检测器进行荧光检测，蛋氨酸是令人感兴趣的伯氨基酸，半胱氨酸不能用这个方法检测。无机离子和有机酸在本实验中硫酸盐是感兴趣的主要无机离子，DionexCDMII电导检测器，IonPacAS11柱，IonPacAS11加装防护柱，和ATC-3前置柱及ASRSUltraII自回收干扰抑制器被使用。二氧化硫总二氧化硫用通过流动进样分析改良的副品红化学法测定，Skalar系列设备用于分析，包括SA1000自动取样器、SA5000化学装置单元，及Skalar反应器和控制器。比重、酒精、浓度和PH使用带有AlcolyzerPlus酒精分析仪的安东帕DMA5000比重计和VarianCary50分光光度计测量麦汁和发酵样品的比重、酒精、外观浓度和实浓。PH测量用Altexm70pH计进行。菌量在实验室发酵期间生产的菌量总湿重，在嫩啤酒被轻轻从厄伦美厄发酵烧瓶中转入另一容器之后被测定，在酵母再悬浮前，酵母和烧瓶中残存的啤酒混合并补足去离子水，然后转移到预先称重的离心管中，酵母泥在4,000RPM下4℃离心30min,当离心完，啤酒被转入另一容器，让酵母留在离心管中，测量此酵母和离心管的重量便是总湿重，用总湿重减去离心管的重量便是一共产生的生物量，再减去接种的量，以确定后形成的菌量。统计分析方差分析（ANOVA）法被使用来分析实验数据，详细方法可在别处找到，所有分析都用版本15的Minitab软件来完成。结果和讨论呼吸缺陷型酵母的培养在酵母转移到随后的烧瓶中期间，完成培养过程后，啤酒样品就被收集以分析5。2、酒精、PH和残存的蛋氨酸和硫酸盐（表1）,每一个连续的培养都使用同样的麦汁样品，此麦汁样品是无菌的、冷贮的（4℃）直到使用。数据检测提示了一个有趣的情况，经过培养，随着蛋氨酸利用的降低和硫酸盐摄入的增加，SO2含量升高，人们普遍认为提高麦汁溶解氧将导致较低的亚硫酸盐产生，在培养期间使用给定的有氧条件，这些亚硫酸盐含量显示出相当高，并且硫酸盐摄入的增加优先于蛋氨酸的利用，暗示RD酵母细胞通过硫酸盐的同化途径正在合成S-氨基酸和其它的硫化合物。硫酸盐的摄入被两个硫酸盐转运体（高亲和力和低亲和力硫酸盐转运体，图1）促进，控制这些蛋白质的基因表达通过细胞内的S-腺苷蛋氨酸（SAM）含量紧密调节，这样，SAM细胞内的含量在硫酸盐同化途径中，在酵母繁殖期间能被耗尽，给出了升高的SO2含量，在亚硫酸盐形成之后这种堵塞可能发生。RD酵母发酵实验终结发酵（EOF）的啤酒化学参数的结果提供在表2中，实验的目标是评价如果RD突变体与它们的亲代相比是否产生较高含量的SO2，这些研究结果与这个研究假说相矛盾，但是值得注意的是RD酵母发酵甚至不比亲代弱，在别处也报道过这样的发现。再者，控制酵母比RD突变体利用了更多的硫酸盐，对于解释这些结果，一个非传统的方式是比较亚硫酸盐产生的水平与硫酸盐利用的数量，它将在酵母同化硫酸盐，生物合成生长必须的S-氨基酸和SAM的效率程度方面提供一个尺度，从方差分析结果（表3）显示，在转化过程中RD酵母效率低（P<0.05）（图.6）。为了定量在这个实验期间RD酵母增殖培养后的纯度，买到了一个添加酵母泥的样品以备呼吸缺陷型分析，标准的TTC覆盖用于找出呼吸缺陷型和呼吸充足型酵母之间的微小差别（图7）。基于这些结果，增殖培养产生了大约29%RD酵母的混合物，对于作者的了解，这是第一个与RD酵母影响SO2生成的相关报道。很清楚，额外的研究需要准确地定量这个影响是什么，但是在这个实验中已经证实RD酵母妨碍了硫酸盐的同化效率，确切的机制是什么仍然需要被研究，但已经证明crdlA突变体更易于有呼吸缺陷的倾向，因此可能这与唯一的线粒体脂质，CL有关。