同种异体神经移植研究中降低免疫排斥反应的进展

1、同种异体神经移植研究中降低免疫排挤反响的进展孔凡宾陈克明，刘兴炎【关键词】神经缺损周围神经缺损，无论在平时或战时，都非常常见。缺损后，临床上首选自体神经移植，但自体神经来源有限，并给供区造成一定的功能障碍。目前，解决神经缺损的研究主要集中在两个方面：一方面是研究采用肌桥、静脉管、硅胶管、组织工程等替代物，前三种的结果都不如人意，而后者尚处于实验阶段；另一方面是研究同种异体神经移植，它不但具有其它替代材料所没有的网管状神经内部构造，利于神经的再生，而且来源广泛，可以得到与缺损神经长短相似的移植物，但存在免疫排挤问题。国内外许多学者已对异体神经移植的免疫排挤反响进展了深化的研究，获得了良好的进展，

2、预示着异体神经移植有着广阔的应用前景，本文对此做一综述。1移植物预处理1.1冷冻处理法对供体神经加以单纯冷冻或反复深冻、复融处理，使雪旺细胞(shannell，S)活性降低或灭活，又不损伤为轴突再生提供机械支架和通道的基膜管，利于轴突再生。王秋根等1将大鼠的供体神经按不同温度(-196、-80、-40)和不同保存时间(20in、1、3周)进展冷冻，室温下复温，然后再冷冻、再复温，共反复5次。进展同种异体移植后发现，神经断端再生轴突能通过并长入远断端，并认为冷冻温度以-196为好，保存时间以3周为佳。而Fansa等2实验发现-196保存的同种异体神经移植1周后，超微构造有类似华勒变性现象发生；术

3、后1个月神经退变完毕，同时有神经纤维再生并伴移植物神经化；术后6个月神经化最明显。陈红等3报道先在-50的二甲基亚砜中保存40in再放入-196的深低温中保存，效果较直接深低温保存好。不过最近Fx等4实验证实，对异体神经分别冷存1、4、7周，时间越长，细胞免疫反响越轻，保存7周的神经免疫反响接近缺失。冷存时间的延长不影响神经的再生。总之，冷冻的最正确保存温度和时间等问题还需进一步研究。大多数学者认为冷冻处理法不能去除细胞崩解产物，组织相容性抗原复合物仍然存在，移植效果比自体移植效果差。1.2生物学方法郑桂芬等5用受体犬血浆浸泡异体犬正中神经1520in后，再用液氮保存21d，与仅用-196保存

4、21d的异体犬正中神经相比拟，发现前者移植后结缔组织增生较轻而再生神经纤维数量较多。认为该方法能减轻免疫反响引起的结缔组织增生、减少胶原原纤维的形成，有利于S形成Bngner带，从而促进神经再生。最近，赵波等6发现异体神经皮下包埋后有促进周围神经再生的作用，并认为包埋最正确时间可能出如今1、2周之间，但详细时间还需进一步的实验研究。1.3放射辐照法李建兵等7报道放射辐照可以降低异体神经的抗原性，其作用机理可能是X线杀死S，破坏了其继续分泌抗生素原物质的功能，并通过保存的神经膜管构造支架使周围神经得以再生。李天侠等8那么进一步发现低温加紫外线B照射可以充分降低异体神经的免疫原性，是具有应用前景的

5、预处理方法。1.4化学去细胞法近几年开展起来的化学去细胞法，可有效去除神经中的细胞及髓鞘，为寻找理想的自体神经移植替代物开拓了新的途径。1997年Duent等9应用溶血性磷脂胆碱等化学消化剂，对鼠15长的坐骨神经进展化学处理，获得了鼠的去细胞坐骨神经。1998年Sndell等10用三硝基甲苯X-100(TritnX-100)和脱氧胆酸钠等对异体神经进展去细胞处理后，观察到S、髓鞘及轴突被完全去除，并保存了完好的基膜管构造，从而到达了“化学抽吸的目的，有利于宿主S及轴突等沿着空的基膜管向远端迁移和生长。在上述学者的研究根底上，戴传昌等11将异体预变性神经和正常神经用溶血性卵磷脂裂解液处理后，用于

