微生物检测手段及注意事项

1、微生物检测手段及留意事项微生物的检测，无论在理论争辩还是在生产实践中都具有重要的意义，本文对生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标优缺点。一个微生物细胞在适宜的外界条件下，不断的吸取养分物质，并按 自己的代谢方式进展陈代谢。假设同化作用的速度超过了异化作用， 则其原生质的总量重量，体积，大小就不断增加，于是消灭了个体 长时，则到达肯定程度后就会发生生殖，从而引起个体数目的增加，这 长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指 质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为依据，而测定 体积，密度，

2、浓度，做指标来进展衡量。微生物计量法体积测量法又称测菌丝浓度法，通过测定肯定体积培育液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取肯定量的待测培育液如10 mL放5 min如 500010-v/10 偏差。称干重法可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的 1020%。在离心法中，15 次，进展枯燥。枯燥可用烘箱在 105 100 80 40 下真空枯燥，枯燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维40 发法较为烦琐，通常猎取的微生物产品为菌体时，常承受这种方法，如活性干酵母Activity Dry Yeast, ADY,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。比浊法微生物的

3、生长引起培育物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定肯定波长下的吸光值，推断微生物的生长状况。对某一培育物内的菌体光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长状况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如使用UNICO 公司的紫外-可见 600 nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD，以此监控E.coli 的生长及诱导时间。600菌丝长度测量法对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培育基上测定肯定时间内菌丝的培育基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。微生物计数法血球计数板法血球计数板是一种有特别构造刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四0.

4、1 mm0.1 mm2 面积上刻有400 个小方格。通过油镜观看，统计肯定大格内微生物的数量，即可算1 mL 菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜结果是包括死细胞在内的总菌数。染色计数法为了弥补一些微生物在油镜下不易观看计数，而直接用血球计数板数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观看，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。比例计数法将颗粒如霉菌孢子或红细胞浓度的液体与一待测细胞浓度未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制颗粒浓度的悬液做标准。液体稀释法对未知菌样做连续十倍系列稀释，依据估量数，从最适宜的三个连10 5 mL 1 mL 3 15 只装培育液

5、的试管中，经培育后记录每个稀释度消灭生长的试管数，然后查最大或然数表MPNMostProbableNumber得出菌样的含菌数，依据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。平板菌落计数法这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进展梯度稀释，取肯定9 cm 的平板上消灭50500 菌进展了一次分别培育，获得了单克隆。试剂纸在平板计数法的根底上，进展了小型商品化产品以供快速计数用。 2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑TTC，无色待蘸取测试法计数快捷准确，相比而言避开了平板计数法的人为操作误差。膜过滤法用特别的滤膜过滤肯定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，

6、在紫外显3.间接测定法微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多， 生物量。测定含氮量12.5%7.5%6.0%。依据含氮量6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，222如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas 测N 气法。Dumas 测N 气法是将样品与CuO 混合，在CO 气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO 后即可测出N222测定含碳量22将少量0.22.0 mg1 mL 水或无机缓冲液中，2 mL 2%的K Cr O 100 30 5mL580 nm 22复原糖测定法复

7、原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通过复原糖3 分钟，取出加少许盐酸酸化，参加Na S O接近终点时加2 23入淀粉溶液，连续加NS O 至终点，查表读出复原糖的含量。氨基氮的测定a2230.02 mol/L的NaOH 18%的中性甲醛，反响数刻，0.02 mol/L NaOH 培育液中氨基氮的含量，可间接反映微生物的生长状况。其他生理物质的测定产CO2用标记葡萄糖做基质，耗氧，黏度，产热等指标，都可用于生长量的测定。也可以依据反响前后的基质浓度变化，最终产气量，微生物活性三方面的测定反映微生物的生长。如在BMP-2 的发酵生产上，随时监测溶氧量的变化和酸碱度的变化，推断细菌的长势

8、。商业化快速微生物检测法微生物的检测，其进展方向是快速，准确，简便，自动化，当前很多和科学争辩领域。例如：试剂盒，培育基等手段抗干扰培育基和微生物数量快速检测技术结合解决了传统微生物 定了坚实的根底。如：抗干扰微生物培育基，型生化鉴定管，微生物计数卡，环境质量检测试剂盒等，可便利的用于多项检测。借助型先进仪器BACTOMETER 全自动各类总菌数及快速细菌检测系统可以数小时内同样高度敏感原理是利用电阻抗法Impedance Technology将待测样本与培育基置于反响试剂盒内，底部有一对不锈钢电极，测定因微生物生长大肠杆菌群，霉菌，乳酸菌，嗜热菌，革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌等。微生物OD

