化妆品原料和生产环境中污染菌的检验

1、第一节化装品原料的微生物检验化装品原料种类很多，性能各异，依据其性能和用途，大体上可分为基质原料和添加剂关心原料。基质原料是组成化装品的主体或在该化装品内起主要功能的物质，主要包括 油脂、蜡类、粉类、胶质类、外表活性剂、防腐剂、抗氧化剂等。添加剂是赐予色、香及其他特定作用的物质，大多为自然的含有养分成分或生物活性的物质，这些成分又是微生物生 长生殖的良好养分源，在肯定程度上成为微生物的培育基，因此，检验原料中的微生物很重 要。一、指标菌及特定菌的选择一般原料的微生物指标菌同化装品成品即：菌落总数、粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌。粉类原料大多数是由土壤矿物质加工而成，而土壤受

2、微生物污染 严峻。据资料报道，土壤中的致病菌有需氧的炭疽杆菌和厌氧的破伤风杆菌、产气荚膜杆菌 等，其检出率很高，产气荚膜杆菌几乎达100%，恶性水肿杆菌64%，破伤风杆菌 29%，肉毒杆菌 6%。这些致病菌能在土壤中生存较长时间，例如炭疽杆菌的芽孢能生存15 年之久； 肠道致病菌可生存 100170d；结核杆菌能生存1 年左右；破伤风杆菌芽孢和产气荚膜杆菌也能长期在土壤中生存。在滑石粉、高岭土、碳酸钙等粉类原料中，经常检出枯草杆菌、真菌等，因此，在粉类原料中可增加需氧芽孢杆菌、产气荚膜杆菌和破伤风杆菌指标。在某些 生物性原料如动物内脏及其提取物等可增加沙门氏菌指标。二、样品的预处理依据原料性质

3、的不同，选用相应的预处理方法，如油质类原料可按油性或疏水性油包水化装品处理，粉类原料按粉剂化装品样品处理等。三、检验方法各种微生物的检验方法均与化装品成品检验方法一样，可参见化装品卫生标准中微 生物检验方法。原料与成品微生物检验方法最根本的不同点是检验原料所用的稀释液和培育基中都不含有中和剂卵磷脂和吐温-80。如检验菌落总数用一般养分琼脂培育基，绿脓杆菌增菌培育液可用一般肉汤，金黄色葡萄球菌增菌培育液用含 7.5%氯化钠肉汤，稀释液均用生理盐水。四、培育基1养分琼脂成分：蛋白胨20g琼脂1520g牛肉膏5g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法：将上述成分混合后，加热溶解，调PH 值为 7.47.6

4、,121、20min 高压灭菌， 储存于冷暗处备用。27.5%氯化钠肉汤成分：肉汤100mL氯化钠7.5g制法：将上述两种成分混合均匀，分装，115、20min 高压灭菌。其次节化装品生产用水的微生物检验方法水在化装品的生产中用量极大，是化装品的主要成分之一，水的品质对化装品的质量有着重大影响。化装品生产用水的处理一般承受过滤吸附法、电渗析法、离子交换法等，对生产用水的微生物检测指标有菌落总数、粪大肠菌群、霉菌和酵母菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌。一、菌落总数菌落总数是指水样在肯定条件下养分琼脂培育基，37,24h需氧培育后 1mL 水样中所含菌落数。检验方法介绍如下。以无菌操作灭菌吸管吸取 1

5、mL 充分混匀的水样，加到灭菌的平皿内，注入约15mL已溶化并冷却到 45左右的养分琼脂培育基，并马上旋转平皿，使水样与培育充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注养分琼脂培育基作为空白对 照。待冷却凝固后，翻转平皿，使其底面朝上，置于361培育箱内培育24h,进展菌落计数，即为 1mL 水样中的菌落总数，以CFU/mL报告结果。二、粪大肠菌群粪大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出的，是指一群在 44.5培育 24h 能发酵乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。粪大肠菌群数的凹凸，说明白粪便污染程度，也反映了对人体安康潜在危害性的大小，是评价化装品生产用水卫生质量的