6、缺损神经的移植，获得了良好的效果，并认为经预变性处理的效果更好。刘承吉等12用TritnX-100等试剂，采用低渗去细胞组织工程学方法处理大鼠坐骨神经，成功地制备了去细胞异体神经移植物。上述化学去细胞法仅用在小动物及低等哺乳动物实验中，移植长度也很有限。衷鸿宾等13应用TritnX-100和脱氧胆酸钠溶液对犬异体神经进展去细胞处理，成功建立了大型哺乳动物(犬)的粗大和长段去细胞神经的化学萃取方法。他们14采用真空封装辐照灭菌法深低温储存犬去细胞坐骨神经1年后，发现仍然保持为无细胞、髓鞘及其碎片的空的神经基膜管。此储存方法为去细胞神经移植物向成品化方向开展奠定了基矗郭义柱等15用TritnX-1

7、00和脱氧胆酸钠溶液，将正常安康捐献者的周围神经进展去细胞处理后，对11例神经缺损的患者进展移植，术后观察效果较满意，为下一步创立异体神经库开拓了道路。随着研究的不断深化，Hudsn等16对去细胞方法加以改良，应用优化去细胞法(采用TritnX-200、Sulfbetaine-10、Sulfbetaine-16等试剂)处理大鼠坐骨神经，发现移植后抗宿主免疫排挤和促神经再生才能进一步进步。由于化学去细胞法去除了S，虽降低了免疫原性，但移植体因丧失了S释放神经营养因子和黏附因子的才能，其促轴突再生作用有限。为解决这个问题，王建云等17将类S细胞种植入去细胞神经移植物内，实验测定各项指标均明显优于单

8、纯去细胞桥接对照组。崔勇等18用冻干去细胞同种异体神经种植类S细胞修复鼠坐骨神经缺损，效果与自体神经移植组相近。1.5乙醇或甘油处理法宋修竹等19对SD鼠的坐骨神经片段(长15)用70的酒精浸泡8h，-80冰箱贮存；对照组仅用-80冰箱贮存。复温后移植，酒精处理组移植效果明显优于对照组。作者认为其可能机制是经该方法处理后，移植体的S及血管内皮等细胞被杀死，显著降低了抗原性，且保存了完好的S基膜管。甘油处理法与酒精类似。刘金慕等20将在无菌条件下获得的人的异体神经14条)，在37条件下，依次在50、70、85的甘油中各浸泡3h，再分装在盛有85的甘油容器中密封，置于5保存6周后，在10例患者神经

9、缺损处(14处)进展移植。移植后神经功能恢复获得明显效果，且术后经542个月的观察，无1例感染。认为该方法通过将神经逐级脱水，不仅破坏了S和保存了完好的S基膜管，而且操作简单、费用低、易于保存，可以杀死细菌、病毒，是很有应用前景的一种方法。1.6绿茶多酚(greenteaplyphenls，GTPs)处理法绿茶具有多种药理作用，如抗肿瘤、抗辐射损伤、抗炎、降血糖等作用，其主要成分是GTPs。很多学者认为用绿茶多酚做保存液有较大的前景。Ikeguhi等21将雄性的DA鼠神经置于含绿茶多酚(1gl)的DulbesdifiedEaglesediu(DE)溶液中，4保存1周，然后再在4的DE中保存3周

10、，再移植到雌性的Leis鼠上。其效果与神经取下后立即移植给自身对侧肢体组的效果接近。他们认为离体神经不仅能成功地在绿茶多酚中保存1个月，而且绿茶多酚能降低移植神经的缺血性损伤和移植后的免疫反响。其可能机制是：供体的S虽具有抗原性，但能分泌多种活性物质促进神经再生。经绿茶多酚处理后，供体的S仍有少数存活。轴索在供体的S的帮助下可以成功长入远端。Nie等22认为GTPs还具有神经保护作用。目前国内尚未见有关绿茶多酚处理异体神经移植体的报道。2免疫抑制剂的应用2.1系统免疫抑制剂代表药为环孢素A、FK506、雷帕霉素等。idha等23研究证实，周围神经移植后，短期应用环孢素A可以有效抑制免疫反响。随

