洁净环境灭菌与检查

1、洁净环境灭菌与检查第1页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院【知识目标】 熟悉生物制品生产对环境、厂房及洁净级别的要求。【能力目标】 1、学会领取并配制消毒剂，填写领料 单及配制单。 2、学会不同级别洁净区的清洗和消毒。 3、学会测定洁净区的沉降菌并填写检 查记录。第2页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院【主要内容】基础知识介绍：生物制品生产对厂房及环境的要求实训操作：任务1、 领取并配制消毒剂任务2、洁净区清洗和消毒任务3、测定模拟洁净区的沉降菌第3页，共41页，2022年，

2、5月20日，10点44分，星期四上海农林职业技术学院基础知识介绍：生物制品生产对厂房及环境的要求1. 选择厂址时应注意考虑满足的条件应在大气含尘、含菌浓度低，无有害气体，自然环境好， 卫生条件较好的区域。(2) 交通方便，但应远离交通要道及工厂。(3) 排水良好，应无洪水淹没危险。第4页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院(4) 市政区域规划中，不会使厂址环境产生不利于产品质量 的影响。(5) 水、电、燃料、排污、物资供应和公用服务条件较好。(6) 地势高燥，有利于污水的排放与净化。第5页，共41页，2022年，5月20日，10点44分

3、，星期四2. 厂区布置生产、行政、生活和辅助区的总体布局应合理，不得互相妨碍。(2) 生产车间与实验动物房、附属车间分开，即洁净区与污染区、非洁净区分离，以保证产品质量和防止散毒、污染；人流与物流分开；洁净物与污染物分流。(3) 生产房应充分利用组合式车间结构，并根据要求设立不同洁净级(100级、1000级、l0000级、100000级)的洁净生产区和缓冲区。生物制品与检测课件上海农林职业技术学院第6页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四我国生产厂房的洁净等级标准生物制品与检测课件上海农林职业技术学院洁净级别/级尘粒数（个/m3）活微生物数/（个/m3）0.5m5m沉降菌浮

4、游菌100350001510003500020003100100003500002000010500100003500000200000-第7页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院 100级：灌装前不经无菌过滤的制品及配制、合并、精制、 添加稳定剂、佐剂、灭火剂等。 10000级：灌装前需经无菌过滤的制品及其配制、合并、精制、添加稳定剂、佐剂、灭活剂、除菌过滤、超滤等。生物制品生产环境的空气洁净级别要求如下：第8页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四 100000级：原料血浆的合并、非低温提取、分装前巴氏消毒、轧盖及

5、制品最终容器的清洗等。 体外免疫诊断试剂的阳性血清的分装，抗原、抗体分装，应在100000级环境、局部100级级下进行。上海农林职业技术学院第9页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院不同洁净级别之间的静压差应5Pa(0.5mm水柱)；洁净区与非洁净区之间的静压应l0Pa(1.0mm水柱)；静态或动态情况下，压差均应能始终维持设计规定的数值。第10页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院(5) 生产用苗(毒)种和非生产用菌(毒)种、生产用细胞与非生产用细胞、强毒与弱毒、死毒与活毒、脱

6、毒前与脱毒后的制品和活疫苗与灭活疫苗、预防制品等的加工或灌装不得同时在同一生产厂房内进行，其贮存要严格分开。（6）必须建立等级实验动物房；（7）绿化设计要做到“土不见天”。 第11页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四任务1、 领取并配制消毒剂生物制品与检测课件上海农林职业技术学院学习目标： 了解消毒的目的和意义；掌握领取和配置消毒剂的方法。 任务提出：现在要开始进行某种生物制品的生产，需要一个万级洁净室作为洁净生产车间，为了对洁净室进行彻底的清洗、消毒，需要按生产指令单向仓库领取配料并核对、填写收料记录，并按照处方及SOP要求配制0.2%新洁尔灭、5%甲酚皂液、75%乙醇