6、重要指标之一。因生产用水的干净度较高，可承受滤膜法检测，马上水样通过孔径为 0.45m 的滤膜过滤，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在MFC 培育基上，44.5培育后，计数典型菌落。MFC 培育基成分：胰胨10g胆盐 3 号Bile salt No.3或混合胆盐1.5g多胨5g酵母浸膏3g琼脂15g氯化钠5g苯胺蓝0.2g乳糖12.5g蒸馏水1000mL配制方法：在 1000mL 蒸馏水中先参加玫红酸10g/L的氢氧化钠溶液c(NaOH)=0.2mol/L10mL, 混匀后，取 500mL 参加琼脂煮沸溶解，于另外 500mL 蒸馏水中，参加除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀调

7、整 PH 值为 7.4,参加苯胺蓝煮沸，快速离开热源， 待冷却至 60左右，制成平板，不行高压灭菌。制好的培育基应存放于210环境下，不超过 96h。EC 培育基成分：胰蛋白胨20g磷酸氢二钾4g乳糖5g磷酸二氢钾1.5g胆盐 3 号Bile salt No.3或混合胆盐1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL配制方法将上述成分溶解于蒸馏水中，115高压灭菌 20min,冷却至 60左右时，倾注平皿，备用。检验方法：滤膜和滤器的灭菌 将滤膜放入烧杯中，参加蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌 3 次，每次15min,前两次煮沸后需更换水洗涤 23 次，以除去残留溶剂；滤器可用点燃的酒精棉球火焰灭菌，也可用

8、高压灭菌。水样过滤 用无菌镊子夹取灭菌滤膜的边缘，贴放在滤床上，固定好滤器，100mL水样，在负 0.5atm(1atm=101.325kPa)下抽滤。将滤膜截留细菌面朝上，贴放在MFC 培育基上中间不得有气泡，将平皿倒置于44.5培育箱中培育 24h。粪大肠菌群菌落为蓝色，非粪大肠菌群菌落为灰色至奶油色。将可疑菌落接种于EC 培育基上，44.5培育 24h,如产气则证明为粪大肠菌群。结果计算粪大肠菌群数CFU/100mL经证明粪大肠菌群菌落数100/过滤的水样体积mL三、霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌广泛分布于自然界中，也可存在于水中，可引起化装品变质发霉，有些霉菌还可产生有毒毒素，所以把握生产用

9、水中的霉菌和酵母菌极为重要。在固体培育基上，霉菌呈放射状生长，孢子有各种颜色；酵母菌在培育基外表多呈圆形 凸起，边缘整齐，外表光滑潮湿，在培育基深部生长的酵母菌多呈铁饼形、三角形或多角形， 在虎红培育基上呈粉红色。检验方法：吸取 1mL 水样、1/10 稀释水样各 1mL,分别注入灭菌平皿中，每个稀释度各用2 个平皿，注入溶化并冷却至 45的虎红培育基，充分摇匀，凝固后倒置于 28培育箱培育 72h, 计数平板内生长的霉菌和酵母菌数，如有霉菌集中生长，可于48h 时将此平板取出计数。计数方法霉菌和酵母菌菌落数CFU/mL：每个稀释度的平均菌落数稀释倍数四、绿脓杆菌检验方法将过滤器和滤膜灭菌备用

10、。过滤 100mL 水样，将截留细菌的滤膜置 90mL 肉汤培育基中，置 37培育 1824h,如有绿脓杆菌生长，培育液多呈黄绿色或蓝绿色，外表有一层薄菌膜。分别培育、染色镜检、氧化酶试验、绿脓菌素试验、硝酸盐复原产气试验、明胶液化试验、42生长试验操作过程可见化装品绿脓杆菌检验方法。结果报告被检水样经增菌分别培育后，经证明为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌 素试验阳性，即可报告被检水样中每 100mL 中检出绿脓杆菌；或绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐复原产气和42生长试验三者皆为阳性时，也可报告被检水样中检出绿脓杆菌； 反之，可报告 100mL 水样中未检出绿脓杆菌。五、金黄色葡萄球菌检验

