临床基因扩增检验实验室质量手册

1、-目录实验室公正性说明修订页第 一 章 质量方针分子生物实验室组织结构图分子生物实验室设置平面图第 二 章 管理程序文件程序管理文件编码目录实验室内务管理程序实验室质量控制管理程序 仪器设备管理程序临床标本的管理程序实验室文件、记录的管理程序 抱怨处理程序仪器设备校准程序实验室检测结果报告程序检验过程中发生故障时的应急处理程序实验室清洁消毒程序文件修改程序肿瘤分子检测实验室标准操作规程文件编码目录石蜡包埋组织 DNA 提取标准操作规程石蜡包埋组织样本 RNA 提取标准操作规程血液 DNA 提取标准操作规程JS-LJ-SMP0000-000 JS-LJ-SMP0001-000 JS-LJ-SMP

2、0002-000 JS-LJ-SMP0003-000 JS-LJ-SMP0004-000 JS-LJ-SMP0005-000 JS-LJ-SMP0006-000 JS-LJ-SMP0007-000 JS-LJ-SMP0008-000 JS-LJ-SMP0009-000 JS-LJ-SMP0010-000 JS-LJ-SMP0011-000 JS-LJ-SMP0012-000 JS-LJ-SMP0013-000 JS-LJ-SMP0014-000 JS-LJ-SOP0000-000 JS-LJ-SOP0001-000 JS-LJ-SOP0002-000 JS-LJ-SOP0003-000.z.-

3、口腔拭子/唾液 DNA 提取标准操作规程组织 DNA 提取标准操作规程组织 RNA 提取标准操作规程反转录标准操作流程基因 mRNA 表达检测标准操作规程EGFR 基因突变 Q-PCR 标准操作规程KRAS 基因突变 Q-PCR 标准操作规程BRAF 基因突变 Q-PCR 标准操作规程PDGFRA 基因突变 Q-PCR 标准操作规程叶酸基因多态性 Q-PCR 标准操作规程基因 SNPQ-PCR 标准操作规程1p19q LOH 标准操作规程MGMT 甲基化标准操作规程样本脱包、分类、编号、登录、发放标准操作规程临床标本采集、验收、拒收标准操作规程临床标本保存标准操作规程试剂质检标准操作规程室内质

4、量控制标准操作规程室间质量评价标准操作规程主要仪器使用、维护、校准操作规程实验室废弃物处理程序申请单必须信息叶酸基因检测样本采集注意事项 检测报告标准操作规程JS-LJ-SOP0004-000 JS-LJ-SOP0005-000 JS-LJ-SOP0006-000 JS-LJ-SOP0007-000 JS-LJ-SOP0008-000 JS-LJ-SOP0009-000 JS-LJ-SOP0010-000 JS-LJ-SOP0011-000 JS-LJ-SOP0012-000 JS-LJ-SOP0013-000 JS-LJ-SOP0014-000 JS-LJ-SOP0015-000 JS-LJ

5、-SOP0016-000 JS-LJ-SOP0017-000 JS-LJ-SOP0018-000 JS-LJ-SOP0019-000 JS-LJ-SOP0020-000 JS-LJ-SOP0021-000 JS-LJ-SOP0022-000 JS-LJ-SOP0023-000 JS-LJ-SOP0024-000 JS-LJ-SOP0025-000 JS-LJ-SOP0026-000 JS-LJ-SOP0027-000 JS-LJ-SOP0028-000 JS-LJ-SOP0029-000.z.修订修订的序号章节条款-修订页简要修订内容批准人批准日期第 一 章.z.-质量方针质量方针题目：质量方

6、针题目：质量方针编号：JS-LJ-ZLC0001-000颁发部门：技术部分发部门：技术部起草：生效日期：日期：临床基因扩增检验实验室是严格按照卫生部、*省临床基因扩增实验室规范化、标准化要求进行管理与操作，我中心的质量方针为：公正、科学、准确、高效我们的检验工作必须做到：行为公正 任何情况下，不被各种利益所驱动，客观公正、独立诚实地开展检验工作。方法科学 遵守国家有关法律、法规，依据有关检验标准规范。.z.-数据准确 认真执行本中心工作程序，对检验工作进行全过程质量控制，确保检验数据的准确性和可靠性。办事高效 在规定的工作日内接受客户委托，出具检验报告。第 二 章分子实验室组织结构图第 二 章

7、题目：分子生物实验室组织结构图起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-ZLC0002-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部管理程序文件.z.-实验室内务管理程序题目：实验室内务管理程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0001-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：实验人员的安全性。适用范围：本制度适用于PCR作。程序实验室的设置和人流、物流管理本中心在二楼大实验室内设置临床基因扩增检验实验室，即 PCR 实验室。PCR 实验室的设置分四个独立工作区：PCR 试剂准备区（一区）PCR处理区（二区）、PCR（三区）、PCR（四区

8、），各区设有专门的责任人。各区门前有醒目标志，每个区都设置缓冲区，用于更换工作服、工作鞋及维持空气流向。进入各个工作区域工作时，必须严格遵守单一方向顺序：即从第一区的试剂准备区第二区的样本处理区第三区的扩增区第四区的产物分析区。严禁误入和逆向进入各工作区。一、二区通过排风装置保持正压，三、四区通过抽风装置保持负压。各区配备专用的仪器、设备、辅助设施、耗材、清洁用品、办公和消毒用区为绿色标签，第三区为白色标签，第四区为粉色标签不得混用。第四区为粉色，进入各区实验室，必须更换本室有颜色标识的工作服，换上专用鞋， 带上手套。.z.-实验室的物流同样严格遵守上述唯一流向制度，并通过传递窗进行传递。实验