双磷脂酰甘油改变实验来自实验的结果显示在表4中，此实验中CL的促进物和抑制物都被用于培养实验中。SO2检验的结果突出显示了富含肌糖的培养酵母泥的影响，并且假定这些培养酵母细胞的双磷脂酰甘油的发育被抑制，这就暗示了一个与线粒相关的作用。本来预计酵母用L-甲状腺素培养的发酵，应该产生较低的SO2含量，可是这些发酵有了一个更高程度的衰减，在这些发酵中，对于S-氨基酸和SAM的需求会更高是合乎逻辑的，所以要分析数据的另一种方法是使酒精发酵过程中产生的SO2标准化，这些对比显示的表5中，证明了在肌糖和L-甲状腺素培养实验之间处理方式上的明显差别（P<0.05）（图8），另外为了支撑增强CL发育将导致亚硫酸盐形成的减少这个想法，通过了一个更有效的硫酸盐同化途径，我们能看到酵母细胞用甲状腺素培养的实验中，蛋氨酸的充分利用（麦汁蛋氨酸是45.9mg/L）伴随着硫酸盐较高摄入的发生（表4）。酵母细胞用肌糖培养的发酵有较高的SO2含量，有适度的硫酸盐摄入量和生物量形成（图9）。看到的另一个有趣的相关模式是在L-甲状腺素实验中发现了较高的H2s含量，可能意味着SO2形成后通过硫酸盐同化途径硫酸盐流出的较多，硫酸盐和蛋氨酸利用的相似模式在一个用缺乏脂质和富含脂质的对比发酵研究中也报道过。双磷脂酰甘油也与另一个硫化合物，二甲基硫（DMS）通过线粒体蛋氨酸亚砜还原酶活性相关联，Anness和Bamforth提出，在蛋氨酸亚砜和亚硫酸盐还原酶之间，可能通过和硫氧还蛋白和它的酶的竞争存在一个关系，但是酵母亚硫酸盐还原酶复合体不含有也不和硫氧还蛋白相互作用，然而Samp等人证实基于目前的结果，如果双磷脂酰甘油的形成被加强，DMS生成将增加，SO2的生成将减少，这个明显的负相关将在以后详细阐明。与SIR中ISC缺乏相关的可能机制已经提出SIR的缺陷导致在发酵麦汁中亚硫酸盐的积累，看一下酸性亚硫酸盐是如何需要6个电子转移到SIR催化腔内的硫酸盐键上（图3），如果[4Fe-4S]辅基在siroheme（可能叫白亚铁血红素）末端的普罗米克斯（乙烯系单体与蛋白质共聚物纤维）上失去，那么此反应将被阻碍。尽管ISC的形成和脱辅基蛋白的成熟机制今天已被阐明，但这些［4Fe-4S］簇在线粒体内合成的观点已经建立，也已知线粒体ATP被需要去执行这些步骤，例如，已经显示不久后在线粒体内形成的伴侣蛋白质，Ssq1,与Fe-S簇密切相关，ATP耗尽将导致Fe-S蛋白质形成的完全崩溃。人们认为SIR是一种胞液蛋白，线粒体内膜ATP键合转运体，Atm1蛋白质与成熟的SIR输出机构有关，如此线粒体ATP对于完成ISC输出到胞液是必须的。另外，来自Hausmann等人的结果证实，ISC胞液装配蛋白例如Nbp35P的缺陷，导致SUL1基因2.7倍的诱发，并且证明通过减低成熟的SIR复合体的Fe-S簇，使亚硫酸盐还原酶活性缺失，是硫酸盐摄入量增加的原因。Seki等人证实siroheme（可能叫白亚铁血红素）自身能还原酸性亚硫酸盐，但是速率较慢，所以在这种条件下，细胞内酸性亚硫酸盐的累积将发生。那么线粒体ATP来源于什么地方呢？通过F0-F1ATP合成酶复合体的氧化磷酸化作用不可能是厌氧条件下发酵的原因，再者，克勒勃屈利效应（葡萄糖效应）保证了在此研究中麦汁中较高的葡萄糖含量及有氧条件将不会形成线粒体ATP，因此胞液ATP只是能流的来源，而且必须通过AdN转移酶递交，已经显示CL以6：1的比率紧密地键合到AdN转移酶上，并且知道CRDKCL合成酶）突变体有缺陷的AdN转移酶。来自于RD酵母发酵，亚硫酸盐与硫酸盐的比率较高，意味着RD酵母缺乏CL的正常发育，于是线粒体ATP受到了限制。相反地，L-甲状腺素实验显示了较低的，正常化的亚硫酸盐生成，这是提高了双磷脂酰甘油形成量，导致较高数量的线粒体ATP的结果。