7、溶液，填写配制记录。任务分析：要配置消毒剂，首先要得到生产指令单，按照处方要求，向仓库领取所需要的配料，再按照SOP的要求，逐一配置。第12页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院知识链接：一、消毒剂的种类清洁剂包括：洗衣粉溶液、洗衣液、洗手液、洁厕剂、洗洁精、硫酸-重铬酸钾洗液、0.2%、1%、2%NaOH溶液、1%稀盐酸、95%乙醇溶液、乙醇：乙醚（3：7）混合液。 消毒剂包括：75%乙醇溶液、0.1%新洁尔灭溶液、4%苯酚液、2%过氧乙酸、2%甲酚皂溶液、3%碘酊、84消毒液。 空气消毒剂：臭氧 第13页，共41页，2022年，5月

8、20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院二、常见消毒剂的配制与稀释采用稀释法配制消毒剂，其公式是： CV=C1V1C：浓溶液的浓度 V：需用浓溶液的体积C1：稀溶液的浓度 V1：欲配制稀溶液的体积。第14页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院任务实施：一、领取配料，填写领料单 领取 新洁尔灭、甲酚皂液、乙醇等配料。第15页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院二、配制步骤0.2%新洁尔灭溶液：取5%新洁尔灭液200ml加水至5000ml 稀释成0.2%的溶

9、液，置干燥容器内密闭保存。5%甲酚皂溶液：取50%甲酚皂液500ml加水至5000ml稀释成 5%的溶液，置干燥容器内密闭保存。75%乙醇溶液：取95%乙醇液3947ml加水至5000ml稀释成 75%的溶液，置干燥容器内密闭保存。第16页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四注意事项：万级洁净区所用消毒剂的配制用水为注射用水，十万级洁净区所用消毒剂的配制用水为纯化水。万级洁净区与十万级洁净区盛装消毒剂的容器必须有明显的级别状态标示，禁止不同级别容器交叉使用。配制消毒剂时必须二人复核操作。并及时填写配制记录。配制消毒剂必须戴保护用品，避免烧伤。在指定地点配制消毒剂，避免造成污

10、染。生物制品与检测课件上海农林职业技术学院第17页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四评分标准：生物制品与检测课件上海农林职业技术学院序号项目与技术要求评分比例%检测标准实训记录得分1准备30正确填写领料单2操作20按照SOP正确操作3结果50配制的消毒剂可用第18页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四生物制品与检测课件上海农林职业技术学院任务2、洁净区清洗和消毒学习目标：了解不同级别洁净区清洗和消毒操作SOP；掌握操作方法并学会填写记录。 任务提出：现在要开始进行某种生物制品的生产，需要万级洁净室作为洁净生产车间，要求按照万级洁净区清洁消毒规程进行清洗

11、和消毒，并填写清洗消毒记录。任务分析：首先熟悉万级洁净区清洁消毒规程，列出所需清洁剂及消毒剂，向仓库领取并登记；按照万级洁净区清洁消毒规程进行清洗和消毒。第19页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四知识链接：清洁频率及范围：操作室每天生产前、工作结束后，进行1次清洁、消毒，每天用臭氧消毒60分钟。清洁范围：操作台面、门窗、墙面、地面、用具及其附属装置、设备外壁等。 每星期六工作结束后，进行全面清洁、消毒1次。 清洁范围：以消毒剂擦拭室内一切表面，包括墙面、照明和顶棚。上海农林职业技术学院第20页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四每月，室内空间用臭氧消毒

12、150分钟。根据室内菌检情况或出现异常，再决定消毒频率。倒班生产，两班清洁时间，间距应在2小时以上。更衣室、缓冲间及公共设施，由专职清洁工每日上班后，下班前进行清洁、消毒。 上海农林职业技术学院第21页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四消毒剂及使用方法： 用于消毒表面的有：0.2%新洁尔灭、5%甲酚皂液、75%乙醇溶液。用于空间消毒的有：臭氧。消毒剂使用前，应经过0.22m微孔滤膜过滤。各种消毒剂每月轮换使用。消毒剂从配制到使用不超过24小时。上海农林职业技术学院第22页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四任务实施：一、准备工作领NaCl（50-100