9、室清洁消毒管理毒。实验结束后实验人员必须立即对工作区进行清洁消毒，操作完成后打开排气扇。桌面在工作结束后，必须立即用消毒液（2g/L75%酒精等）可移动紫外灯调至实验台 60-90cm 内照射消毒 30-60min，室内空气紫外灯消毒30-60min。各区配备专用清洁工具，并有明显的区域标示，不得混用。.z.-实验室人员配置及培训程序题目：实验室人员配置及培训程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0002-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：作任务。适用范围：应熟知并遵守该程序。程序人员要求中专以上学历。实验室工作人员应参加卫生部或市临检中心举办的

10、PCR格证。进行实验工作，实验报告由有资格的本室工作人员出具，并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。人员配置实验室应根据工作需要配备足够的工作人员，目前实验室操作人员 4中 2 人已获得培训合格证，视工作量的增加和业务发展需要，适当增加工作人员。各级技术人员履行相应的工作职责。人员培训及考核实验室负责人（或技术负责人）定期参加卫生部 PCR 室间质评总结会。.z.-实验室工作人员定期参加相关学术交流会议。安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。人员管理研究成果、培训等相关材料复印件。技术档案包括文本档案和电子档案，文本档案每年更新 1 次。.z.-实验室质量控制管理程序题

11、目：实验室质量控制管理程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0003-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：监控本实验室常规工作的可靠性和有效性，确定检测结果能否报告。适用范围：并遵守本程序，并逐步完善室内质控和室间质评工作。程序室内质控由于核酸扩增的高敏感性，为避免假阳性和假阴性，必须对 DNA 和 RNA析的各步进行质量控制，以保证测定结果的准确性和重复性。室内质控包括标本制备、逆转录、扩增和产物分析中的每一步。用内标质控方法也可采用外标质控方法。在测定血清/血浆病原体如 HBV-DNA、HCV-RNA统一发放的质控品作为质控样本，与待测临床标本等

12、同处理提取核酸及扩增，以判断逆转录及扩增检测的效果。质控样本在扩增时必须使用与患者的标本相同的主反应混合液。每一个 PCR 反应都必须设外加阴性质控（污染监测质控）。测定结果的评价：采用实时荧光定量 PCR号作出定性判断，然后再进行定量分析，避免一些非特异性荧光信号对结果分析的干扰。.z.-当质控标本实验数据在控时，方可发出临床标本的检测报告。采取措施，并做记录。室间质评参加*省或卫生部临检中心相关检测的室间质量评价。室间质控样本的接收和验收参见室间质量标准操作规程。质控标本的检测按常规临床标本对待，检测结果须在截止日期前上报。关试剂盒的使用效果。.z.-仪器设备管理程序题目：仪器设备管理程序

13、起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0004-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：用寿命。适用范围：用、校正和维护管理。程序仪器购买原则：根据中心的有关规定本着“质优价廉”进行，所购仪器必须三（生产许可证、产品注册证、经营执照符外包装：厂名厂址、检测、批准文号、批号和有效期等。仪器购买程序22（1 家亦可）试剂厂家的有关仪器信息，提交中心仪器审核组讨论。仪器的购买：由物流部负责与供货商联系供货，交仪器审核组讨论决定。家的供货清单上签字。仪器的放置：根据仪器本身的要求及基因诊断实验室各区的要求安放仪器。基因诊断实验室的主要仪器设备均需建立档案，档案内容包

14、括：设备的名称及SOP常规仪器设备的操作使用程序.z.-仪器设备的使用授权仅有本实验室工作人员有权使用实验室的仪器设备。中心主任考核认可。PCR统的建立，管理文件的撰写工作。仪器的使用仪器设备的使用严格遵守分区使用管理。仪器设备的使用必须严格遵循仪器设备的标准操作规程。常规仪器设备的维护保养程序仪器设备应定期校准，具体参照“仪器设备校准程序”。交仪器部设备维修人员或相关专门维修单位进行处理。仪器应有工作状态标识，正常运行的各区仪器应贴有相应的标签（绿色）其状态。待维护的仪器用黄色标签。有故障待修暂停仪器用红色标签。需定期作校准或检定的仪器应有校准或检定日期及下次校准或检定日期的记录。3.10.

15、本实验室所有仪器、设备均为专用不外借。.z.-临床标本的管理程序题目：临床标本的管理程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0005-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：性。适用范围：本程序适用于各类临床标本的管理。程序标本的唯一性标识：标识构成中心代码、病人*、标本采集日期、检测、该检测批次的标本序号，无间隔符号。标本的唯一性标识须字迹清晰明了，不得随意作任何涂改；必须时，在旧标识上划双线更改，更改后应保持旧标识可辨识。具体见“标本唯一标识编号操作规程”。外包装：厂名厂址、检测、批准文号、批号和有效期等。血液标本；接收标本时应核对标本与检验申请单的一

