实验二培养基的配置与灭菌

微生物学实验实验二培养基的配置与灭菌第1页试验二细菌培养基配制与灭菌试验目标：1．掌握细菌惯用培养基以及培养条件；2．熟悉高压蒸汽灭菌基本原理及应用。实验二培养基的配置与灭菌第2页培养基

人工地将各种物质按各种微生物生长需要配制而成一个混合营养基质，用以培养或分离各种微生物。营养成份：碳源、氮源、能源、无机盐、生长原因、水、pH实验二培养基的配置与灭菌第3页按培养基成份分类①天然培养基：主要成份是复杂天然有机物质，如马铃薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。比如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基等。②合成培养基：用化学成份完全了解纯试剂配制而成培养基。如高氏1号培养基，查氏培养基等。③半合成培养基实验二培养基的配置与灭菌第4页按培养基物理状态分类①固体培养基：（琼脂、明胶和硅胶）为固体培养基。可供分离、判定、活菌计数、菌种保藏等用。②半固体培养基：在液体培养基中加入少许凝固剂

0.6－0.8%琼脂惯用作细菌动力检验和菌种保留、噬菌体制剂制备③液体培养基：惯用于生理代谢研究和工业发酵实验二培养基的配置与灭菌第5页培养基配制标准①成份起源丰富，廉价，尤其是对于工业化生产用菌培养；②碳氮源百分比要适当；③pH值范围要适合所培养菌种。培养基制备过程：配料—溶解—校正pH值—加凝固剂—融化—过滤—分装—加棉塞、包扎—灭菌—无菌检验。实验二培养基的配置与灭菌第6页高压蒸汽灭菌原理：增加灭菌器内压力，使沸点增高，得到高于100℃温度，造成菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌目标。在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热穿透力比干热大；三是湿热蒸汽有潜热存在，能快速提升被灭菌物体温度实验二培养基的配置与灭菌第7页②惯用灭菌方法：普通培养基用0.1Mpa，121℃15—30分钟。灭菌温度及维持时间随灭菌物品性质和容量等详细情况而有所改变。含糖培养基用0．05Mpa，112℃灭菌15分钟，为了确保效果，可将其它成份先行121℃，20分钟灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌糖溶液。③试验室中惯用高压蒸汽灭菌锅有立式、卧式和手提式实验二培养基的配置与灭菌第8页试验内容：1、麦芽汁培养基(酵母+霉菌)：共取200ml其中取20ml，4支试管*5ml/支其中取剩下180ml/250ml三角瓶，并加入3.6g(2%)琼脂，包扎灭菌2、细菌肉汤培养基牛肉膏：0.5%；蛋白胨：1%；NaCl：0.5%。pH7.2-7.4。1）配制160ml液体肉汤培养基①先80ml水放于烧杯中，然后称取蛋白胨1.6g，氯化钠0.8g，牛肉膏0.8g（一载玻片放于台秤上，将牛肉膏0.8g放于其上，称所需量，然后把牛肉膏和载片一同放入烧杯中）。②稍微加热溶解，但不要把水烧开。③补足80ml水量。待冷却。④测pH值，用NaOH调pH值至7.5-7.6（靠近时逐滴加入）2）取120ml液体肉汤培养基完全转入250ml三角瓶中，加琼脂2.4g，包扎标识灭菌。3）取出40ml液体肉汤培养基倒入200ml三角瓶中，加入0.8g琼脂(2%)，先划线标识水位，放在电炉上加热溶解，加水补齐水位，然后用分液器分装，5ml/支，共6支试管，分装后马上冲洗分液器，以免凝固。3、PDA每组两支，每组交两支试管（带试管塞），用于做青霉和假丝酵母小室，2*2ml*15组=60ml实验二培养基的配置与灭菌第9页一试验目标1．掌握细菌惯用培养基以及培养条件；2．熟悉高压蒸汽灭菌基本原理及应用范围；3．掌握高压蒸汽灭菌操作方法。二试验原理1．培养基定义2．培养基分类①成份不一样分为：天然、合成、半合成②物理状态不一样分为：固体、半固体、液体③用途不一样分为：基础、营养（富集）、判别、选择3．培养基配置标准：起源丰富、碳氮比、pH值4．高压蒸汽灭菌原理和操作步骤①原理：②干热灭菌和湿热灭菌区分：温度、