已知甘油促进了CRD1的表达，但是也证实在暴露在葡萄糖环境中，CRD1的表达几乎完全被抑制。不幸的是，因为这些实验中的麦汁含有较高浓度的葡萄糖，在甘油培养酵母实验中，一旦细胞被接入富含葡萄糖的麦汁后，CRD1的表达可能立即被抑制。线粒体ATP的限制束缚了生长，许多作者都已经用图解说明了亚硫酸盐形成和生物菌量形成的负相关，在相关的研究中都把目标对准了低含量的线粒体ATP上，O’Connor-Cox等人把细胞暴露于米酵菌酸中，抑制了AdN转移酶系统，发现亚硫酸盐积累明显升高，Lodoloetal等人指导的，用羰基氰化间氯苯腙（CCCP）做的相似实验也显示减少了CL合成酶的活性，同时这些报告说明迟缓发酵产生较高的SO2，遗憾的是在这些实验中SO2没有被检测。在发酵过程中DMS和SO2生成的负相关可能与CL形成有关，已经提出很可能通过蛋白质进入功能影响线粒体内部的蛋氨酸亚砜还原酶活性，由于双磷脂酰甘油的形成被增强，线粒体ATP的有效性被提高，及亚硫酸盐还原酶复合体的支撑物［4Fe-4S］成熟，因此硫酸盐的有效转化发生导致较低的SO2生成，同时蛋氨酸亚砜还原酶还原二甲亚砜为DMS似乎是合理的。结论有证据支持了在发酵期间线粒体在二氧化硫生成中的作用，如果酵母线粒体膜的CL含量被降低，那么膜有功能将被改变，由于CL紧密地键合到AdN转移酶蛋白上，蛋白又牢牢地嵌入膜中（图10），因此线粒体ATP的受限制将发生，由于［4Fe-4S］的合成，这些簇的形成（图2B）需要ATP，于是一个SIR中的重要辅基将被限制。再者，通过Atm1蛋白进行的伴侣ISC的输出到胞液中由于需要ATP也会受到影响。也有一个可能性是CL能与Atm1蛋白相互作用，如此带有［4Fe-4S］簇的细胞溶质sir复合体将完全不成熟，因此当电子转移以还原酸性亚硫酸盐时催化部位将不起作用。由于一旦HSO3-键合到SIR上，就没有中间物被释放，这使亚硫酸盐还原形成堵塞，导致在细胞内积累，假定存在的亚硫酸盐

泵由于细胞内HSO3-累积会将HSO3-排出细胞外进入发酵麦汁中，同时细胞内SAM的耗尽导致更多硫酸盐的摄入。表1.每一个培养结束后的啤酒样品的化学结果参数培养1培养2培养3总SO2(mg/L)11.828.638.1酒精(％w/w)3.476.126.74蛋氨酸(mg/L)14.519.025.2硫酸盐(mg/L)92.168.952.7表2.RD酵母实验的EOF啤酒化学结果实验总SO2(mg/L)酒精(％wt/wt)湿浓度(mg/L)SO42■摄入(mg/L)AE(°P)EOFpHRD酵母23.55.0820.222.55.514.37RD酵母24.55.0919.617.05.284.37RD酵母22.65.1520.917.05.374.37控制酵母29.45.8424.341.53.994.49控制酵母32.36.0323.944.83.574.45控制酵母30.26.1324.942.33.334.47表3.RD酵母实验中亚硫酸盐生成与硫酸盐消耗比率的方差分析表变异来源Df平方和均方F-比P值酵母类型10.46440.464422.170.009误差40.08380.0209总计50.5482

总SO2(mg/L)酒精(%wt/wt)湿浓度(mg/L)SO42-摄入(mg/L)生物量(g)EOFpHH2s(Mg/L)控制123.35.5930.341.16.714.494.5控制225.45.7333.345.77.454.463.1控制323.35.7229.141.58.864.4610.6甘油122.75.3333.043.28.504.463.2甘油221.8