罗氏试剂盒说明书 P1NP

1、12177269001V6总I型前胶原氨基末端肽（total P1NP） Elecsys 和 cobas e 分析仪 5/5 2007-07, V 8 03141071 190 100测试本试剂盒适用的分析仪Elecsys 1010Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601主要用途用于体外定量检测人体血清或血浆中的总P1NP。该检测适用于绝经后女性骨质疏松症患者1，2，3和Pagets骨病患者4，5，6的疗效评估。Elecsys和cobas e 免疫分析仪的工作原理是电化学发光免疫分析“ECLIA”。临床应用骨基质的有机成分

2、中，I型胶原的含量超过90%7。纤维母细胞和成骨细胞先合成I型前胶原，后者继而形成I型胶原。I型前胶原在其氨基端（N端）和羧基端（C端）存在延伸肽链。这些延伸肽链（前肽）在前胶原转化为胶原的过程中将被特异性的蛋白酶切割。当成熟的胶原形成后会沉积于骨基质中。本试剂检测的是氨基端的延长肽链，即1型前胶原氨基末端肽（P1NP）。P1NP反映的是I型胶原的沉积情况，因此是作为一项骨形成标志物8，9。在I型胶原的形成过程中，P1NP被释放至细胞外间隙最终进入血液。P1NP为三聚体形式（由三聚体胶原转化而来），但很快会在热降解作用下成为单体形式10，11。Elecsys P1NP试剂检测的是血液中所有的P

3、1NP形式，因此称为总P1NP。检测原理双抗体夹心法，总检测时间：18分钟第一次孵育：20l样本和生物素化的单克隆P1NP特异性抗体一起孵育。第二次孵育：添加钌复合物标记a的单克隆P1NP抗体和包被链霉素的磁珠微粒进行孵育，形成双抗体-抗原夹心复合体与磁珠通过生物素和链霉素的作用结合。将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。仪器自动通过2点校正的定标曲线计算得到检测结果。 a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(

4、bpy)三联吡啶钌试剂工作溶液M包被链霉素的磁珠微粒（透明瓶盖），每瓶6.5ml：包被链霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1生物素化的anti-P1NP抗体（灰色瓶盖），每瓶10ml：生物素化的anti-P1NP抗体（鼠源）约2.5mg/L，磷酸盐缓冲液100 mmol/L，Ph7.2; 防腐剂。R2 钌复合物标记a的anti-P1NP抗体（黑色瓶盖），每瓶8ml：钌复合物标记a的anti-P1NP抗体（鼠源）2.5mg/L；磷酸盐缓冲液100mmol/L，Ph7.2; 防腐剂。警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当

5、地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据报告。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。试剂处理试剂盒（M,R1和R2）为即用型，不能分开使用。试剂相关信息可以通过试剂条形码阅读获取。储存及稳定性存放于28。请垂直摆放Elecsys 总P1NP试剂盒，确保仪器的自动搅拌器能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有效期内均可使用开封试剂，288周放置分析仪MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e 601上8周放置分析仪Elecsys 2010 和 cobas e 411上8周放置分析仪Elecsys 1010上4周（试剂交替放置于冰箱和20-25的分析仪中，持

6、续开盖的情况下至多20小时）样本的采集和准备下列类型的样本符合检测要求，并且样本量要充足。血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管收集。肝素锂和K3-EDTA抗凝的血浆都适用。标准：回收率90-110%，斜率0.9-1.1，截距0.95。稳定性：15-25可保存24小时，2-8可保存5天，-20可保存6个月。标本至多反复冻融5次，否则将影响检测结果。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。有沉淀的样本检测前必须先作离心处理。避免使用添

7、加叠氮化合物的样本和质控品。检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡 (20-25)。由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。需要的物品（未提供）货号03141080, total P1NP CalSet, 规格4 x1 ml货号11972227, PreciControl Bone，规格2 x2 ml，分别为PreciControl Bone 1,2和3货号11732277，Diluent Universal，规格2 x16 ml，样本稀释液或者货号03183971，Diluent Universal，规格2 x36 ml，

8、样本稀释液实验室基础设备Elecsys 1010/2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪Elecsys 1010/2010和cobas e 411分析仪所需材料：货号11662988, ProCell, 6 x 380 mL ,系统缓冲液货号11662970, CleanCell, 6 x 380 mL,测量池洗液 货号11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液货号11933159, SysClean 适配器 货号11706829, Elecsys 1010分析杯, 12 x 32分析杯,或者货号11706802

9、, Elecsys 2010分析杯, 60 x 60反应管,货号11706799, Elecsys 2010 分析吸头, 30 x 120 移液管吸头 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪所需材料：货号04880340,ProCell M, 2 x 2 L 系统缓冲液货号04880293, CleanCell M, 2 x 2 L测量池洗液 货号03023141, PC/CC杯, 12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell M。货号03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试

10、剂针。货号12102137,反应杯/吸头组合装,84反应杯/吸头 组合装48盒,废物袋 货号03023150, WasteLiner,废物袋 货号03027651,系统清洁适配器 M所有分析仪需要：货号11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系统清洗液 检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取。在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys20

