野菊花高效液相色谱指纹图谱及质量评价方法的建立

1、野菊花高效液相色谱指纹图谱及质量评价要领的创立刘婷娜朱恩圆侴桂新王峥涛【摘要】目的创立野菊花的高效液相色谱指纹图谱及质量评价要领，研究差异网罗地和差异种野菊花药材的质量。要领使用RP-HPL要领，阐发了12批市售和8批采自差异产地的野菊花药材。活动相：A相为乙腈，B相为0.1醋酸水溶液，梯度洗脱，流速：1.0lin-1；检测波长：326n。结果在45in内创立了野菊花HPL指纹图谱，确定了野菊花药材中的22个共有峰,归属了此中的黄酮类化合物，并对此中黄酮类身分举行主身分阐发。结论野菊花药材的反相高效液相色谱指纹图谱，重复性好，在野菊花分类学上有必然的引导意义，用于野菊花的质量评价可行。【关键词

2、】野菊花高效液相色谱法指纹图谱质量评价Abstrat：bjetiveTevaluatethequalityfFlshrysantheiIndiibyHPLfingerprintandthepnentanalysis.ethdsRP-HPLasusedfrthedeterinatinffingerprint.Theseparatinasahievedna18lun(2504.6,5).Thebilephaseasaixturefaetnitrile(A)and0.01Aetiaid(B)ingradientelutin,theflrateas1.0lin-1,andthedetetinavele

3、ngthas326nResultsTheHPLfingerprintfFlshrysantheiIndiiassetupithin45inutesand22harateristipeaksereshntparetheflavnidsindifferentriginsanddifferentspeiesinFlshrysantheiIndii.nlusinTheRP-HPLfingerprintethdisrepeatable,feasibleinthequalityntrlfFlshrysantheiIndiiandanbeusedtidentifythedifferentspeiesfFls

4、hrysantheiIndiiKeyrds：FlshrysantheiIndii;HPL;Fingerprint;Qualityevaluatin野菊花是我国大部门地域民间常用中草药之一，有清热解毒、平肝明目的成果,秋冬二季花初开放时采摘，晒干或蒸后晒干入药1。2022版?中国药典?部划定，野菊花泉源于菊科菊属植物野菊DendrantheaeindiuL.的头状花序。而在民间用药中，野菊变种及北野菊D.brealeak，菊花脑D.nankingenseHand.-azz或岩香菊(又称甘菊)D.lavandulaefliu(Fish)ak及其变种也做野菊花用2。如今，药材市场上流畅的野菊花重要泉

5、源于植物野菊和甘菊，大概野菊和甘菊两者混淆品。野菊、甘菊两者植物形态相近，断定比力困难，质量上难以得到操纵。2022版?中国药典?野菊花含量测定项下仅测定了野菊中蒙花苷的含量，不克不及对野菊花的质量举行全面正确地评价。本文接纳高效液相色谱法对野菊花商品药材和本身网罗的差异产地的野菊花药材举行指纹图谱研究，并对其重要活性身分黄酮类身分举行统计学阐发，创立野菊花药材质量评价的阐发要领，为野菊花药材的质量操纵提供有用要领，对进一步进步野菊花的质量评价要领以及在野菊花植物化学分类学上具有必然的引导意义36。1仪器与质料DinexSuitP680DGPsyste型液相色谱仪，PDA100二极管阵列检测器

6、，变色龙色谱事情站。比较品：绿原酸购自上海沪云医药；蒙花苷由上海中药尺度化中央提供；木犀草素、木犀草素-7-葡萄糖苷木犀草苷芹菜素为廉价(从野菊D.indiuL中分散得到，经核磁和质谱断定后确定，接纳归一化法盘算含量，HPL检测纯度98)；乙腈为色谱纯，磷酸为阐发纯，水为纯洁水。野菊花购自天下各药店12批和网罗自差异产地的8批(网罗的药材颠末上海中医药大学吴立宏副研究员和安徽中医学院刘守金副传授断定，凭据标本存放于上海中药尺度化研究中央药材标本室)。药材环境见表12。表112批市售野菊格式品的泉源2要领与结果262.1色谱条件与体系实用性色谱柱Alai12022柱(2504.6，5)；活动相：

7、A相为乙腈，B相为01醋酸水溶液，梯度洗脱，活动相变革比例见表3，流速：1.0lin-1；检测波长：326n；柱温；30；进样量：10l。以木犀草素的色谱峰(12号峰)盘算理论塔板数不低于5000。表28批网罗得到的野菊格式品的产地及植物泉源表3梯度洗脱活动相的比例2.2比较品溶液的制备称取木犀草素、绿原酸、木犀草苷、蒙花苷、芹菜素比较品适量，细密称定，别离置于10l量瓶中,细密参加乙腈-甲醇-水211溶剂溶解稀释至刻度，制成比较品混标溶液。2.3供试品溶液的制备细密称取野菊花药材粉末(过4号筛)0.5g,置于100l三角烧瓶中,细密参加甲醇-醋酸乙酯1125l,超声30in，放冷，补足重量。