16、致性。标本接受人须检查标本状态：标本合乎要求，须在标本记录上注明合格，作进一步处理；标本不合格，工作人员有权拒受标本，其它后续处理过程中发现的不合格，应记录其状态并通知相关医院重新送检。具体见“临床标本采集、验收、拒收操作规程”。临床标本的保存：当天不检测的标本可经离心后吸取血清及时放置于-20存。具体见“临床标本保存操作规程”。度的有效氯消毒液中，然后再作相应的处理。所有标本均可能具有传染性，须严格遵守检验中心有关院内感染及医用垃圾的管理和处理规定，工作人员须注意保持并随时.z.-检查容器的完整和无标本外泄发生。具体见“实验室废弃物处理程序”和“实验室生物防护和安全管理程序”。.z.-实验室

17、生物防护与安全管理程序题目：实验室生物防护与安全管理程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0006-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：保证实验室、实验人员和外部环境的安全。适用范围：本程序适用于整个临床基因诊断实验室。程序：*国传染病防治法，参照微生物和生物医学实验室生物安全通用准则以及*省临床检验中心下发的*省临床检验专业质控督查基本内容和对实验室、实验人员和环境的污染，具体内容详见中心文件“生物安全手册”。人生物安全防护，实验中严格按照各种标准操作程序操作外包装：厂名厂址、检测、批准文号、批号和有效期等。每天更换废液缸的2g/L2g/L1/5过

18、空白对照、阴性对照、阳性对照和弱阳性（低拷贝数）对照进行质控。实验台面日常清洁时使用 75的酒精擦拭。每区每天实验前后紫外灯照射 min，如有需要可延长照射时间，对工作台面实验前后也要用紫外灯照射 3060 min， 并作好记录。75%的酒精清洁桌面。照实验室废弃物处理制度处理。.z.-皂、工作服可能同时被大量细菌污染者。消毒剂可用 2g/L 有效氯含量消毒液。其它安全措施：得入内。与实验无关的任何私人物品严禁入内。法。禁止裸手接触任何物质，不要戴着手套触摸皮肤。实验使用后的废物按照不同的处理要求进行处理。实验人员进入 PCR的工作服，并挂在指定的地方。工作结束后，立即洗手才可离开。实验结束后

19、必须立即对工作区进行清洁消毒。桌面在工作结束后，必须立即（2g/L75%酒精等台 60-90cm 内照射消毒 30-60min。保证实验室所用的实验消耗品均经过高压灭菌处理。防盗措施：设内保安全机制，由 PCR 室工作人员为安全员，负责工作完毕后检查门窗。查。如调查不合格，对相应责任人进行处罚，并限期整改。应急措施：告上级，并暂时关闭实验室，进行严格的消毒，并根据实际情况，采取相应有效措施避免感染的发生或蔓延。如遇实验中手指被划破，应立即用水冲洗、消毒包扎伤口，.z.-如此标本为阳性，应立即接种疫苗，同时上报*省临检中心，提请再次审核实验室消毒隔离情况。测。.z.-实验室文件、记录的管理程序题

20、目：实验室文件、记录的管理程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0007-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：确保资料的记录、保存状态在控。适用范围：单和出具的检测报告单、仪器使用记录等。程序病人和标本信息：接收标本后，在标本登记表中登记病人和标本信息，包 括：病人*、性别、年龄、检测、标本类型、标本状态、送检日期、标本接收人等， 批号和有效期等。检测过程中的实验记录：在专用实验记录簿上记载，不同实验区的记录簿不得混用。试剂准备和贮存区应记录检测所用的试剂盒情况（名称、批号、数量控结果和分析。PCR保持唯一性，前面英文字母为实验,后面六位数字为实验日

21、期，如 HBV 020710。将病例资料、样品资料、检测结果录入报告系统，产生结果报告单，经实验室主任审核签名；检验申请单、检验结果记录（包括病例资料）工作台抽屉里，统一建档封存，至少保存 2 年以上。.z.-红线，填上新内容，说明更改原因并签名。实验记录须妥善保存，涉及医疗纠纷及特殊情况外，本室无义务提供给他人借阅或复印通过空白对照、阴性对照、阳性对照和弱阳性（低拷贝数）控。.z.-实验耗材购买、验收、储放程序题目：实验耗材购买、验收、储放程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0008-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：规定试剂购买原则、验收的程

22、序和试剂的正确贮存。适用范围：本程序适用于实验室所购的诊断试剂盒、实验耗材。程序试剂的购买和管理试剂购买原则：PCR 检测试剂选用原则“质优价廉”并与ABI 7500套，所购试剂必须三证齐全。（三证包括：）试剂购买程序试剂厂家的确定：先由具体检测人员提供 2 家或 2 家以上（特殊情况 1 家亦可供货商，将申请单交物流部与供货商确定试剂价格。试剂的购买：操作人员提前 1供货。生产厂商，如在使用过程中发现质量问题，操作人员及时向实验室负责人汇报，必要时提出更换试剂生产厂家的要求，交试剂审核组讨论决定。试剂验收：物流部专门人员负责核对试剂品名、数量和价格，并在供货清单上签字。操作人员负责试剂质量验

23、收（内外包装验收）：.z.-（产日期、效期）、所购试剂需保证至少仍有三个月以上效期；货清单由试剂管理人员保管，试剂验收后登记存储。试剂储存：试剂盒保存按照说明书规定进行。PCR反应体系试剂保存于试剂储存区；对照品、定量校准品、核酸提取试剂储存于样品处理区。试剂质检：按照试剂质检标准操作程序操作。通知物流部办理退换货手续。实验耗材的购买和管理量，由实验室负责人签字同意后交物流部购买。损，如发生破损或其它质量问题，给予退回。由实验室工作人员负责进行质量验收。试剂，并杜绝浪费现象。试剂外借必须征得实验室负责人员同意，并履行中心有关借出手续。.z.-抱怨处理程序题目：抱怨处理程序起草：审核：日期：日期