11、后出现的FK506的效果更优，而且还有神经营养作用。Frerihs等24把经FK506处理的大鼠神经片段同种异体移植后，证明FK506在刺激S后，不仅诱导了S的增殖反响，而且其激活后的S对周围神经的再生也起到促进作用。韦庆军等25发现经冷冻处理的同种异体神经移植后，FK506可促进周围神经的再生。因FKS06同时具有免疫抑制作用和促进神经再生的作用，故预示着其在移植中的应用前景广阔。不过，Brenner26等通过实验认为，只有在神经移植时立即使用FK506效果才明显，假如将使用FK506的时间推延到移植后的第7d才开场，那么其促神经再生的作用将大大减弱。2.2特异性免疫抑制剂由于系统免疫抑制剂

12、具有较大的不良反响，会带来一些严重的并发症，因此国内外学者正在研究特异性免疫抑制剂，包括抗-D4、抗D40L、H抗原、细胞间黏附分子(interellularadhesinleule，IA-1)等。Dlabh等27对大鼠进展同种异体神经移植，用抗-D4单克隆抗体加供体的脾细胞预治疗，在使用抗-D4单克隆抗体后，T细胞的D4表达明显下调。Jesen等28通过实验认为：抗D40L抗体作为一种选择性T细胞免疫反响抑制剂，防止了广谱抑制剂的一些缺点，且应用该抗体后，轴突再生良好。孟庆刚等29那么发现胸腺内注射异基因H抗原可诱导鼠对异体坐骨神经移植的特异性免疫耐受。此外，还有一些学者在同种异体神经移植时

13、，复合使用了生长因子(如bFGF、TGF-1)、甲状腺激素等，效果还有待于进一步研究。综上所述，关于降低周围神经移植后免疫排挤反响的研究，近年来进展很快。如何找到一种或几种方法联用以克制免疫排挤反响并促进神经纤维的再生是研究的核心问题。相信随着研究的不断深化，建立异体神经库并在临床上常规开展异体神经移植，在不远的将来应可成为现实。【参考文献】1王秋根，应明，鲁树荣，等不同冷冻温度和保存时间对同种异体神经移植后神经功能影响的研究J中华手外科杂志，1998，1：53-552FansaH，LassnerF，KkPH，etalrypreservatinfperipheralnervegraftsJus

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17、2，38：26-2716HudsnT，ZakS，Delster，etalptiizedaellularnervegraftisiunlgiallytleratedandsupprtsregeneratinJTissueEng，2022,10:1641-165117王建云，刘小林，向剑平，等类许旺细胞种植入去细胞神经桥接物后体内外标记示踪及神经功能恢复检测J中华显微外科杂志，2022，3：224-227.18崔勇，张信英，张涛.冻干去细胞同种异体神经种植类许旺细胞修复坐骨神经缺损的实验研究J中华显微外科杂志，2022，1：28-3119宋修竹，贺长清，顾玉东酒精处理的同种异体周围神经移植的研究J

18、中华实验外科杂志，1998，3：263-264.20刘金慕，彭昊，王志林甘油处理的同种异体神经在临床的应用J临床外科杂志，2002，4：227-22821IkeguhiR，KakinkiR，atsutT，etal.PeripheralnerveallgraftsstredingreenteaplyphenlslutinJTransplantatin，2022，6：688-695.22NieG，aeY，ZhaBPrtetiveeffetsfgreenteaplyphenlsandthEirairpnent,(-)-epigallatehin-3-gailnlate(EGG),n6-hydrxydpai-induedapptsP12ellsJRedxRep，2002，3：171-17723idbaR，akinnnSE，EvansPJ，etalparisnfregeneratinarssnerveallgraftsithtepraryrentinuusylsprinAiunsuppress