8、取续滤液，经微孔滤膜(0.45)过滤后，取续滤液制成供试品溶液。2.4细密度实行细密汲取野菊花供试品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，记载色谱指纹图谱。结果表白，各色谱峰与木犀草素内参比峰的相对保存时间和相对峰面积的RSD均小于5.0，切合指纹图谱要求。2.5重复性实行称取野菊格式品(网络自苏州)6份，按“供试品溶液的制备项下操纵，在上述色谱条件下进样阐发，盘算各色谱峰与内参比峰的相对保存时间和相对峰面积，其RSD均小于5.0，切合指纹图谱要求。2.6不变性实行取供试品溶液，于室温下安排，别离在0，2，4，8，16，24h进样阐发，盘算各色谱峰与内参比峰的相对保存时间和相对峰面积，其RSD

9、均小于5.0，实行结果表白，野菊格式品溶液在24h内不变性精良。2.7结果野菊花药材指纹图谱中的特性峰以经形态学断定的12批野菊花药材为研究工具，举行指纹图谱研究。共确认了22个色谱峰。通过比对保存时间和紫外汲取图谱的要领，指认了5个色谱峰，别离为绿原酸(1号峰)、木犀草苷(3号峰)、蒙花苷(11号峰)、木犀草素(12号峰)、芹菜素(16号峰)。典范图谱、市售野菊花色谱图、网罗得到的野菊花色谱图见图13。图1野菊花药材(购自北京)的高效液相色谱图此中：1，2，4，5，6，7号色谱峰的紫外汲取图与绿原酸相似，应为绿原酸同系物，3，8，10，11，12，13，16，17，18，19，20号色谱峰为

10、黄酮类化合物。图212批市售野菊花药材的高效液相指纹图谱图38批采自差异产地野菊花药材的高效液相指纹图谱图412批药材黄酮类身分阐发图58批网罗自差异产地的药材中黄酮类身分的主身分阐发图68批网罗自差异产地的药材中黄酮类身分的主身分阐发3讨论本文接纳RP-HPL梯度洗脱的要领对20批差异泉源的野菊花药材举行了指纹图谱研究，对此中的黄酮身分的分散获得了精良的结果。在对20批差异泉源的野菊花药材举行色谱阐发的底子上在45in内创立了野菊花的高相液相指纹图谱，而且归属了22个共有峰，此中确定了5个共有峰别离为绿原酸、木犀草苷、木犀草素、蒙花苷、芹菜素。提取条件的优化：比力了水提醇沉，80乙醇回流，甲

11、醇超声，醋酸乙酯超声，甲醇与醋酸乙酯差异比例混和溶剂超声。此中醋酸乙酯与甲醇的混和溶剂提取出来的样品色谱峰较富厚，绝大多数色谱峰的紫外汲取均表现为黄酮类身分的特性汲取，且比力了醋酸乙酯甲醇比例为31，21，11，12种种溶剂体系提获得到的样品图谱，结果并无大差异，应选用醋酸乙酯-甲醇11为提取溶剂。比力溶剂超声15，30，45in的提取结果，结果确认超声提取30in为提取最正确时间。检测波长的选择：接纳二极管阵列检测器观察200400n差异检测波长图谱。结果表白，326n的图谱色谱信息富厚，因此选择326n为指纹图谱的检测波长。色谱活动相的选择：经观察甲醇-水溶液、乙腈-水、乙腈-醋酸水溶液、

12、乙腈-磷酸水溶液等多种活动相体系，结果表白，接纳乙腈-醋酸水溶液活动相体系，对色谱峰的分散结果最好，各色谱峰均能实现精良的分散，末了确定乙腈-0.1%醋酸水为活动相。在实行历程中创造绿原酸比较品在溶液状态不不变，轻易转化为咖啡酸。但是在21批药材液相图谱中都未创造咖啡酸色谱峰，说明绿原酸在该样品前处置惩罚要领历程中不变，样品处置惩罚要领可靠。野菊花药材在植物泉源上较为杂乱，重要为野菊和甘菊两种。而野菊和甘菊在漫衍上常常是交织生长，且在形态上差异不大，故这两莳植物泉源的野菊花药材常常混淆网络。此种环境在本文指纹图谱数据的聚类阐发结果也得以表现，通过我们创立的野菊花高效液相指纹图谱，并举行统计学阐发可以或许将二者分开，这对付断定市场上的商品野菊花药材的植物泉源具有必然的引导作用。【参考文献】1国度药典委员会.中国药典(部)S.北京：化学产业出书社，2022:219.2张捷，谭生建，姜韧，等.野菊花的研究希望J.中国新医药,2022,3(1):8.3谭晓杰,贾英，齐丹丹，等.野菊花RP-HPL色谱指纹图谱的创立及其质量研究J.药物阐发