24、：编号：JS-LJ-SMP0009-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：“抱怨”，巩固和完善实验室质量体系，特制订本程序。适用范围：人处理。程序接到抱怨记录抱怨提出针对具体抱怨的处理方法将不在常见抱怨处理方式范围内的处理方法交室负责人审核征求抱怨方对处理方法的意见执行解决方案记录最后的处理结果处理措施：针对客户对服务态度抱怨的处理措施4.1.1.4.1.2.4.1.3.接到抱怨后，由室负责人责成相关人员向客户致歉。对患者提出的合理要求及时进行处理。调查事情原委，根据调查结果对相关责任人进行处罚。.z.-4.1.4.记录抱怨及其处理结果。针对客户对结果准确性抱怨的处

25、理措施4.2.1.4.2.2.4.2.3.为客户展示原始实验数据。向客户解释相关实验程序和可能临床情况，帮助客户解除疑虑。如确有实验结果不符合有效性要求或出现错误，则应及时纠正错误，重新实验以得到准确结果。同时由室负责人向客户致歉以争取得到其谅解，按有关条例对责任人进行相应处罚，并记录。针对客户对检测结果和临床诊断的符合率抱怨的处理措施结果的因素，并形成书面报告。解释。就调查发现的问题进行针对性解决。与客户建立定期交流机制，定期了解临床使用情况和对临床作出针对客户对结果发放时效性抱怨的处理措施4.4.1.4.4.2.严格按承诺时间发放临床报告。在与客户交流会上就报告发放过程及时间作出解释，获取

26、临床对结果报告时效性的理解。抱怨解决的原则怨，对提出抱怨的人员要做到语言文明，热情接待。理，实验室所有工作人员均有责任接待申诉者。理者、联系方式等。.z.-申诉者。如抱怨涉及到实验室操作程序是否符合临床基因扩增实验室管理暂行办法、室的操作程序确实不符合有关规定，应重新修订操作规程后执行。当实验室负责人无法满意解决报怨时，应将有关材料递交中心，由中心处理。.z.-仪器设备校准程序题目：仪器设备校准程序编号：JS-LJ-SMP0010-000批准：日期：颁发部门：技术部分发部门：技术部生效日期：目的：确保实验室仪器设备得到妥善的管理，确保检测质量。适用范围：本程序适用于适用于实验室所有的仪器设备。

27、程序校准方法：定量扩增仪、生物安全柜、冷冻高速离心机功能性仪器由各生产厂家每年进行一次维修检测，并将此作为校准依据。各仪器的校准单位（即生产厂家）一览表。准。移液器校准外送专业机构专业人员进行校准。干式恒温器使用经质量检定的温度计进行自行校准。温湿度计校准以经过质量计量监督局校准过的其他温度计和湿度计进行校进行测试。新灯管要求紫外线强度大于或等于 90UW/cm2, 旧灯管紫外线强度大于或等于 70 UW/cm2。每年联系生产厂家进行一次维护和检测，并将此作为校准依据。校准计划3.2.1.3.2.2.3.2.3.启用校准：设备在投入使用时实施启用校准。周期校准：设备在投入使用后，每年实施一次校

28、准。维修后校准：设备在维修后须经校准方可重新投入使用。.z.-校准计划外的校准：如在检测及EQA，IQC及其它可疑情况时，通过分析对可疑设备及时实施校准。区，然后依次为样本处理区和 PCR 扩增区。每校准完一个区的移液器，将其放回原处后，再取下一个区的移液器进行校准。校准安排在不进行样本检测的日期完成。校准的有效标识：经校准的设备加贴绿色标签，标签上应标明本次校准的日期和结果及下次校准的计划预定日期。批准后由各仪器设备责任人按计划实施。字。校准记录须妥善保存于 PCR 实验室三区直至设备报废。.z.-实验室检测结果报告程序题目：实验室检测结果报告程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-S

29、MP0011-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：序。适用范围：本程序适用于本基因扩增检验实验室所有临床检测的结果报告，只有经培训并获得上岗证的工作人员才有权审核和签发报告单。程序检测结果的报告应准确、清晰、明确、客观和及时，杜绝虚假报告。PCR 测定时，其检测数据要经过分析，避免因非特异性荧光而造成假阳性结果。根据质控品判断PCR则应重新测定。（拷贝数/ml则对样本稀释后再测，结果乘上稀释倍数；如结果低于方法的线性范围下限，则报告小于检测下限。病人档案及测定结果及病人档案一并登记到实验结果记录表中，由室负责人管理所有病人资料。每份报告均应由我实验室出具；报告内容

30、至少应包括：病人*、性别、年龄、样本存 2 年以上。报告单应及时发出。由送化验单人员负责送往各送检医院。打印当日检测报告汇总表，存档，妥善保存 2 年以上.z.-当临床科室医生要求报告结果时，应先确认对方身份，核对其所查询的病人*床号等情况，方可报告，并明确告知对方，实验的最终结果以检测报告单为准。知对方其检测结果，并需明确告知对方，实验的最终结果以检测报告单为准。.z.-检验过程中发生故障时的应急处理程序题目：检验过程中发生故障时的应急处理程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0012-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：及时性和准确性，特制定本程

