颅内感染实验室诊断技术新进展课件

1、颅内感染的实验室诊断技术新进展颅内感染的实验室诊断技术新进展颅内感染实验室诊断技术新进展课件颅内感染实验室诊断技术新进展课件 巢式 （ ）本法需设计引物两套，对脑脊液进行两步法基因扩增，检测其中含量低的病原体。巢式对革兰染色、培养或抗原检测阴性或不确定时更有检测价值。 巢式颅内感染实验室诊断技术新进展课件等用巢式检测脑脊液中含量甚微的结核分枝杆菌，较传统的方法敏感度高出倍。等对疑有的儿童脑脊液应用半巢式检测脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和流感嗜血杆菌，阳性和阴性预测值均为以上。 , , , . . (). , , , . , . . ().等用巢式检测脑脊液中含量甚微的结核分枝杆菌，较传统的方法敏感

2、 荧光定量 （ ）是常规基础上加入荧光探针，具有准确性高、重复性好等特点，已广泛用于基因表达、病原体检测等领域。应用检测细菌性脑膜炎的病原菌，阳性检出率()显著高于脑脊液培养()。 () () , , . . (). 荧光定量 () ()应用检测脑脊液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌敏感性和特异性分别达和，且不受抗菌药物应用影响。研究表明，的检测周期平均比传统短小时，有助于快速诊断，缩短患者住院时间并减少住院费用。 , , , . , , . (). , , , , . . ().应用检测脑脊液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌敏感性 基于基因序列分析技术基因核苷酸序列具有高度保

3、守性，存在于所有细菌的染色体基因组中，其在保守区之间有个变异区，利用可变区与恒定区的特性，设计细菌通用引物，能对临床分离的任何病原菌进行准确鉴定和定位及不同种属细菌的分类，较传统的细菌培养有更高敏感性。 基于基因序列分析技术应用基因扩增技术设计快速检测颅内感染常见病原菌的检测方法，能准确、快速且高效地检测脑脊液中病原菌。高通量测序技术与基因检测相结合，可以大幅度提高病原体检测速度并降低检测成本。 , , . () . , , : . , . , 应用基因扩增技术设计快速检测颅内感染常见病原菌的检测方法，能 基因芯片检测技术：基因芯片技术是一种快速、高效、高通量的核酸分析技术，已广泛用于基因检测

4、、药物或耐药基因的筛选、疾病相关基因的诊断、病原微生物感染的鉴定等领域。 基因芯片检测技术：侯晓霖等通过数据库检索，筛选了包括脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌及其他凝固酶阴性葡萄球菌等化脓性脑膜炎常见细菌的多条序列特异性探针（覆盖脑膜炎常见病原菌的亚种），并根据临床流行情况变化进行探针增减来满足临床需求。 侯晓霖, 梁志娟, 王振海. 化脓性脑膜炎脑脊液常见病原菌基因芯片的构建. 中国医科大学报().侯晓霖等通过数据库检索，筛选了包括脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、刘志忠等应用基因芯片法检测临床脑脊液感染常见的个种（属）病原菌，包括金黄色葡萄球菌、凝固

5、酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌,与传统细菌培养比较符合率为，证实了芯片诊断技术筛查脑脊液病原菌的可行性，具有简便、快速、准确和高通量等优点，对临床样本检测及流行病学调查有重要意义。 刘志忠, 张艳, 石广志. 基因芯片法检测脑脊液病原菌的临床应用. 中华实验和临床感染病杂志:电子版().刘志忠等应用基因芯片法检测临床脑脊液感染常见的个种（属）病原颅内感染实验室诊断技术新进展课件 生物化学标志物 乳酸( )脑脊液乳酸是脑组织能量代谢的底物，是鉴别细菌性及病毒性颅内感染常用的生化标志物之一，细菌性感染时其含量升高，病毒性感染时无显著改变。 . ,

6、, , . () . (). 生物化学标志物 等对有关脑脊液乳酸检测在细菌性颅内感染诊断价值的个研究进行荟萃分析发现，脑脊液乳酸含量升高诊断细菌性颅内感染的合并敏感性为，特异性为，当脑脊液乳酸时,诊断的特异性可高达。 ()等对有关脑脊液乳酸检测在细菌性颅内感染诊断价值的个研究进行荟 尿酸( ，) 脑脊液中的是由脑细胞中核酸转化而来的，因此脑脊液含量可作为脑细胞损伤的指标。发生颅内感染时，脑脊液含量显著增高()，主要是由细菌感染致使脑细胞损伤、破坏，自身代谢增强所致，同时也可能是由于炎症刺激使血脑屏障通透性增高，移行入脑脊液，使脑脊液中的增高。 刘晓华.脑脊液中尿酸的测定及其在儿童病毒性脑炎中的