9、值是反映菌体生长状态的一个指标，OD 是Optical Density光密度400700 nm 都的是：505 nm 测菌丝菌体、560 nm 测酵母、600 nm 测细菌。用测OD 方依据10 10 管，然后每个点取一管出来测OD值就行了。一般测菌体密度的OD 580 nm-660 nm，如枯草芽孢杆 200 nm400 nm 为紫外光区，400 nm800 nm 为可见光区。空白如用水做，需要离心洗涤菌体；空白如用不以求条件全都，最终留意一般OD 0.10.4 OD 1.0OD 太大，分光光度计的灵敏度就会显著降低。一般都测吸光值，而且最好是整个试验过程中，保持发酵液或菌体3 次的数最好。

10、OD 600 nm600 nm 处对浊度的反响比较灵敏。测吸取峰的实际意义并不大，比方LB 摇瓶培育过夜的大400 多纳米处的吸取最大，但那很可能是培育液的吸取峰。局部发酵产品配方和工艺(二)纤维素酶GD-6。 3040 h。1.00.2(N42HPO40.22HPO40.02， 0.08%，MgSO4 0.09%，pH 5.56.0，2830140 h。黄原胶菌种：黄单孢菌。4%0.05%0.02% 115转/0.5 公斤，最高通1:0.5/7.0 ,72 14600 mPas左右。 MgSO4 0.15%。发酵参考环境：5100 140 转/1:0.5/分，罐压 细菌纤维素菌种：Aceto

11、bacter xylinum NUST4。2.4%2.2%1.6%，醋酸 0.24%， Na2HPO4 3.5%，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.6%，FeSO40.0015%，pH6.0。Mg2+最 g/L Fe2+0.003 g/L烟酸、0.02 9.87 g/L。1.1812。5.0%1.5%0.2%，Na2HPO4 0.2%， 0.03%1%。pH 6.828 62 g/。 0.5%乙酸反复冲洗，即获细菌纤维素。头孢菌素菌种：顶头孢霉。 6.6。CaCO3MgS4，(NH4)2S04，FeSO4，MnSO4，ZnSO4，CuSO4，pH6.06.1。发酵参考环境：5100 11

12、5转/0.5 公斤，最高通1:1/分，pH6 150 小时。螺旋霉素菌种：螺旋霉素链霉菌。发酵参考环境：5100 115转/0.5 公斤，最高通 小时左右。依据螺旋霉素生物合成的争辩结果，短链48 h 0.5%浓度的乙10%效价。在培育 48 h 时参加较在根底料中参加更能提高螺旋霉素发酵效价，豆油1%为好。利福霉素菌种：地中海诺卡氏菌。各种无机盐适量。 115转/0.5 公斤，最高通1:1/130 小时左右。红霉素菌种：红色链霉菌。4%1%，无机盐适量。442%，CaCO3 0.6，(NH4)2SO4 0.15%，KH2PO4 0.02，NaC10.2%，MgSO4 0.02%。发酵参考环境

13、：10100吨罐，搅拌转速115转/分，最高通风量1:1/分，pH 洁霉素菌种：链霉菌。2.5%0.6%，(NH4)2SO4 0.5%，NaNO3 4%， 0.9%2.5%3%，KH2PO4 0.07%。发酵参考环境：5100 100 转/1:0.5/分，罐压0.7公斤，pH6.57，培育温度：060h，31；60130h，30；130h至31 130 mPas150 小时。土霉素30.658%(N42SO41.2NaCl 0.2， 0.015%CoCl2 510 g/吨。发酵参考环境：5100 140 转/1:0.7/分，罐压0.7公斤。环孢素 0.15%，KH2PO4 0.2%，KCl 0

14、.05%，MgSO4 0.005%，CaCO30.2%。发酵参考环境：5100 140 转/1:0.7/分，罐压 CyA的生物合成量影响格外大。纳他霉素菌种：褐黄孢链霉菌。培育基：大豆蛋白胨l.8%0.45%3.6%，pH 7.5。发酵时间96 h左右。庆大霉素菌种：庆大小单孢菌。4230.3(N42SO40.1， 0.5%CoCl2 810 g/吨。 转/1:1/0.5 小时。金霉素菌种：金色链霉菌。 0.004%，NaCl 0.25%，(NH4)2SO4 0.5%，CaCO3 0.7%，蛋白1.00.2MgS4 0.0254.0 mL/100m290.5 166 h。小诺霉素菌种:棘孢小单