11、10和cobas e分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（20C）内。避免泡沫产生。分析仪能自动调节试剂温度和开、关各试剂盒瓶盖。Elecsys 1010 分析仪: 将冷藏试剂室温平衡至20-25C左右，放置分析仪的试剂盘（20- 25C）内。避免泡沫产生。使用前后手动开关试剂盒瓶盖。使用后保存于2-8C冰箱。定标溯源性：该检测方法可溯源至掺入称量法参考标准。每套Elecsys total P1NP 试剂的条码标签上均含有其批号特异的定标信息。使用Elecsys total P1NP 定标液可调整定标曲线。定标频率：新批号试剂必须进行定标（新试剂盒在分析仪上放置不能超过2

12、4小时）。以下情况建议重新进行定标：MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析仪:使用同一批号试剂，1月后（28天）7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）Elecsys 1010 分析仪:每盒试剂7天后（室温 20-25C）3天后（室温 25-32C）所有仪器根据需要：如失控。质控室内质控可使用Elecsys PreciControl Bone 1,2和3。也可以使用其他合适的质控品。各浓度质控至少每24小时内检测一次，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。若失控

13、每个试验室必须采取相应的纠正措施。计算仪器会自动计算每个样本中的分析物浓度(单位是g/L或ng/mL)。干扰因素检测结果不受黄疸（胆红素1112mol/L或65mg/dL）,溶血（血红蛋白1.1mmol/L或1.8g/dL）,脂血(脂肪乳剂 2000mg/dL)和生物素（ 5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本。浓度达2490IU/mL的类风湿因子对检测无影响。浓度达3900g/L(ng/mL)的P1NP无HOOK效应的影响。体外对28种常用药物进行试验,涵盖了治疗骨质疏松症的常用药物，如伊班磷酸盐、利赛磷酸盐、双磷酸盐及雌激素治疗（HRT）、钙和维生素D等，未发现会影响检测结果。

14、由于使用鼠源性的单克隆抗体，接受鼠源性单克隆抗体诊疗过程的病人会造成错误结果。少数病例中高浓度的钌抗体会影响检测结果。试剂添加了额外物质减少这些影响。特别高浓度的链霉素抗体会干扰检测结果。细胞毒性药物可能会影响骨骼的代谢，使用时需注意对检测结果的影响。作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果检测范围5-1200g/L或ng/mL（通过最低检出限和厂商定标曲线的最高值确定）。低于检出限的值报告1200g/L（ng/mL）。稀释高于检测范围的标本可用Elecsys Diluent Universal以1：2稀释后检测（可手工稀释或由MODULAR ANALYTICS

15、 E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析仪自动进行稀释检测）。Elecsys 1010分析仪无法自动稀释，只可手工稀释后检测。稀释样本的检测结果须100g/L（ng/mL）。若为手工稀释，检测结果需乘以稀释倍数。若为仪器自动稀释，仪器软件将自动计算出乘以稀释倍数后的检测结果。若用肾功能不全患者的血清进行样本稀释，可能会出现非线型的结果。期望值下列参考范围通过Elecsys total P1NP检测参与骨质流失研究（OFELY12，13）的573位健康女性得到，以下数据单位为g/L（ng/mL）14：b）HRT：接受激素替代治疗的患者图1：正常女性、未治疗绝经前女性（n12

16、9）与绝经后女性（n290）体内tP1NP浓度（g/L或ng/mL）的频率分布图。x：total P1NP（g/L或ng/mL）y：频率（）- -：绝经前女性：绝经后女性图2：接受HRT治疗的女性患者（n154）与不接受HRT治疗女性患者（n290）体内tP1NP浓度（g/L或ng/mL）的频率分布图。x：total P1NP（g/L或ng/mL）y：频率（）- -：接受HRT治疗的女性：不接受HRT治疗的女性total P1NP具有较小昼夜和季节节律性变化（约6）15,16，且饮食对检测没有影响17,18。骨代谢疾病或肾功能不全患者的total P1NP水平会明显上升。某些可引起继发性骨病的

17、疾病患者total P1NP水平也会升高。每个实验室应通过实验确定参考范围的适用性，必要时建立本实验室的参考范围。特殊的性能指标该检测系统的性能数据如下。各实验室由于实际情况不同，所得出的数据可能会稍有差异。精密度应用Elecsys试剂盒、人混合血清样本和质控品验证重复性，按照NCCLS的EP5-A执行：每天6次，共10天 (n=60)。批内精密度由 MODULAR ANALYTICS E170分析仪完成，n=21下面是获得的结果。c）HS：人血清d）PC：PreciControl分析灵敏度（最低检出限）5 ng/mL（g/L）最低检出限指区别于零浓度的分析物最低检测浓度。最低检出限是最低浓度

18、标准品+2SD得到的浓度（厂商定标品1+2SD，批内精密度，n=21）。方法学比较使用Elecsys total P1NP检测（y）和某性能可靠的商业化P1NP试剂（x）同时检测临床标本，结果的相关性如下（g/L或ng/mL）：标本数：76Passing/Bablok19 线型回归y=1.01x+1.73 y=1.02x5.55T=0.879 r=0.981样本的tP1NP浓度为19.7至319.5g/L（ng/mL）分析特异性与-CTx,骨钙素，甲状旁腺素（PTH）和25-OH-维生素D的交叉反应性1%。参考文献1. Fink E, Cormier C, Steinmetz P, et al

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