高效液相色谱在药学中的应用

1、高效液相色谱在药学中的应用高效液相色谱法（PLC）是20世纪70年代发展起来的一项高效、快 速的分离分析技术已被广泛用于各个领域是以经典的液相色谱为基础， 引入气相色谱的理论与实验方法，将流动相改为高压输送，并采用高效固 定相及在线检测等手段，发展而成的分析、分离方法。以其灵敏度高、选 择性好，可分析微量组成甚至痕量样品等特点，成为医药分析领域应用最 广、发展最快的现代分析技术之一。有的已被列入药典，成为环境污染物 检测技术及化工产品质量检验中的标准方法。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：应 用了颗粒极细（一般为0颇以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱 效高，分离效率

2、高；采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的 分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；广泛使用了高灵 敏检测器，大大提高了灵敏度。与气相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：不受试样 的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广可选用不同性质的各种溶剂 作为流动相而且流动相对分离的选择性有很大作用此分离选择性高； 一般在温室条件下进行分离，不需要高柱温。高效液相色谱的研究应用进剧物与人类的健康生活质量的提高 关系极大，许多药品由于受到纯度的影响，药效不能充分发挥，甚至产生 毒副作用；有时服用前需作各种试验，带来很多麻烦。外消旋体药物是最 典型的例子之一。它由左旋与右旋两种光学异构体组

3、成，不同的异构体药 理与疗效完全不同。以往由于分离与纯化能力的限制，市场上常以混合物 即外消旋体出售。即使有少量的分离后的药物出售，价格也极为昂贵，日 前美国FDA（食品和药品管理局和西方许多国家的有关部门都已作出了禁 止外消旋体药物在市场上销售的决定，必须把它分离成单一的左旋或右旋 体才能作为产品上市所以药物产品对分离与纯化技术提出了更高的要求。色谱是目前分离与纯化领域中处理多组分复杂体系的最有效的方法，在各 种色谱技术中，HPLC又是分离与纯化药物的最佳选择。高效液相色谱法已 广泛应用于各种药物及其制剂的分析测定，尤其在生物样品、中药等复杂 体系的成分分离分析中发挥着极其重要的作用。随着与

4、质谱、核磁共振波 谱等联用技术的发展，高效液相色谱法的应用将愈加广泛。在鉴别中的应用在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可 用于药物的鉴别。如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定：在 含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的 保留时间一致。头抱拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、 曲安奈德注射液等多种药物均采HPLC法进行鉴别。在杂质检查中的应用HPLC分离效能高，灵敏，在药物的杂质检查中应用广泛。主要用于药物 中有关物质的检查。“有关物质”是指药物中存在的合成原料、中间体、 副产物、降解产物等物质这些物质的结构和性质与药物相含

5、量很低， 只有采用色谱的方法才能将其分离并检测。若杂质是已知的，又有杂质的 对照品，可用杂质对照品做对照进行检查。若杂质是未知的，可以采用主 成分自身对照法或峰面积归一化法进行检查。在检测药物含量上的应用在药物分析中，高效液相色谱由于其专一性，灵敏度高，快速简便的 特点，广泛的应用于药物分析中的定量分析，尤其在干扰因素较多的时候 表现出更大的优越性。关日晴采用高效液相色谱法测定盐酸洛美沙星滴眼 液中的洛美沙星含量；用主为分离柱，0.02tool/nn酸溶液（用三乙胺调 节pH值至2.6）乙腊（体积比85:15）为流动相，检测波长287nm洛美沙星 进样量在0.4卜0.72g范围内与峰面积线性关

6、系良（好0.9998）平均回 收率100.4,重复进样祥SD0.33（n-6）。张敏等在用高效液相色谱法测定 清热丸中黄苓苷的含量中此外国内还对喹诺酮类抗菌n、复方阿莫西林粉中阿莫西林和克拉维酸口复方感冒液芩连口服液中黄苓苷口、 氢溴酸右美沙芬片、饲料中氯羟毗啶、注射用硫酸奈替米星、小诺霉素中 C2b、保健食品中的西地那非和西力士、植物愈伤组织中的喜树碱及其衍生 物、饲料中十三种磺胺类药物等药物的测定进行了研究。在利用高效液相 色谱法进行测定与其他技术联检测器一般有紫外分光光度质谱等。这些精密的检测器决定了分析的灵敏度，对于分析起着重要的重要，是高 效液相色谱分析法中重要的组成部分。在药效检测

7、上的应用高效液相色谱法能同时进行分离和定量测定的优点在治疗药物检测和 药物代谢动力学中体现地尤为突出。药物的治疗效果与其及其代谢物在血 液中的浓度有关。治疗药物通过一段时间的使用后，在体内还有一定的残 留，同样会影响人的某些生理功能，因此进行体内药物残量分析也成为近 年来新药效能研究的主要内容。从高效液相色谱法的发展趋势来看，高效 液相色谱在仪器、检测器、固定相等方面有了很大的发展，这为高效液相 色谱法的广泛应用打下了坚实的基础。每一种分析技术均有其使用范围和 方法的局限性，将单一色谱技术联用能获得更大的发展。尤其是色谱一色 谱联用、色谱一光谱联用、柱切换技术、高效液相色谱一质谱连用、高效 液

8、相色谱，傅立叶变换红外吸收光谱联用等。高效液相色谱与其它先进技 术联用，将是高效液相色谱今后的主要发展方向。这里就拿高效液相色谱 一质谱连用来说，代谢物鉴定是药物代谢领域的日常工作，而质谱仪是完 成该任务的主要工具。将动物试验中的代谢物进行毒性研究，是制药工业 中毒理学试验的基础。采用人肝组织，可在药物发现阶段测定人体临床试 验产生的代谢物。另外随着现代药物选择性的提高，剂量越来越低，有时 血药浓度很低即可产生药效。对碱性药物具有非常高的检测灵敏度，使过 去难以实现的痕量分析变得容易。新型离子化方式可能对一些中性化合物 进行高灵敏度测定。的高选择性和测试速度，使其在大多数药物的生物样 品分析中

9、，取代了其他类型的检测方式。液相色谱串联质谱法具有高度的 专属性，对多数药物的检测灵敏度超过其他分析方法，使定量测试速度显 著加快，可以对混合物中的微量组分进行结构分析，适应了现代药物研究 中高通量的要求。无疑已经成为药物动力学和代谢研究的核心分析技术， 其潜力尚待进一步开发。高效液相色谱在药物残留上的应用由于高效液相色谱能够对含量复杂组分进行定量泛使用于药物残留的测定上。周东海等以高效液相色谱法建立了猪、羊、鸡肝组织中 西维因残留量的检测方法。采B色谱柱，二极管阵列检测器，甲醇 （65/35为流动相,222nm检测波长下进行检测。西维因对照品溶液的最低 检测限为）.1mg/I线性范围为）.120mg/I标准曲线回归方程为-22459 83+454684 31X，线性关系良好r-0.9999。样品以乙腊提取，并加入无 水硫酸钠和正已烷过滤后去除杂质乙腊层佃550C下水浴氮气吹干， 残渣用甲醇溶解后，进样分析。平均回收率均大于，日间和日内变异 系数均小于10%。符合药物残留痕量分析要求。林海丹等研究了动物源性 食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留的提取、净化和高效液相色谱分析条件，建 立了高效液相色谱法测定动物性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留的方法，