考研微生物x15检验

1、第十一章 微生物与食品安全 食品卫生的微生物学检验 检验内容 细菌总数的测定； 大肠菌群最近似数（MPN）的测定； 病原菌检验；卫生学意义1、污染程度2、保质期3、样品被粪便污染4、肠道病原菌5、食源性疾病病原 注意事项 1、要提前了解有关微生物的特性 2、做好准备工作（培养基、标准菌株及其他材料的准备）； 3、注意无菌操作： 打开任何样品容器之前，在取样开口处的周围表面，必须擦干净，去除会污染样品的物质，用70%酒精擦拭消毒，防止污染。第一节 细菌总数的测定 一、概念/单位：个/mlg(cm2) 是指每克（或每毫升）样品中所含细菌的数量。 二、测定方法（传统SPC法：稀释平板、旋转平板） 稀

2、释平板 （一）样品稀释及倾注平板 1、无菌操作，取试样10克（或10ml）放于含有100ml（如检样为液体则改为90ml）灭菌生理盐水或其它稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内予先放置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，充分振摇或研磨作成1：10的均匀稀释液。 2、用1ml灭菌吸管，吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，作成1：100稀释液。 3、另取1ml吸管，按以上操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释1次，即换用1支1ml灭菌吸管。 4、根据对样品污染情况的估计，选择23个适宜稀释度。分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml

3、稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作2个平皿。 5、稀释液移入平皿内后，即时将冷至4555的营养琼脂培养基（可放置于46水浴保温）倾注平皿约15ml，并移动平皿使混合均匀。 （二）培养 待琼脂凝固后，翻转平皿，置37温箱内培养2448h后取出，计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（或每毫升）样品所含菌落总数。 （三）菌落计数方法 作平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在记下各皿的菌落数后，求出同稀释度的各皿平均菌落数。 1、平皿菌落数的选择：选取菌落数在30300之间的平皿作为菌落总数的测定标准。一个稀释度使用两个平皿时，应采取两个平皿平均数；如其中一个平皿有较大片状

4、菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平皿的一半时，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可计数半个平皿后乘以2代表全皿菌落数。 2、稀释度的选择 应选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表中例1） 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则应视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的数字（见表中例2及3） 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（根据表中例4） 若所有稀释度的平均菌落数均小于300，则应按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释

5、倍数报之（见表中例5） 若所有稀释度的平均菌落均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最近于30或300的平均菌数乘以稀释倍数报告之（见表中例6） 3、菌落数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以4舍5入方法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示（见表中报告方式栏）。三、安全性评价（卫生评定） 根据被检食品（样品）相关标准进行综合评价。 影响因素 1、取样方法； 2、微生物在样品中的分布情况； 3、食品中微生物的特性； 4、食品原料的特性； 5、食品的预检过程； 6、培养基的营养； 7、培养温度和

6、时间； 8、培养基的pH、AW、Eh； 9、稀释剂的类型； 10、其他竞争性或拮抗微生物； 其它方法膜过滤法：0.45微米孔径，水和溶质可以通过，微生物不可通过，将膜在平板上培养，MDC计数，适当染色效果更好。 干燥薄膜计数法：即纸片法，美国3M公司发明，快速出结果；现代方法。 显微直接计数法：涂片染色计数； 表层微生物的检测 擦拭法稀释、平板接触法、黏性薄膜法； 代谢受破坏微生物的培养 亚致死、高温、冷冻、干燥、辐射、抗生素、防腐剂等作用或的细菌，在选择性培地上不生长。在高营养（特别加牛乳、 磷酸盐、酪蛋白、半乳糖等）非选择性培养基上生长。现代食品安全检测。 不可生长的活性微生物 即VBNC

7、状态，主要是弧菌类、沙门氏菌、大肠杆菌。采用直接计数法。 第二节 大肠菌群最近似数（MPN）的测定 一、概念/单位：个/100mlg 大肠菌群系指一群在37 24h能发酵乳糖产酸产气，好氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 二、测定方法 1、样品稀释（同细菌总数测定）； 2、接种乳糖胆盐发酵管（33=9支）； 3、鉴别培养（伊红美兰、远藤氏琼脂）； 4、乳糖复发酵试验； 三、结果报告（按照国标及有关标准） 第三节 病原菌检验 一、检验内容：沙门氏菌、志贺氏菌、葡萄球菌、变形杆菌、副溶血性弧菌等。 二、检验方法：以沙门氏菌为例 1、前增菌； 2、选择性增菌； 3、选择性平板分离； 4、生化试验； 5、血清学反应； 检验程序见下图 注：沙门氏菌因子血清，用于初步