7、意义.齐齐哈尔医学院学报, , (): 尿酸( ，) 刘晓华.脑脊液中尿酸的测定及其在儿童病毒性 一氧化氮（）各种伤害性刺激均可诱发脑内各区含量明显升高，颅内感染患者脑脊液含量均高于正常()，但就细菌或病毒感染而言差异无统计学意义()升高幅度与脑损伤程度有关，与感染病因无关，含量测定有助于脑脊液常规、生化正常的颅内感染的诊断。 一氧化氮（） 臭氧（ ）细菌性脑膜炎患者中臭氧含量明显高于非脑膜炎患者，其差异具有统计学意义。便捷的臭氧检测方式是目前主要的研究方向。 , , . . . 臭氧（ ） , , . 脑脊液蛋白 脑脊液蛋白细菌性颅内感染发生时，脑脊液中上述各种蛋白的含量，除胱抑素外均较病毒

8、性颅内感染时升高，而脑脊液胱抑素水平则以病毒性颅内感染升高显著。脑脊液中新型蛋白含量的测定因不受抗生素使用的干扰，为颅内感染病原菌的鉴别诊断提供了新的方向。 () () 王艳,王谷声,周世俊.血清与脑脊液降钙素原检测在儿童中枢神经系统感染的应用右江医学()： 张丽琴.脑脊液免疫球蛋白、乳酸脱氢酶及腺苷脱氨酶检测在成人颅内感染鉴别诊断中的临床意义中华医院感染学杂志()细菌性颅内感染发生时，脑脊液中上述各种蛋白的含量，除胱抑素外 降钙素原 （，）是人类降钙素()的前体物质，年由等首次报道其可作为细菌感染的早期标志物，年国际脓毒症会议把作为脓毒症诊断指标之一。与、计数、中性粒细胞比例不同，在某些自身

9、免疫性疾病(如类风湿病)，无明显增高(一般小于)。 降钙素原等发现若以脑脊液水平为阈值，其对细菌性脑膜炎和病毒性脑膜脑炎的阳性预测值分别为和。还有学者研究认为血清是诊断细菌性脑膜炎的指标，而局灶性感染和病毒性脑膜炎患者血清水平一般不会高于此值。 () 冯辉斌,周青山.促炎性细胞因子及降钙素原在颅内感染性质鉴别中的应用价值.实用临床医药杂志，()等发现若以脑脊液水平为阈值，其对细菌性脑膜炎和病毒性脑膜脑 . : . . : . 一项来自于项研究涵盖个患者荟萃研究显示，脑脊液诊断细菌性脑膜炎的敏感度和特性度分别为和。研究认为，脑脊液较脑脊液白细胞计数误诊率低，较血清敏感性高。 , . : . ()

10、: . , , . . , ().一项来自于项研究涵盖个患者荟萃研究显示，脑脊液诊断细菌性脑膜 反应蛋白 （ ，）是人体被细菌感染或者创伤后反应最为敏感的一种急性时相蛋白。可以通过免疫荧光法进行定量检测，它是反映细胞和组织损伤的一种非特异性指标，正常情况下仅少量存在于人体体液中。 . . . ，; ( ) : . 反应蛋白 . . . ，;升高可见于中枢神经系统炎症患者的脑脊液中并在恢复期消失。化脓性或结核性脑膜炎时，脑脊液、血清水平均明显增高；病毒性脑膜炎时升高仅见于脑脊液中，而血清中并不增高。 ： 刘春虹,杜彦辉.中枢神经系统感染患者脑脊液、的变化及临床意义.宁夏医学杂志()升高可见于中枢

11、神经系统炎症患者的脑脊液中并在恢复期消失。化脓 神经元特异性烯醇化酶 （ ）存在于脑神经元胞质中，脑损伤时，神经细胞崩解，血脑屏障破坏，释放入脑脊液中，使其浓度升高，是神经元损害的敏感性标志物。可造成不同程度脑实质损伤，使脑脊液中浓度增高，升高可直接反应脑损害的存在。 神经元特异性烯醇化酶病毒性脑炎病毒依靠细胞的胞饮作用穿透神经元细胞，造成对神经元的直接侵犯，胞释放，因此病脑组升高最为明显。结脑患者可导致脑梗死、脑水肿，可加重神经元损伤。所以升高也比较明显。化脑组的病变主要在脑膜，脑实质损害相对较轻。 . . ; ( ) .病毒性脑炎病毒依靠细胞的胞饮作用穿透神经元细胞，造成对神经元 胆碱酯酶

