COX2及VEGF在乳腺癌中的表达及临床意义

1、COX-2及VEGF在乳腺癌中的表达及临床意义【摘要】目的讨论环氧化酶2(x-2)及血管内皮生长因子vegf在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反响(rt-pr)，检测了96例乳腺癌患者癌组织及癌旁组织中x-2和vegf的表达。结果x-2rna和vegfrna分别在87.50%和83.33乳腺癌组织中表达，而仅在16.67%和31.25%癌旁组织中表达，癌组织与癌旁组织x-2rna和vegfrna的表达差异有显著意义。结论x-2rna、vegfrna在乳腺癌组织中明显增高。x-2的表达同vegf的表达亲密相关。【关键词】乳腺肿瘤theexpressinfylxygenase-2

2、andvegfinbreastaneranditssignifianeafei-lin,zhu-in,xieb-jian,etal.(taizhuhspitalfzhejiangprvine,linhai317000,hina)abstrat:purpsetinvestigatetheexpressinfylxygenase-2(x-2),vasularendthelialgrthfatr(vegf)inbreastaneranditslinialsignifiane.ethdstheexpressinfx-2andvegfin96asesfbreastanertissuesandanerad

3、jaenttissueseredetetedbyreversetransriptin-pr.resultsexpressinfx-2rnaandvegfrnaas87.50%and83.33%inbreastanertissues;16.67%and31.25%inaneradjaenttissuesrespetively.theexpressinfx-2rnaandvegfrnaassignifiantlydifferentbeteenanertissueandanersadjaenttissue.nlusinexpressinfx-2andvegfrnainbreastanerissign

4、ifiantlyinreased.expressinfx-2islselyrrelatedithexpressinfvegf.keyrds:breastneplass;ylxygenase-2;vegf;reversetransriptinplyerasehainreatin环氧合酶-2(ylxygenase-2，x-2)是一种多功能的蛋白质，在多种恶性肿瘤组织中，x-2的表达增高,它与恶性肿瘤发生开展亲密相关。我们采用rt-pr和免疫组化法检测了96例乳腺癌组织中x-2和vegf的表达，讨论x-2、vegf在乳腺癌中的表达情况及其相关性，以及x-2选择性抑制剂用于乳腺癌高危人群化学预防和治疗

5、的可能性。1材料与方法1.1研究对象搜集台州医院肿瘤外科2002年12月至2022年5月因患乳腺癌行根治性手术并经病理证实的肿瘤标本及配对的癌旁组织96例。同时留取石蜡标本，行he及免疫组织化学染色。年龄2358岁，平均42.5岁。组织类型：浸润性导管癌80例，髓样癌8例，黏液腺癌4例，导管内癌4例。肿瘤分期：期76例，期20例。1.2主要试剂trizl(invitrgen公司)，-ulv逆转录酶，rna酶抑制剂(bi，ferents)，taq酶generay公司x-2、vegf、-atin引物(上海生物工程公司合成)；鼠抗人x-2蛋白及vegf抗体的单克隆抗体购自福建生物技术；x-2扩增产物

6、为488bp，上游引物:5-taagttgagatta-3；下游引物:5-atttaaagaa-3；vegf引物序列：上游引物：5-gttataatga-3；下游引物：5-agtattttatgtg-3，-肌动蛋白扩增产物为619bp，上游引物:5-gtggtggtgtgaa-3；下游引物:5-gtagagatttgt-3。1.3实验方法rt-pr检测x-2rna及vegfrna表达：(1)提取rna：取新颖乳腺癌组织50g100g在液氮中速冻，玻璃匀浆器中彻底匀浆，按trizl试剂盒说明书裂解抽提总rna，异丙醇沉淀，溶于dep水。紫外分光光度计测定a260/280比值均在1.752.0范围

7、之内。(2)逆转录合成dna：各取2g总rna，逆转录酶-ulv催化合成dna，再取dna0.1g作vegf和x-2的pr扩增。3检测x-2rna表达：以同一dna为模板，在25l反响体系内扩增x-2和-肌动蛋白。循环条件：952in,9445s，53.245in，721in，循环35次。最后72延伸10in。取5lpr产物于2%琼脂糖凝胶电泳，eb溴化乙啶染色，凝胶成像分析。检测vegfrna表达：循环条件:952in，9445s，51.545in，721in，循环35次。最后72延伸10in。取5lpr产物于2%琼脂糖凝胶电泳，eb溴化乙啶染色，凝胶成像分析。免疫组化染色及结果判断：采用免

8、疫组sp法，按说明书操作。病理组织切片我院两位病理学专家阅片作出病理诊断。rt-pr结果断定：pr产物用2%琼脂糖凝胶电泳，eb溴化乙啶染色，并用标准prarkerladder对照，电泳后凝胶成像分析。阳性结果为：在488bpx-2rna和619bp-atin和320bpvegfrna处出现条带。1.4统计学处理采用卡方检验和四格表确切概率法。检验标准=0.05。2结果2.1x-2和vegfrna及其蛋白表达情况96例癌组织中有84例检测到了x-2rna的表达，阳性率是87.50%；而癌旁组织中只有16例x-2rna的表达，阳性率为16.67%。两者比拟差异有显著性。x-2的表达位于乳腺肿瘤上

