elisa实验知识大汇总标本收集、原理方法步骤试剂配制质量控制结果分析等面面俱到公众_第1页
免费预览已结束，剩余2页可下载查看

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的简称。它是继免疫荧光(一)原ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(b)ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。(二)方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称0.1ml371(同时做空白孔，对照孔及阳性对照孔)(经滴定后的稀释度)0.1ml371加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB0.1ml，3710～302M0.05ml结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，反“+”“-”ODELISA450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的对照OD值的2.1方法二0.1ml，43次。↓加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、及阳性孔对照↓于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体3730-60分钟，洗涤,DDW↓(三)试剂包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液): 1.59克 2.93洗涤缓冲液(PH7.4 0.2 2.9 8.0 0.2Tween-200.05％牛白蛋白(BSA)0.1克100ml或以羊、兔等与洗涤液配成5～10％使用终止液(2M底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):0.2MNa２HPO４(28.4克／L25.7ml0.1M柠檬酸(19.2克 TMB(10mg／5ml无水乙醇)0.5ml ABTS使用液 正常人和阳性对照器材聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)4096孔，ELISA检测仪，50μl100μl加样器，塑料滴头，(四)注意正式试验时，应分别以阳性对照与对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括（2）包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般PH9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,418～24小时。蛋白条件相同时，观察阳性标本的ODOD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论