12、 （，）颅内感染时，由于血脑屏障被破坏，血浆中大分子可能进入脑脊液中，从而使其含量增加。颅内感染时，脑组织中的可能被释放进入脑脊液中，从而使其在脑脊液中水平升高。 胆碱酯酶细菌性感染时的上升幅度比病毒性感染更明显，可能是由于细菌性感染对血脑屏障的破坏更明显，血浆中更易透过从而进入脑脊液所致。不同病毒对脑脊液的活性影响不同，在已知的几种病毒中，柯萨奇组病毒()对活性的影响最大。 瞿少刚,张秀萍.病毒性脑膜炎、脑炎患儿的病原分析及部分生化指标变化的临床意义.现代医药卫生() 张秀萍,瞿少刚,章晓联,等.病毒性脑膜炎、脑炎脑脊液胆碱酯酶活性与血清病毒抗体的关系.华中医学杂志()细菌性感染时的上升幅度

13、比病毒性感染更明显，可能是由于细菌性感 白细胞酯酶 （ ，）是细胞内含有的一种特异性酶类，这种酶类只在中性粒细胞内存在。一些学者将尿液分析的白细胞酯酶试纸条用于脑脊液的细菌感染快速诊断。有资料表明，脑脊液中的检出与细菌培养阳性、潘氏试验阳性、白细胞总数和蛋白质升高以及葡萄糖降低之间存在统计学上的相关性。 刘仁淳,肖正勤,卢森厅.白细胞酯酶检测在脑脊液细菌感染快速诊断中的应用. 广东医学, , (): 白细胞酯酶 刘仁淳,肖正勤,卢森厅.白细胞酯酶检测在脑脊 基质金属蛋白酶 （ ）是一组结构与功能同源的锌离子依赖性中性蛋白酶超基因家族，可由体内中性粒细胞，巨噬单核细胞及血管内皮细胞产生。在中枢神

14、经系统感染性疾病中，参与多种病理生理活动，可协同降解多种细胞外基质（）成分，促进炎症性浸润的发生，破坏血脑屏障（）。 , , , . . (). 基质金属蛋白酶 , , , . 在化脓性脑膜炎脑脊液中水平增高表达增强,脑脊液中的水平与脑炎的严重程度具有很好的正性相关，这对病情的判断及预后有具有重要的评估意义。抑制的活性对治疗病毒性脑炎有辅助作用。目前认为是最重要的抑制物，但这一新途径由于技术的限制还有待探索。 , , . . () 在化脓性脑膜炎脑脊液中水平增高表达增强,脑脊液中的水平与脑炎 腺苷脱氨酶 （ ）是腺嘌呤核苷代谢中的重要酶类该酶的活性与淋巴细胞激活相关特殊病原菌感染如结核杆菌感染

15、可激活淋巴细胞，引起增高。相关研究发现细菌性颅内感染发生时，脑脊液中升高以结核性脑膜炎为多，化脓性脑膜炎升高次之。 , . . (). 腺苷脱氨酶 微球蛋白 （ ， ）：是一种小分子蛋白质，其存在于所有有核细胞表面，主要分布于淋巴细胞及巨噬细胞表面。正常脑脊液含量很少，时中枢神经系统内免疫系统被激活，产生大量淋巴细胞及巨噬细胞，使合成增加，大量由细胞表面脱落进入脑脊液。 微球蛋白当脑脊液中含量明显升高时可能存在细菌性脑膜炎或结核性脑膜炎，同时进行结核感染相关检验，则可以作为细菌性脑膜炎与其他类型脑膜炎鉴别诊断的一项辅助指标。水平与细菌性脑膜炎病情的严重程度相关，检测脑脊液中水平可作为细菌性脑膜

16、炎的诊断指标，并有助于观察疗效与预后。 蒋荷萍脑脊液乳酸、微球蛋白、反应蛋白和酶活性测定在脑膜炎中的应用检验医学，：当脑脊液中含量明显升高时可能存在细菌性脑膜炎或结核性脑膜炎 可溶性髓细胞触发受体 （ ，）是主要表达于中性粒细胞及成熟单核细胞、巨噬细胞表面的免疫球蛋白超家族活化受体，具有活化炎性因子并抑制抗炎因子的作用，从而在炎性反应的触发及放大过程中发挥作用。是的可溶形式，在感染过程中被分泌到体液或血浆中。 可溶性髓细胞触发受体细菌性脑膜炎时，脑脊液中的明显升高，以为界对细菌性脑膜炎诊断的灵敏度达，特异度达。随着感染的有效控制水平逐渐下降，动态检测脑脊液中水平可以反映感染控制情况。 郭光辉,