31、序。适用范围：本程序适用于可能影响到检测报告发出的仪器设备和试剂等，对于潜在应的应急处理程序，室负责人有责任组织并直接监督本程序的实施。程序程度。序见仪器设备管理程序。对于发生故障的仪器设备，及时维修的同时，采取以下处理办法。有满足使用要求的替用设备的，启用替用设备。可借用其他部门仪器设备时，核实该设备的使用状态良好后可借用。措施（特别是防污染）的要求。先作质量检测，合格后方可使用。.z.-当有样本或反应管破裂，并泄露于离心机内或扩增仪时，应停止工作，立即用浸75%的乙醇消毒液的棉签檫拭离心机或扩增仪，然后紫外灯照射 30 min；始标本按要求保存好与下一批标本一起检测。2g/L液的毛巾覆盖

32、30 min 后，清水擦干再用紫外线灯照射 30 min。若质控品出现问题，应更换其他批次的质控品。如果试剂配制与标本处理过程中遇到停电状况，把试剂、标本先保存在冰箱里， 等待电源来时再继续操作。如果在扩增过程中遇到停电，实验室内部UPS电，使 PCR 实验操作完成。仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告的及时发出，可将标本送至其它实验室检查（该实验室同样应为获同类认准的PCR 检测实验室如已影响到报告的及时发出，应向相关医院公告，取得病人和医生的谅解。影响到检测报告发出的情况，应在“应急处理登记表”作记录。.z.-实验室清洁消毒程序题目：实验室清洁消毒程序编号：JS-

33、LJ-SMP0013-000批准：日期：颁发部门：技术部分发部门：技术部生效日期：目的：保证实验室环境的整洁，防止污染。适用范围：适于实验室工作环境、实验台面、工作服、移液器等的清洁消毒工操作程序消毒液配制配制 2g/L 有效氯消毒液：参照消毒剂说明书配制终浓度为 2g/L液。使用，隔夜如使用时应根据本 SOP紫外消毒紫外消毒须根据需要设定时间，通常为 30 min，根据需要适当延长时间。消毒结束后，关闭电源开关。实验室消毒清洁程序窗、地板。实验过程中如发生标本或试剂外溅，应立即用含2g/L30 min，再进行擦拭，随后用清水擦洗，并作记录。实验结束后用含 2g/L 有效氯消毒液对台面进行清洁

34、，紫外灯照射 30 min。.z.-实验结束后，用移动紫外消毒车对工作台面进行紫外照射 30 min30 min。实验结束后，开启室内紫外灯对实验室进行紫外照射消毒至少 30 min。实验结束后，用含 2g/L 有效氯消毒液对各区所有仪器设备进行擦拭清洁。每次对使用过的移液器、镊子用 75%酒精棉球进行擦拭。每周将待清洁工作服高压灭菌后洗涤消毒，不同实验区的工作服隔天洗涤。.z.-文件修改程序题目：文件修改程序起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SMP0014-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：保证文件完整性和有效性。适用范围：本实验室管理体系的所有文件。

35、程序：*出申请。申请在中心会议上通过，文件即可修改。文件修改由原撰写人执行。1、2、3、4 顺序递增，标示在版号后。发布，并同时生效执行，原文件同时作废。文件修改内容的相关记录由实验室负责人保存。.z.-石蜡包埋组织 DNA 提取标准操作规程题目：石蜡包埋组织 DNA 提取标准操作规程起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SOP0001-001批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：/DNADNA ，以从石蜡包埋组织中提取高质量的基因组 DNA。适用范围：本程序适用于所有石蜡包埋组织样品的DNA方法原理：利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，组 DNA，经蛋白酶消化

36、、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液DNA。实验准备:仪器和试剂：/离心柱）（百泰克1.5 ml，20200l，1001000l预备：实验前 10 min56；另一水浴锅调制 90；过程在抽提专用实验台进行，穿实验服，戴乳胶手套及口罩。漂洗液 WB 使用前确认加入无水乙醇，用记号笔在瓶上标记。其余溶液 TL 或 CB37水浴重新溶解，并混匀。样本确认：质量及是否足量等。实验步骤:组织脱蜡：1.5 ml 离心管管盖，用移液枪加入 1ml 5-8 片 10 m（织样品表面轻轻刮去不含组织的石蜡表层，再刮取 5-10um若是蜡卷，则直接用干.z.-净的枪头挑取适量样本）轻轻刮入 1

37、.5 ml 离心管，密盖，振荡器振荡 30s；于离心机内12000 rpm 离心 2 min，弃上清至专用废液缸。注意不要弃掉沉淀。再加入 1 ml 无水乙醇，密盖，再用振荡器充分振荡混匀；于离心机内 12000 rpm 离心 2 min，弃上清专用废液缸。打开管盖，于室温或 37干燥 10-15 min，至酒精完全挥发，备用。过程使用枪头为一次性耗用物，不得反复使用。消化：200 l 裂解液TL，30 l 蛋白酶K，64水浴锅水浴 或直至样品完全溶解水浴锅水浴 30min，短暂离心，试管壁上的溶液收集到管底。200 l 结合液CB100l暂离心，试管壁上的溶液收集到管底。转移溶液：（不要沉淀

