植物组织培养的培养基配制实验设计课件

姓名：郑传益学号：1101410722QQ：1410928287植物组织培养的培养基配制实验设计概要母液配制及注意事项培养基配制及注意事项武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作MS培养基营养成分较多，而且一些成分用量很小。为便于配制，可以分类扩倍制备浓缩母液，使得配制MS时快捷方便、成分需求量更为准确。武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作母液配制母液配制中注意：(1)NH4NO3、KNO3此两种药品为易爆品，取用时一定要轻拿轻放，保存在阴凉处。(2)EDTA-Na2、CoC12、2，4-D此三种药品为致癌物，配制时要带胶皮手套，或两层塑料手套。(3)定容原则：在母液配制时部分需要加热促进溶解，定容一定要等到常温下进行。母液配制母液配置要求1.按照《MS培养基成分表》中成分准备试剂。2.母液划分分组依据：a.根据元素需求量划分并配制等倍浓缩液混匀便于取用b.母液中各物质不能因反应而产生沉淀。其中，Ca2+与SO42-混合会产生CaSO4沉淀；在钼酸盐中，铵、碱金属、镁和铊盐溶于水,其他都不溶于水。3.母液扩大倍数依据：由于所配制母液在未使用情况下需要放置在4℃下保存，所以要求在该温度下不能饱和析出，以免影响使用。各物质的溶解度详细参考各物质的溶解度曲线。武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作母液配制大量元素母液I配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。倒入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。*母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯。武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作母液配制母液类别化合物培养基浓度(mg/L)母液扩大倍数1升母液中药品称取量(mg)每升培养基取母液的量(ml)I大量元素MgSO4.7H2O37010倍3700100KNO3190019000KH2PO41701700NH4.NO3165016500CaCl2.2H2O4404400表1武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作注意事项：在溶解CaCl2·2H2O

时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易暴沸，操作时要先等水温温和后加入母液配制微量元素母液II配制各成分按照表2用适量蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为1000倍的微量元素母液。倒入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作母液配制Fe元素母液III配制目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。各成分按照表3分别用适量蒸馏水将FeSO4和Na2-EDTA加热溶解后混合，再一边加热一边不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30min)，调pH值至5.5，室温放置冷却后，用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为200倍的Fe元素母液。倒入棕色细口瓶，贴好标签后再冷藏。武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作母液配制有机物母液IV配制培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，定容至1000mL，注意称量时用电子分析天平。

注意事项：由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作培养基配制武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作量筒、移液管、烧杯、蔗糖、琼脂、天平、电热炉、玻璃棒、铁架台、锥形漏斗（带橡胶管）、搪瓷杯、PH试纸、培养皿培养基配制准备：注意事项：1.培养基熔化后要趁热定容，否则培养基低温琼脂将凝固，造成营养成分浓度不均。2.对PH要求较严的目标培养物，调解pH时最好用电子pH计，以保证精确度。pH试纸的误差较大，要小心调节。可以将pH调到比最适值小约0.2，因为培养基在灭菌后，pH将变大。培养基配制武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作1.根据配方要求，用量筒或移液管从各母液中分别取出所需用量，放入同一烧杯中并将称取好的蔗糖和琼脂放在一边备用；2.将称取好的琼脂加入盛有加热后的（沸腾后停止加热）蒸馏水约300ml的搪瓷杯中溶解，并不断搅拌，直至溶液呈透明状；3.将1.烧杯中的试剂和蔗糖加入至溶解好的琼脂溶液中，边加热边搅拌，定容至1000mL；4.调节PH；5.分装标记后封装灭菌。操作步骤武汉生物工程学院植物细胞工程学——郑传益制作结语参考资料来源于：小木虫

/bbs/viewthread.php?tid=4172764中国知网空间（1）/Article/CJFDTOTAL-AHNY200804031.htm（2）/Article/CJFDTOTAL-ZWSL199701001.htm溶解性表、溶解度表、各成分物质性质——