15、孢0.1%2%0.2%，淀粉4%，pH7.5。4%1.5%2.5%，0.05%，pH7.2。四环素KH2PO4，每罐外加二巯基NaBr。发酵参考环境：5100 140 转/1:0.7/分，罐压0.7公斤，pH6.0左右。局部发酵产品配方和工艺(一)赤霉素发酵1060 115 转/1:1/29 32 pH 5.5 pH 3.54.5之间为宜。1.5%1.5%1.0%，KH2PO4 0.1%， 0.05%，MgSO4 0.1%pH值。7.0%1.0%，KH2PO4 0.15%，MgS40.08，0.003，pH 5.5.5 130 小时阿维菌素：3.02.00.2CoC262O 0.5 ppm，

16、pH 7.07.2。5.0l.0l.01.0CaCO30.2， CoCl26H2O0.5 ppm，pH 7.07.2。妥布霉素发酵菌种：黑暗链霉菌。(N42SO40.50.4MgS40.61.0ZnS40.05CaCO30.6，37 112 h 左右。氢化可的松菌种：蓝色犁头霉(AS365)1.0%0.23%1.5%0.5%，pH 6.6.5。28 24 h0.25RSA醋酯化合物：17羟基孕甾醋酸酯，RSA，3642 h。宁南霉素菌种：诺尔斯链霉菌西昌变种21.0%1.02HPO40.5， 0.5%，NaCl 0.5%，CaCO3 0.5%0.01%2.0%，灭菌前pH 7.27.4。2.0

17、3.00.012HPO4 0.02%，CaCO30.03%pH 7.0。2.0%1.0%3.5%0.05%，K2HPO40.02%，MgSO40.05%，(NH4)2SO40.25%，CaCO30.5%，初始pH7.0。发48 h 到达发酵顶峰。多抗霉素 0.1%，CaCO3 0.3%，pH 6.5。10接种量，28，120h。BT30；发酵前期pH7.01:2.0 v/(vmin)1:2.0 v/(vmin)高 1010/mL)；1:0.5、1:1.0v/(vmin)，更有利于菌体向芽孢及伴孢晶体转化(98以上)。 0.5%1.5%，NaCl 0.5%1.0%，pH7.2。衣康酸菌种：土曲霉

18、。发酵参考环境：5100 100 转/1:0.2/分，罐压0.7公斤，pH4.0左右。90 小时。曲酸菌种：黄曲霉。发酵参考环境：5100 100 转/1:0.2/分，罐压0.7公斤，pH4.0左右。130 小时。菌种：米曲霉。利用豆渣的发酵培育基：豆渣 80%，麸皮 24%，酵母膏 1.2%，MgSO47H2O0.16%，pH自然；30发酵培育，56 d 菌体生长量和曲酸产量最大。120.5MgS47H2O 曲酸产量最大。柠檬酸菌种：黑曲霉。 转/1:1/0.7pH3 左右；143436 90 小时。谷氨酸菌种：谷氨酸棒杆菌。 转/1:1/0.7pH7.0 左右；培育基主要成分：葡萄糖 13

19、%，MgSO47H2O 0.08%，KH2PO4 0.08%，玉米0.5%1%3%5%，KCl 0.1%30 小时。赖氨酸菌种：谷氨酸棒杆菌。 转/1:1/0.7pH7.0 左右。种子培育基：葡萄糖 1.5%，(NH4)2SO4 0.4%，MgSO47H2O 40 mg，玉米浆，尿素 ，豆浓pH 7.27.4，11515 min。发酵培育基：葡萄糖 15.0%，(NH4)2SO4 3.5%，MgSO47H2O 20 mg，玉米浆2.5，乙酸铵0.920 g2HP40.15，豆浓1.6pH7.7.4。 11515 min。碱性蛋白酶菌种：芽孢杆菌10.5N2HPO40.4K2PO40.03， 0.1%，pH中性，12125 min。II2%3%3%，Na2HPO4 0.4%， 0.1%，pH 8.0，12125 min。5%2.5%，KH2PO4 0.03%， 0.4%，Na2CO3 0.1%pH。36 1:0.151:0.240 h 左右。低温碱性蛋白酶菌种：黄海黄杆菌。I：豆饼粉(0.5% NaOH，121 30 min，冷却、 0.4%，KH2PO40.03%，Na2CO3 0.1%， 0.02%，CaCl2 0.2%，泡敌适量，