实验改良氏法测蛋白含量

1、关于实验改良氏法测蛋白含量第1页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三实验室规则按规章操作，保障实验安全；进入实验室要着白大衣；禁止大声喧哗，保持实验环境的安静；维持实验室的整洁。第2页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三 实验课的考试 实验分组 实验室卫生 实验报告的书写第3页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三实验名称姓名：班级：学号：实验原理：实验目的：实验步骤：文字简洁，尽可能采用图表实验结果：原始数据、计算过程、结论实验讨论：结果分析、实验注意事项实验日期：同组人员：实验报告的书写第4页，共21页，2022年，5月20日，22

2、点16分，星期三一、玻璃仪器的常规清洗二、试剂瓶、吸量管、试管的放置基 本 操 作三、刻度吸量管的使用第5页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三分光光度计分光光度计的原理分光光度计的操作第6页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三 T = I/I0， A = - lg T 1、A1/A2= c1/c22、标准曲线法Lambert-Beer 定律A = KcL分光光度计的原理I0ILK：吸光系数c：溶液浓度L：溶液厚度C第7页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三光源I0I单色器样品池狭缝检测系统分光光度计的构造第8页，共21页，2022年

3、，5月20日，22点16分，星期三分光光度计的使用1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热2030min2. 1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100”3. 拉杆拉至1.5档，T模式调0%，显示“0.00”4. 切换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度5. 使用完毕后，置于休息档（1.5档）拉杆，1-4档样品池读数波长第9页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三1档，空白对照，A=0，T=100%1.5档，隔板，A=+，T=0%2档，样品1，A=？3档，样品2，A=？4档，样品3，A=？第10页，共21页，2022年，5月20日，22点16

4、分，星期三1、分清光面、毛面 手只可接触毛面，光线须从光面通过2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面4、从低到高依次测量，不需清洗比色杯5、蒸馏水冲洗3-5次，擦干，倒扣放置比色皿的使用毛面光面第11页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三改良Lowry氏法测定蛋白质含量 实 验 1第12页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三实 验 目 的 1、学习改良Lowry氏法测定蛋白质含量 的原理及方法2、了解标准曲线在物质定量测定中的 应用及绘制要点第13页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三实验原理 凯氏定

5、氮法 16%紫外吸收 280nm呈色反应第14页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三Pr.Cu2+OH-Pr-Cu2+ 螯合物 (紫红色) 酚试剂钼蓝-钨蓝混合物 (蓝色，深浅与蛋白含量呈正比) （双缩脲反应）Pr.Cu2+改良Lowry法第15页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三费时较长，而且要精确控制操作时间。显色程度与时间有关。 专一性较差，干扰物质较多。灵敏度高双缩脲法的检出限为 0.21.7 mg/ml，而本法的检出限为0.0150.110 mg/ml。优 点缺 点第16页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三实 验 步 骤

6、 试剂（ml）蛋白标准品样品测定管012345Pr标准液00.10.20.40.60.8 待测血清 1.0生理盐水1.00.90.80.60.40.20试剂A0.9ml, 混匀后，37水浴10min试剂B0.1ml, 混匀后，室温放置10min试剂C3ml, 立即混匀，37水浴10min第17页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三0 x1 x2 x3 x4Y3OD650蛋白质量（mg）/蛋白浓度（mg/ml）1、标准曲线的绘制和实测样本浓度的求得Y2Y1样品吸光度样品浓度实 验 结 果第18页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三2、浓度换算样品体积实测蛋

7、白质量待测蛋白浓度（g/L）=实测蛋白浓度稀释倍数待测蛋白浓度（g/L）=稀释倍数注意终体积相同的前提下，可以用质量代表浓度 例如：1号管中，蛋白质量为0.02mg，而其终浓度为0.004mg/ml注意溶液的稀释倍数 例如：若以浓度为横坐标，根据吸光度得到实测蛋白浓度为0.02mg/ml, 则待测蛋白浓度= 0.02mg/ml x 5 x 1000=100mg/ml 若以质量为横坐标，根据吸光度得到实测蛋白质量为0.1mg, 则待测蛋白浓度= (0.1mg/1ml) x 1000=100mg/ml 第19页，共21页，2022年，5月20日，22点16分，星期三未知浓度蛋白溶液实测蛋白溶液 1ml终体积 5ml测吸光度1:1000稀释加入A、B、C试剂计算出终浓度 c实测蛋白浓度为 cx5未知蛋白浓度为 cx5x1000浓度换算过程解析未知浓度蛋白溶液的处理过程浓度