38、都转移到一个吸附柱中，12000 rpm 离心倒去收集管中废液。重新将吸附柱放回收集管中。洗涤：500 l 抑制物去除剂 IR，弃枪头，12000 rpm 离心 30s掉收集管中废液。700 l 漂洗液 WB，12000 rpm，离心 30s，倒掉收集管中废液，加500l 漂洗液 WB，12000 rpm，离心 30s，倒掉收集管中废液。晾干吸附柱：12000 rpm 2min，1.5 ml2 min 或以上以彻底晾干吸附材料中残余的酒精。洗脱：65l 的洗脱缓冲液 预热），2-3 12000 rpm 离心 1min，离心管中的液体即为抽提的基因组 DNA。5.8. 浓度测量：用分光光度计测量

39、DNA 浓度。质控标准：DNA20ng/l，OD260/OD280 约为 1.6-2.0 则认为 DNAPCRDNA 暂时不用，可置于-20保存备用。.z.-关机及实验台整理：实验完成后，关闭水浴锅，所有用过的移液器调至最大量程， 摆放整齐，所有用过的东西归回原位。最后用 75%酒精喷洒实验台面，2 min净。注意事项：试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在漂洗液WB醇，并做好标记；溶液使用后，应避免长期暴露于空气中，用后应及时盖紧盖子。剩余石蜡标本在下次接收样本时返还客服部，并由客服签字确认。参考文献： 细胞、组织基因组DNA 提取试剂盒说明书。（百泰克）.z.-石蜡包埋组织样本RNA 提

40、取标准操作规程题目：石蜡包埋组织样本 RNA 提取标准操作规程起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SOP0002-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：柱提法从石蜡包埋组织样本中提取高质量的RNA。适用范围：本程序适用于所有石蜡包埋组织样品的RNA 提取。方法原理：/酚一步法裂解细胞和灭活 RNA，然后总RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗离心的步骤， 漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water 将纯净RNA基膜上洗脱。实验准备：仪器和试剂：通风橱，小型高速冷冻离心机；固定组织基因组R

41、NA（离心柱）PTL，蛋白酶 K，裂解液 MRLRE，漂洗液 RW，RNase-free H2O,70%乙醇，RNase-free 吸附柱，氯仿，收集管，移液器及枪头。注意：所有接触样品的试剂、耗材均需保证无 RNA 酶，无菌，若发现可能存在污染， 要立即更换。实验前预备： 10min次性乳胶手套及口罩。样本确认：质量及是否足量等。实验步骤：组织脱蜡：1 ml5-10 片 10 m（蜡块组织处理：在石蜡包埋组织样品表面轻轻刮去不含组织的石蜡表层，再刮取 5-10um.z.-严禁使用扣取，粉碎，切除等操作破坏组织样本；若是蜡卷，则直接用干净的枪头挑取适量样本）样品轻轻刮入 1.5 ml 离心管，

42、弃切片至一次性垃圾桶。用振荡器振荡30sec；离心 12000 rpm，2min，4。弃上清至专用液体垃圾桶。加入 1 ml弃枪头；用振荡器充分振荡混匀，离心 12000 rpm，2min，4。弃上清至专用液体垃圾桶，室温干燥 10-15 min，至残留的酒精完全挥发。组织破碎：加入240l 溶液PTL和10l蛋白酶K55孵育15min， 8015min。加入 750l 裂解液 MRL，漩涡混匀，室温放置 2 min。分层：加入200l15 sec，室温下孵育3 min。离心rpm，10min，4。取上清：更换手套，用镊子夹取新 1.5 ml 离心管，用移液器小心吸取上清(大概600l)放入新

43、离心管内，加入等体积 70% 乙醇，颠倒混匀。将可能得到的溶液一起转入吸附柱 RA 中（溶液过多可分次过柱）。离心 12000 rpm，45sec，4，弃废液。 RNA 样品被蛋白或基因组 DNA 污染。沉淀：加入 500lRE, 离心 12000 rpm， 45sec，弃掉废液。洗涤：700lRW, 离心 12000 rpm，60sec500l液 RW 12000 rpm 离心 60sec12000 rpm，2min，4。干燥：2min。溶解：加入 30lRNase-free2min。离心 12000rpm，1min，4。浓度测量：用分光光度计测量RNA5.10.保存：保存于-20或者更低。

44、质控标准：RNA100ng/l，OD260/OD2801.8-2.2 则认为RNART-PCR 实验,否则需重新抽提。若抽提好的RNA 暂时不用，可置于-80保存备用。.z.-关机及实验台清理：大量程并摆放整齐；将所有用过的物品归回原位。最后用 75%酒精喷洒实验台面，2 min 后擦拭干净。注意事项：RNARNA 酶污染，如果发现试剂有可能被污染，要立即更换；提取不要求量，更多的要求质。参考文献：百泰克石蜡包埋组织RNA 快速提取试剂盒（离心柱型）说明书。.z.-血液DNA题目：血液 DNA 提取标准操作规程起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SOP0003-001批准：日期：颁发部门

45、：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：/DNADNA 。以从血液样本中提取高质量的基因组 DNA。适用范围：适用于所有新鲜及冷冻保存血液样品的基因组DNA方法原理：利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，组 DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液DNA。实验准备：仪器和试剂：/离心柱）取试剂盒（百泰克）。4.2 . 实验前准备： 实验前10 min 打开水浴锅，升温至70；本实验操作过程在抽提专用实验台进行，穿实验服，戴一次性乳胶手套及口罩。试剂盒中 GD、PW 缓冲液使用前确认加入无水乙醇，并用记号笔在瓶上标记。实验步骤：消化：2.0 ml 离心管，在

