抗自身抗体讲稿

1、关于抗自身抗体第一张，PPT共二十一页，创作于2022年6月 背景介绍自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)是严重影响人类健康的疾病之一,可累及人体的各系统、组织和器官,涉及临床各专业学科。自身抗体对疾病诊断、鉴别诊断有重要价值。自身抗体主要检测方法： 间接免疫荧光法、 ELISA、 免疫印迹 等多种方法首都医科大学附属北京佑安医院第二张，PPT共二十一页，创作于2022年6月目前自身抗体检测普遍问题间接免疫荧光法（IFA)：操作技术水平要求较高、仪器试剂要好，有一定局限性。ELISA法：多以手工操作为主，全自动酶联分析仪检测技术应用不普遍；检测结果存在较大的不一致性；

2、迫切需要解决检测的系统化和规范化问题。国产自身抗体检测ELISA试剂：上市时间较短；许多缺乏大规模临床应用质量评价；其正常参考区间以及对临床疾病诊断的灵敏度和特异性等还缺乏大规模的经临床验证的可靠数据。第三张，PPT共二十一页，创作于2022年6月原发性胆汁性肝硬化 Primary Biliary Cirrhosis, PBC 多发于中年女性； 慢性胆汁淤积表现：ALP和-GT升高AMA(9095%)、AMA-M2阳性； 肝内胆小管进行性非化脓性炎症； 肉芽肿性破坏，并进行性胆管消失；熊去氧胆酸可以显著改善生化指标肝纤维化、肝硬化最终肝衰竭。首都医科大学附属北京佑安医院第四张，PPT共二十一页

3、，创作于2022年6月 抗-AMA-M2对PBC具有明确的疾病诊断意义，而且具有较高的疾病特异性，问题：抗-AMA-M2阳性也常见于其他肝病或干燥综合征等自身免疫性疾病，或者出现检验结果时阴时阳，给临床诊断与鉴别诊断带来困惑。原因可能有多种： 临床： 如HCV/HBV合并自身免疫病；自身免疫现象 检验： 检测试剂的特异性、标准化； 项目本身的参考区间是否合适等第五张，PPT共二十一页，创作于2022年6月 乙肝患者的自身免疫异常表现肝外病理体征例数（%）感觉运动神经病变10 (5)肌肉痛6 (3)肾小球肾炎5 (3)关节痛5 (3)干燥综合征6 (3)雷诺综合征3 (2)葡萄膜炎3 (2)Ca

4、coub,et al J.Hepatol.,43:764 (2005)自身抗体例数（%）SMA14 (7)ANA6 (3)Nucleosome4 (2)Cryoglobulineamia3 (2)LKM-13 (2)SLA0 (0)AMA0 (0)全世界4亿HBV感染者中，约20%的患者出现肝外临床症状体征。结节性多动脉炎（PAN）和膜性肾小球肾炎最严重最受关注。对190名慢性乙肝患者肝外病理体征（包括自身免疫疾病）和自身抗体的研究表明，两者的阳性率（至少一项阳性）分别达到16%和15%。第六张，PPT共二十一页，创作于2022年6月83例肝癌患者自身抗体检出率 组别 例数 自身抗体阳性 AN

5、A CS SMA AMA A 组 64 23（35.9） 16(25.0) 8(12.5) 5(7.8) 3(4.7) B 组 16 8（50.0） 4(25.0） 3(18.8) 3(18.8) 1(6.3) C 组 3 0 0 0 0 0 合计 83 31(37.3） 20(24.1） 11(13.3) 8(9.6) 4(4.8) A: HBV肝癌; B: HCV肝癌; C:其他原因肝癌HBV/HCV组自身抗体检出率差异无统计学意义。 赵海琳.闫惠平等，中国免疫学杂志2010, 26:1127第七张，PPT共二十一页，创作于2022年6月建立抗-M2 ELISA系统化检测方法仪器：ADC

6、ELISA 400流水线式 全自动酶联免疫工作站试剂：抗M2型线粒体抗体检测试剂盒 (上海科新生物技术股份有限公司)检测范围：25-800RU/ml；阴性25RU/ml。研究方法和试剂第八张，PPT共二十一页，创作于2022年6月 研究内容与方法一、全自动酶联免疫工作站系统重复性和精密度的评估。1）对阴性、弱阳性、中阳性和强阳性4种不同浓度的样品各一例进行复孔检测；重复以上检测6次。以评价该检测方法的精密度和重现性。计算每一个样品的CV值。 2）设备单通道、多通道针对不同浓度样本、不同取样量的结果均一性的评价。第九张，PPT共二十一页，创作于2022年6月 研究内容与方法二、不同疾病组标本的检

7、测结果和临床意义初步评价研究对象：PBC 组 112例 HBV组 77例 NC 组 78例 合计 267例首都医科大学附属北京佑安医院第十张，PPT共二十一页，创作于2022年6月1全自动酶联免疫工作站系统重复性和精密度的评估 在6次重复检测中，分别对阴性（OD=0.032）、弱阳（OD=0.389）、中阳、（OD=0.752）和强阳（OD=2.027）4例不同抗体浓度的样品各一份进行复孔检测，以评价该检测方法的精密度和重现性。表1：不同浓度检测样本的SD和CV值阴性弱阳性中阳性强阳性SDCV（%）SDCV（%）SDCV（%）SDCV（%）组内0.01340.0250.01320.074组间0

8、.01340.0130.01550.052 结果第十一张，PPT共二十一页，创作于2022年6月结果2、 ADC ELISA 400设备单通道、多通道针对不同浓度样本、不同取样量的结果均一性比较：CV均5%；表明该设备的稳定性和重复性好。第十二张，PPT共二十一页，创作于2022年6月结果-3抗AMA-M2抗体在不同疾病组检测结果和评价3组别例数抗AMA-M2抗体N阳性数（例）阳性率（）PBC11210089.3HBV感染者7745.2正常对照组7845.1合计267108 40.4 表2: 抗AMA-M2抗体在不同分组中的阳性率 第十三张，PPT共二十一页，创作于2022年6月不同疾病组中抗

9、AMA-M2阳性浓度值的分布第十四张，PPT共二十一页，创作于2022年6月高通量ELISA检测抗M2抗体对于PBC诊断的敏感性 （sensitivity）为89.3%。抗M2抗体对于PBC诊断的ROC曲线见图1，曲线下面积（area under curve, AUC）为0.980。 图1、抗M2抗体对于PBC诊断的ROC曲线2第十五张，PPT共二十一页，创作于2022年6月 结果-4 抗 AMA-M2 手工法与ELISA仪器法的比较评价第十六张，PPT共二十一页，创作于2022年6月 结果-4 抗 AMA-M2 冻存与新鲜样本ELISA仪器法的比较评价第十七张，PPT共二十一页，创作于2022年6月 本研究的认识国产全自动酶联免疫工作站系统重复性和精密度的评估：加样稳定性、重复性均好。组内组间差异均较小。与国产试剂配套应用与临床常规，抗AMA-M2检测结果与疾病的符合率达到以往国内外的报道。全自动酶联免疫法可以达到系统化、标准化，弥补手工法的一些缺陷。第十八张，PPT共二十一页，创作于2022年6月 本研究的认识系统化检测使PBC与病毒性肝炎在检测数值上有了明显差异，期待有助于疾病的鉴别诊断。下一步：国产全自动酶联免疫工作站检测标准化不同试剂间同样单位值有无可比性？扩大病种病例观察检测数值对临床诊断与鉴别诊断价值？ELISA系统化与免疫