13、PPm）每天用于手消毒领NaCl（200-250PPm）用于洁具和下水道的消毒领75%酒精和NaCl（150-200PPm）用于工器具的消毒领75%酒精用于设备表面的消毒用紫外线对整个洁净区空气和设备表面杀菌消毒上海农林职业技术学院第23页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四二、清洁消毒步骤清洁、消毒方法：先用灭菌的超细布，在消毒剂中润湿后，擦拭各台面、设备表面，然后用灭菌的不脱落纤维的清洁布擦拭墙面和其它部位。最后擦拭地面。操作室每天清洁后，对房间进行臭氧消毒。清洁程序：清洁过程中本着先物后地、先内后外、先上后下、先拆后洗、先零后整的擦拭原则。上海农林职业技术学院第24页

14、，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四清洁效果评价：目检各表面应光洁，无可见异物或污垢。QA对尘埃粒子、沉降菌进行检测，应达到标准。清洁工具的清洁及存放：清洁工作结束后，清洁工具按清洁工具清洁规程清洗、存放并贴挂状态标示。上海农林职业技术学院第25页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四问题思考：为什么各种消毒剂每月轮换使用？上海农林职业技术学院第26页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四任务3、测定模拟洁净区的沉降菌 学习目标：1、了解洁净区沉降菌监测原理；2、熟悉洁净区沉降菌监测标准操作规程(SOP)；3、学会洁净区沉降菌监测操作方法

15、，并会填写填写检查记录。任务提出： 洁净区清洁消毒后，需经过监测，各项指标合格后方可使用。本次任务是对洁净区沉降菌进行监测。上海农林职业技术学院第27页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四任务分析： 采用沉降法，即通过于培养皿中利用自然沉降原理收集在空气中的生物粒子，经不少于48小时的培养，在3035下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度，并做好检查记录。上海农林职业技术学院第28页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四任务实施：一、器材准备 高压消毒锅：使用时严格按照说明书操作。恒温培养箱：

16、必须定期对培养箱的温度计进行检定。培养皿：90mm玻璃培养皿培养基：营养琼脂上海农林职业技术学院第29页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四二、 操作程序采样将已制备好的培养平皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖上后倒置。上海农林职业技术学院第30页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四采样点数目及其布置 沉降菌测试的最少采样点数目可查表1确定。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。上海农林职业技术学院第31页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四表1 最小采样点数目上海农林职业技术学院面

17、积（m2）洁净度级别10010,000100,000300,000102322210204222204082224010016422100200401032注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积；对非单向流洁净室，指的是房间面积。第32页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四表2 最少培养皿数 上海农林职业技术学院洁净度级别所需90mm培养皿数1001410,0002100,0002300,0002第33页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四采样点的位置工作区采样点的位置离地0.81.5m左右（略高于工作面）。 可在关键设备或关键工作活动范围处增

18、加采样点。 上海农林职业技术学院第34页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四培养：1、 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中 培养。2、 在3035培养箱中培养，时间不少于48小时。3、 每批培养基应有对照实验，检验培养基本身是否 污染。 可每批选定3只培养皿做对照实验。上海农林职业技术学院第35页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四菌落计数1、用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后 用510倍放大镜检查，是否有遗漏。2、若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时 仍以2个或2个以上菌落计数。上海农林职业技术学院第36页，共41页，20

19、22年，5月20日，10点44分，星期四注意事项1、 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。2、 采取一切措施防止人为对样本的污染。3、 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。4、 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于 培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长 的菌落，须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要 时用显 微镜鉴别。5、 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破 损或污染的应剔除。上海农林职业技术学院第37页，共41页，2022年，5月20日，10点44分，星期四结果计算 用计数方法得出各个培养皿的菌落数. 平均菌落数的计算：平均菌落数=（M1+M2+Mn）/n 式中