46、离心管中加入 200 l 的抗凝血（不足 200l 用GA 补足），弃枪头，并加入 20 l 蛋白酶 K 溶液，弃枪头，混匀。加入 200 l 结合液CB，弃枪头，充分颠倒混匀（15 次），70水浴放置 10 min，溶液应该变清（备）。.z.-加异丙醇：100 l 的异丙醇，弃枪头，充分震荡 30 sec短离心去除管盖内壁水珠。转移溶液：将所有的溶液和沉淀都加入一个吸附柱中，12000rpm 离心30s集管中废液。洗涤：500 l 抑制物去除剂 IR，弃枪头，12000 rpm 离心 30s掉收集管中废液。700 l 漂洗液 WB，12000 rpm，离心 30s，倒掉收集管中废液，加500

47、l 漂洗液 WB，12000 rpm，离心 30s，倒掉收集管中废液。晾干吸附柱：12000 rpm 2min，1.5 ml2 min 或以上以彻底晾干吸附材料中残余的酒精。洗脱：65l 的洗脱缓冲液 预热），2-3 12000 rpm 离心 1min，离心管中的液体即为抽提的基因组 DNA。浓度测量：用分光光度计测量DNA质控标准：DNA5ng/l，OD260/OD2801.6-2.0 则认为DNAPCR保存：若抽提好的DNA-20保存备用。实验台整理：75%酒精喷洒实验台，2 min 后擦拭干净。注意事项：试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在WB 漂洗液加入无水乙保存。参考文献：细胞/

48、组织基因组DNA（离心柱型（百泰克。.z.-口腔拭子/唾液样本DNA 提取标准操作规程题目：口腔拭子/唾液样本DNA 提取标准操作规程起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SOP0004-001批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：DNA 制备膜选择性地吸附DNA，以从口腔拭子/DNA。适用范围：/唾液样品的基因组 DNA 提取方法原理：利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，组 DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液DNA。实验准备：仪器和试剂：/离心柱）取试剂盒（百泰克）。. 实验前准备：实验前 10 min70；本实验操作过

49、程在抽提专用实验台进行，穿实验服，戴一次性乳胶手套及口罩。试剂盒中 WB乙醇，并用记号笔在瓶上标记。对唾液样本，实验前取 1ml 于 1.5 离心管中，4000rpm，离心 5min集细胞沉淀备用。实验步骤：消化：对拭子：2.0mlTL，200ul，充分震荡混匀（2min）；对唾液细胞：加入裂解液 TL， 200ul20 l 蛋白酶K.z.-200 l 结合液 CB（上下颠倒 15 次置 10 min，（收集管中为后续步骤做准备）。加异丙醇：100 l 的异丙醇，弃枪头，充分震荡 30 sec短离心去除管盖内壁水珠。转移溶液：将所有的溶液和沉淀都加入一个吸附柱中，12000rpm 离心30s集

50、管中废液。洗涤：500 l 抑制物去除剂 IR，弃枪头，12000 rpm 离心 30s掉收集管中废液。700 l 漂洗液 WB，12000 rpm，离心 30s，倒掉收集管中废液，加500l 漂洗液 WB，12000 rpm，离心 30s，倒掉收集管中废液。晾干吸附柱：12000 rpm 2min，1.5 ml2 min 或以上以彻底晾干吸附材料中残余的酒精。洗脱：65l 的洗脱缓冲液 预热），2-3 12000 rpm 离心 1min，离心管中的液体即为抽提的基因组 DNA。浓度测量：用分光光度计测量DNA质控标准：DNA5ng/l，OD260/OD2801.6-2.0 则认为DNAPCR

51、保存：若抽提好的DNA-20保存备用。实验台整理：75%酒精喷洒实验台，2 min 后擦拭干净。注意事项：试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在WB 漂洗液加入无水乙保存。参考文献：细胞/组织基因组DNA（离心柱型（百泰克。.z.-组织DNA题目：组织 DNA 提取标准操作规程起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SOP0005-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：/DNADNA 。以从组织样本中提取高质量的基因组 DNA。适用范围：本程序适用于所有新鲜及冷冻保存组织基因组DNA方法原理：利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，组 DNA，经蛋白酶消化、漂

52、洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液DNA。实验准备：仪器和试剂：/离心柱）取试剂盒（百泰克）。预备： 10 min56台进行，穿实验服，戴乳胶手套及口罩。GDPW 漂洗液使用前确认加入无水乙醇，用记号笔在瓶上标记。实验步骤：消化：将组织样本样本置于冰上，用酒精棉球擦拭手术刀及其镊子，晾干。剪取1.5 m1 离心管，并用手术刀尽可能的剪碎。加入 200 l 裂解液TL20 l 蛋白酶 K 溶液，混匀。置于 56水浴锅水浴 2 小时以上，直至组织溶解， 简短离心以去除管盖内壁的水珠。同时将手术刀及镊子用酒精棉球擦拭干净，晾干， 收藏起来。在消化完成的组织样本中加入 200 l 结合