17、蒋巧雅,柬振华.可溶性髓系细胞触发受体在细菌性脑膜炎诊断中的意义.国际检验医学杂志 禚志红,郭果,田培超等.可溶性髓样细胞触发受体、乳酸在细菌性脑膜炎患儿中的变化.中华实用儿科临床杂志细菌性脑膜炎时，脑脊液中的明显升高，以为界对细菌性脑膜炎诊断 蛋白被认为是神经元、胶质细胞损伤的标志物并且参与颅内感染的病理过程，对病情判断和预后评估有重要的临床价值。 蛋白研究发现细菌性脑膜炎脑脊液中含量明显高于病毒性脑膜炎，而且当取值时，其鉴别细菌性脑膜炎与病毒性脑膜炎的灵敏度可达，特异度达。证实感染后存在神经元损伤患者的脑脊液 水平明显高于感染后未损伤组及正常对照组。 , , . . , , (): . 研

18、究发现细菌性脑膜炎脑脊液中含量明显高于病毒性脑膜炎，而且急性期病毒性脑炎组脑脊液、血液水平明显高于化脑组和对照组,提示病毒侵袭使主要存在于星形胶质细胞中的大量释放入脑脊液。手足口病并病脑患儿脑脊液水平与疾病严重程度密切相关,可用来预测病脑的发生。 原芳,乔静. 检测在婴幼儿中枢神经感染诊疗中的应用. 中国社区师(). 费安兴. 手足口病患儿血清及脑脊液中 和的表达与病毒性脑炎发生的相关性分析. 中国妇幼健康研究().急性期病毒性脑炎组脑脊液、血液水平明显高于化脑组和对照组, 胱抑素 (，)为人体所特有,主要由柔脑膜合成,由有核细胞分泌产生,且无组织特异性,广泛分布在脑脊液、血液、唾液、尿液中,

19、但以脑脊液中含量最高,浓度约为血清浓度的倍左右。的重要功能是抑制内源性半胱氨酸蛋白酶活性,是目前发现的对组织蛋白酶抑制作用最强的抑制剂。 武艳,孙静娜,肖志敏,等. 中枢神经系统感染胱抑素水平变化的临床意义. 现代中西医结合杂志,(). 胱抑素 武艳,孙静娜,肖志敏,等. 中枢神经系统感染胱抑化脑早期,脑组织细胞大量变性、坏死释放半胱氨酸蛋白酶,使脑脊液中的分泌增加以抑制半胱氨酸蛋白酶的活性,而随着病程发展,细菌对有核细胞的破坏增多,脑脊液中水平可能会下降。病毒性脑膜炎为急性非化脓性炎性反应,表现为脑膜充血、水肿,淋巴细胞和纤维蛋白浸润,细胞分泌则较少。化脑早期,脑组织细胞大量变性、坏死释放半

20、胱氨酸蛋白酶,使脑脊颅内感染实验室诊断技术新进展课件细菌性颅内感染脑脊液中仪水平显著升高，当时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性及特异性均达。当时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性可达特异性可达。当时，鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性达，特异性达。 , , , , . , , . ; : . , , . . ; : .细菌性颅内感染脑脊液中仪水平显著升高，当时，鉴别细菌性在颅脑损伤和致脑损伤等情况下，的水平及活性明显增高(可超过) ，可以作为中枢神经系统感染的早期诊断指标。脑脊液中可溶性白细胞介素受体()明显增高()，且化脑患者脑脊液中的增高较病毒性脑膜炎更显著()。主要由活化的辅助性()样细胞、活

21、化的自然杀伤()细胞产生，能增单核巨噬细胞的抗病毒能力，在病毒性脑炎患儿脑脊液中显著升高(可达到) 。 () 李山,李灵真,孔繁元.颅内感染患者脑脊液和血清中 、蛋白含量的变化及其意义.宁夏医科大学学报()又称为细胞因子合成抑制因子，在化脓性和病毒性脑膜炎等颅内感染由结核分枝杆菌活化的 细胞产生,诱导单核巨噬细胞的活化,在结脑的发病过程中起着重要作用。研究发现结脑患者脑脊液水平明显高于对照组,且随病程进展,脑脊液水平逐渐升高,提示其对结脑的辅助诊断及预后有一定的指导意义。对结脑的诊断敏感性为, 特异性为 。 , , . , . (), ().由结核分枝杆菌活化的 细胞产生,诱导单核巨噬细胞的活化,在颅内感染实验室诊断技术新进展课件 , . (). , . (). 颅内感染实验室诊断技术新进展课件多功能液相芯片分析系统 （技术）酶联免疫斑点分析仪超敏多因子电化学发光分析仪 （ ）多功能液相芯片分析系统 基本原理捕获分子待测分子报告分子技术是在有色微球、激光技术、应用流体学及高速数字信号处理技术的基础上发展起来的一种多功能的液相分析平台荧光编码微球共