9、皮细胞的胞浆内，54.17%的肿瘤组织见阳性染色见图1。6.25%(6/96)的癌旁组织见不同程度的阳性染色，两者比拟差异有显著性，见表1。vegfrna在乳腺癌中阳性率是83.33%(80/96)，而在癌旁组织中阳性率是31.25%(30/96)，两者比拟差异有显著性；vegf的表达位于乳腺肿瘤上皮细胞的细胞膜或细胞质，75.0%72/96乳腺癌中存在vegf阳性表达图2，与癌旁组织25.0%，24/96相比差异有显著性表1。2.2x-2与vegfrna及其蛋白在乳腺癌组织中表达的互相关系x-2rna及其蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达与vegfrna及其蛋白的阳性表达呈正相关p0.05，x-2

10、rna及其蛋白的阳性表达程度越高，其相应的vegfrna及其蛋白的阳性也越高。见表2、3。3讨论x-2是前列腺素合成过程中重要的限速酶。x-2表达与肿瘤细胞的增殖、凋亡和血管形成亲密相关1。目前一系列研究发现x-2在人的很多癌前病变和恶性肿瘤中高表达，如胃肠上皮化生、bareet食管、胃癌、结肠癌、食管癌、肝癌、膀胱癌、口腔癌和非小细胞癌、前列腺癌、鼻咽癌和乳腺癌等。x-2选择性抑制剂能抑制大鼠乳腺肿瘤的发生。liu等在转基因小鼠模型中发现过度表达x-2的乳腺上皮细胞可发生癌变，说明x-2的过度表达足以诱导乳腺肿瘤的发生，因此，进一步讨论x-2在人乳腺癌发生开展中的作用具有重要意义。本研究显示

11、，87.5乳腺癌x-2rna表达，54.2%x-2蛋白呈阳性表达，而在癌旁组织中仅有16.67可检出x-2rna表达，6.25x-2蛋白呈阳性表达；两者比拟差异有显著性，提示x-2在乳腺癌的发生、开展中起着重要的作用。x-2的作用产物前列腺素可以促进肿瘤的新生血管生成，刺激肿瘤细胞增殖，抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤的浸润和转移，抑制机体的免疫反响。血管的生成在肿瘤的发生开展中起重要作用。目前的刺激血管内皮细胞增殖的因子有vegf、bfgf、pdgf等，其中血管内皮生成因子(vegf)是一种高度特异性的有丝分裂原，能直接刺激新生血管的形成；被公认为是最重要和最强的促血管生成因子。同时vegf也是一

12、种血管通透性诱导因子，可增加微静脉和小静脉的通透性，是最强的血管通透剂。anthny等通过原位杂交法检测46例乳腺癌活检标本，发现肿瘤细胞内的vegf表达与组织分化、远处转移亲密相关，与乳腺癌的vd呈显著性相关，vegf蛋白在乳腺癌中高表达提示乳腺癌形成过程中伴随vegf的高分泌，vegf与乳腺癌的发生及生长有关。淋巴转移的发生也有赖于原发肿瘤新生血管的形成。我们在乳癌腺组织中也检测到vegf蛋白和vegfrna都有高表达，其阳性率分别为75%和83.33，明显高于癌旁正常组织，同以往报道相符。郭贵龙等2研究发现x-2的表达与vd明显正相关，说明x-2可以促进肿瘤新生血管的形成。机制可概括如下

13、：诱导肿瘤细胞产生vegf；肿瘤组织产生的pge2，pgf2及txa2等直接或间接促进血管生成；促使基质金属蛋白酶ps表达激活血管生成素；刺激bl-2的表达来抑制内皮细胞凋亡，促进血管生成；缺氧诱导x-2促进肿瘤血管的形成。我们研究发现x-2和vegf表达明显相关，过度表达x-2的乳腺癌细胞可能诱导vegf产生，从而促进肿瘤新生血管的形成。本研究中乳腺癌组织中的x-2表达与vegf的表达呈正相关，提示x-2参与血管形成，可能与诱导vegf的表达有关。因此，在乳腺癌中x-2和vegf共同参与乳腺癌的发生、开展及转移。目前发现人类多种恶性肿瘤及癌前病变组织中有高表达的x-2，且阳性率较高，这为肿瘤

14、的化学预防和治疗提供了新的思路和形式，学者们对nsaids用于化学预防乳腺癌也产生了极大的兴趣。研究说明连续5年每日口服阿司匹林、优布芬，乳腺癌的发生率下降约40%50%。harris等3研究发现选择性x-2抑制剂elexib可以明显延迟大鼠dba诱导的乳腺癌发生，并且较非选择性x-2抑制剂优布芬更为有效。目前，抗血管生成药物bevaizuab已被美国fda批准用作转移性直肠癌的一线治疗药物，fairzf等在结合使用bevaizuab治疗转移性结直肠癌后证实反响率、生存率及平均寿命延长均较单独使用flururail有统计学意义。因此，进一步讨论x-2和vegf在人乳腺癌发生开展中的作用及其两者间详细的作用机制具有重要意义，或许应用x-2抑制剂或用vegf抗体将有望成为预防与治疗乳腺癌的新方法。【参考文献】1ali-fehir,rrisrt,bandypadhyays,etal.expressinfylxygenase-2inadvanedstagevarianserusarina:rrelatinithturellprliferatin,apptsis,angigenesis,an