53、液 CB，弃枪头，充分颠倒混匀， 7010 min，（管放入收集管中为后续步骤做准备）。.z.-加异丙醇：100 l 的异丙醇，弃枪头，充分震荡 30 sec短离心去除管盖内壁水珠。转移溶液：将所有的溶液和沉淀都加入一个吸附柱中，12000rpm 离心30s集管中废液。洗涤：500 l 抑制物去除剂 IR，弃枪头，12000 rpm 离心 30s掉收集管中废液。700 l 漂洗液 WB，12000 rpm，离心 30s，倒掉收集管中废液，加500l 漂洗液 WB，12000 rpm，离心 30s，倒掉收集管中废液。晾干吸附柱：12000 rpm 2min，1.5 ml2 min 或以上以彻底晾

54、干吸附材料中残余的酒精。洗脱：65l 的洗脱缓冲液 预热），2-3 12000 rpm 离心 1min，离心管中的液体即为抽提的基因组 DNA。浓度测量：用分光光度计测量DNA质控标准：DNA5ng/l，OD260/OD2801.6-2.0 则认为DNAPCR保存：若抽提好的DNA-20保存备用。实验台整理：75%酒精喷洒实验台面，2 min 后擦拭干净。注意事项：组织应尽量破碎；试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在漂洗液WB紧盖子。.z.-组织RNA题目：组织 RNA 提取标准操作规程起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SOP0006-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分

55、发部门：技术部目的：裂解细胞并通过酚氯仿分离法以从组织样本中提取高质量的RNA。适用范围：本程序适用于新鲜或冷冻保存组织样品的RNA 提取。方法原理：异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNARNA 释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNARNA和 DNA 分离开。实验准备：仪器和试剂：75%乙醇，DEPC 水。注意：所有接触样品的试剂、耗材均需保证无 RNA 酶，无菌，若发现可能存在污染， 要立即更换。预备：10 min罩。实验步骤：组织破碎：1 ml RNAiso剪刀剪取绿豆大小组织样本放入研磨器中.冰上用力研磨粉碎样本。用镊子夹取 1.5 ml 离心

56、管，将研磨后的液体转入离心管，室温静置 5 min。分层：按 RNAiso 1/515 sec置 5 min。离心 12000 rpm，15 min，4。.z.-取上清：1.5 ml心管内。吸取上清时一定要小心，不要吸到中间层的蛋白，一定要少吸，不要贪多， RNA 提取不要求量，更多的要求质。沉淀：10 min。离心，12000 rpm，10 min，4。洗涤：弃上清，用 75%乙醇洗涤沉淀。离心 12000 rpm，5 min，4。干燥：25 min。溶解沉淀：30 lDEPC 水溶解沉淀。浓度测量：用分光光度计测量RNA 浓度。质控标准：RNA100ng/l，OD260/OD2801.8-

57、2.2 则认为RNART-PCR 实验,否则需重新抽提。保存：若抽提好的RNA-80保存备用。实验台整理：75%酒精喷洒实验台面，2 min 后擦拭干净。注意事项：使用组织提取RNA 时组织必须新鲜，否则RNA 便容易被内源性的RNA 酶降解；所有的试剂、耗材均无 RNA更换；吸取上清时一定要小心，不要吸到中间层的蛋白，一定要少吸，不要贪多，以RNA 样品被蛋白或基因组DNA 污染。.z.-反转录标准操作规程题目：反转录标准操作规程起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SOP0007-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：将抽提好的 mRNAcDNA，作为Rea

58、l-time PCR基因的表达情况。适用范围：无降解，分光光度计检测浓度大于 100ng/l，OD260/OD2801.80-2.0 的 RNA 模板。方法原理：以RNADNA切作用除去内含子的成熟 mRNA 为模板，合成RNA/DNA 杂化双链，然后水解RNA DNA 单链为模板合成 DNA 双链。实验准备：冰块，保温盒，水浴锅试剂：RT-Mi*,RT-引物；DEPC 水。注：逆转录所需试剂使用前需从冰箱中取出置于冰上融化，混匀后备用。设备：八连管、10l 和 200l（RNA PCR（ABI 10l、20l 和 100l 移液枪。样本确认：Total RNA100ng/l，OD260/OD

59、280 值约为 1.80-2.0。实验步骤：试剂准备：将样品，RT-Mi*,RT65 度。将 RNA200ng/l 的用 DEPC200ng/l。样品标记：用记号笔在八连管上标记好每管反转录的样本编号。加样：按以下体系加样.z.以上样品水 浴 5 min 上放置。再管中，加入-总 RNART-引物H2O总 RNART-引物H2O100-2000ng1lup to 11l以上样品轻轻混匀后，短暂离心使液体都集中于管底，整理实验台：试剂用完后，应立即放回冰箱冻存，RNA-80防止降解。上机反应：把加完样的PCR反应程序为：25427545 min60min 10min质控标准：对扩增产物取5ul1

60、ulloading buffer一25427545 min60min 10min注意事项：整。所有操作均于冰上进行。RNA freecDNA20保存。.z.-基因mRNA题目：基因mRNA 表达检测标准操作规程起草：审核：日期：日期：编号：JS-LJ-SOP0008-000批准：日期：颁发部门：技术部生效日期：分发部门：技术部目的：*种基因的 mRNA适用范围：本程序适用于对各种生物体的cDNA 样本进行 mRNA实验原理：real time PCR，即实时监测 PCR 反应体系中加入荧光物质，并通过real time PCR 检测系统对 PCR光信号强度进行实时监测，最后对未知模板进行定量分