11、方法将过滤器和滤膜灭菌备用。过滤 100mL 待检水样，将截留细菌的滤膜置于 90mL 7.5% 氯化钠肉汤培育基中， 置于 37培育箱培育 24h。用接种环挑取增菌培育液，划线接种在 Baird-Parker 氏培育基或血琼脂培育基上 ，置 37培育箱培育 2448h。如有典型菌落生长，可进展染色镜检、甘露醇发酵试验、血浆凝固酶试验详见化装品中金黄色葡萄球菌的检验方法。结果报告凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性 葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性，可报告 100mL 水样中检出金黄色葡萄球菌；否则报告 100mL 水样中未检出金黄色葡萄球菌。第三节生

12、产车间空气中的微生物检测化装品生产车间的空气干净度直接关系到化装品的质量，所以建立常规的车间空气质量监测系统，准时进展空气净化，可有效保证化装品到达卫生要求。空气中细菌总数是空气微生物污染最主要的指标菌之一，常用的检测方法有撞击法采样检测和自然沉降法采样检测。一、撞击法承受固体撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力，使空气高速通过狭缝或小孔， 悬浮在空气中的带菌粒子因惯性作用而撞击到培育基平板上，经 37、48h 培育后，计算出每立方米空气中所含的细菌菌落数。所需仪器和设备有撞击式空气微生物采样器及其他检验微生物常用设备。所用培育基为一般养分琼脂培育基。检测步骤选用对空气中细菌捕获率大于95

13、%且性能稳定、便于消毒的撞击式空气采样器。选择有代表性的位置设置采样点，将采样器按操作说明安装、消毒，依据空气污 染状况确定采样量，进展采样。采样完毕后，将带菌平板倒置于 37培育箱内 48h,计数菌落数，依据采样流量和采样时间，换算成每立方米空气中的菌落数，以CFU/m3报告结果。二、自然沉降法自然沉降法是利用空气微生物粒子的重力作用，在肯定时间内将微生物粒子收集到带有培育基的平皿内，在适宜的温度下培育生长成为菌落并进展生物学观看、计数和评价。本方法较撞击法经济简便，不需特别采样器，但此方法的检测结果受空气气流和带菌颗粒大小的影响较大，所收集的只是一局部较大的微生物粒子，采样条件难以把握。检

14、测步骤依据待测空间大小及通风口的位置选择有代表性的点采样，通常设 5 个或 3 个采 样点，采样高度为 1.21.5m,采样点应离墙 1m 以上，并避开空调、门窗等空气流通处。将直径9cm 的养分琼脂平板置于采样点处，翻开皿盖，暴露1030min依据空气的干净度后，盖上皿盖，翻转平板，置于 37培育箱内 48h,计数每皿的菌落数，计算出平均菌落数，以CFU/m3报告结果。此结果不能同撞击法结果换算。第四节化装品生产设备及环境物体外表微生物检验一、生产设备的采样储存罐、灌装机、输送管道等，用灭菌生理盐水棉拭子，在上述设备内侧相对面各25cm2(5cm5cm)面积范围，来回均匀涂抹，并转动拭子，剪

15、去手接触部位后，将棉拭子放入 10mL 生理盐水试管内振打 80 次，依据细菌的污染程度，可作适当稀释，取2mL 分别注入两块平皿，每皿 1mL,倾注一般养分琼脂，置 37培育 48h，进展活菌计数，计算被检设备外表污染细菌的数量，如检验机器的沟缝等处时，将机器拆卸，直接用棉拭子涂抹，涂抹面积可因被检物的外形及大小而定。生产设备外表污染细菌菌落总数CFU/cm2平均菌落数稀释度采样面积cm210凡接触化装品原料和半成品的设备、工具、管道必需用无毒、无害、抗腐蚀材料制作， 内壁应当光滑，便于清洁和消毒。全部生产设备、工具在使用前后应当彻底清洁、消毒。二、操作台采样在台面对角线高两点工人操作处，各 25 cm2 面积，用灭菌生理盐水棉拭子，来回均匀涂抹，并转动拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子放入10mL 生理盐水试管内振打 80 次， 依据细菌的污染程度，可作适当稀释，取2mL 分别注入两块平皿，每皿 1mL，倾注一般养分琼脂，置 37培育 48h，进展活菌计数，计算操作台外表污染细菌的数量。操作台外表污染细菌