实验二 培养基的配制和灭菌

1、实验二 培养基的配制和灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法.3.进一步熟练掌握手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法。二、实验器材1.药品及试剂：可溶性淀粉，KNO3，K2HPO43H2O，MgSO47H2O，FeSO47H2O，1mol/L NaOH，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCl2.仪器及其它试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0) 、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠、PH试纸三、实验内容1.分组配制高氏一号培养基3

2、00ml。配方：可溶性淀粉20g NaCl 0.5g KNO3 1g K2HPO43H2O 0.5g MgSO47H2O 0.5g FeSO47H2O 0.01g 琼脂 15-25g 水 1000ml pH 7.4-7.62.配制牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏1.5g 蛋白胨5g NaCl 2.5g 琼脂7.5g 水500ml PH 7.4-7.63.每组制备玻璃珠无菌水(45ml)三角瓶2个。4.每组制备无菌水试管(4.5ml/管)10支。5.每组包9cm培养皿24套，6套为一包。6.每组包1ml吸管5支，玻璃刮铲4个。四、方法步骤（一）培养基的制备与分装1.称量 按培养基配方比例依次准确地

3、称取药品。可溶性淀粉先用少量热水溶化后再加入其他成份，补足所需水分，混匀后加入琼脂。2.熔化 在沸水浴锅中加热熔化。3.调pH 用1mol/L NaOH调pH至7.4-7.6。4.过滤 趁热用多层纱布过滤（本实验勿需过滤）5.分装 将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，注意管口不要沾上培养基。液体分装装量不超过试管的1/4，固体分装装量不超过试管的1/5，分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半，半固体分装装量为试管的1/3，灭菌后垂直待凝。6.加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。试管应先捆

4、成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。（二）无菌水的制备7.用量筒量取45ml水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。8.用5ml吸管取4.5ml水于试管中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。（三）器皿的准备9.培养皿的包装 每6套一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里，加盖扣严）。10.吸管的包装 首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。11.玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。（四）培养基、无菌水、器皿的灭菌12.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，1.05kg/cm2压力，121.313.灭菌完毕，将试管培养基冷至5014.将灭菌的培养基放入3715.器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。五、思考题1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？2.加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到