高效液相色谱法简单的

1、高效液相色谱法简单的2022/9/8第1页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四液相色谱是以液体为流动相的色谱分析方法。英文缩写：LC。按其固定相的不同，又可分为液固色谱（LSC）和液液色谱（LLC）液相色谱简介2022/9/8第2页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四 气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。 现在，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位居色谱法之首。在所有色谱技术中，液相色谱法是最早（1903年）发明的，但其初期发

2、展较慢，在液相色谱普及之前，纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流。到了20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。液相色谱的发展2022/9/8第3页，共14页，2022年，5月20日，

3、20点34分，星期四液相色谱的分类 广义地讲，固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相，也应归于液相色谱法。不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法。通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。2022/9/8第4页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四类 型主要分离机理主要分析对象或应用领域吸附色谱吸附能，氢键异构体分离、族分离，制备分配色谱疏水分配作用各种有机化合物的分离、分析与制备凝胶色谱溶质分子大小高分子分离，分子量及其分布的测定离子交换色谱库仑力无机离子、有机离子分析离子排斥色谱Donnan膜平

4、衡有机酸、氨基酸、醇、醛分析离子对色谱疏水分配作用离子性物质分析疏水作用色谱疏水分配作用蛋白质分离与纯化手性色谱立体效应手性异构体分离，药物纯化亲和色谱生化特异亲和力蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析表51 液相色谱分类返回2022/9/8第5页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四液相色谱仪（1）2022/9/8第6页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四液相色谱仪（2）2022/9/8第7页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四液相色谱仪（3）2022/9/8第8页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四液相色谱仪（4）

5、2022/9/8第9页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四一、高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2022/9/8第10页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四二、流程及主要部件1.流程2022/9/8第11页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四2.主要部件(1) 高压输液泵主要部件之一，压力：1535106 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可

6、调、耐腐蚀等特性2022/9/8第12页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。返回2022/9/8第13页，共14页，2022年，5月20日，20点34分，星期四应用领域分析对象举例环境常见无机阴阳离子、多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害重金属及其形态、除草剂、农药、酸沉降成分。农业土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有机成分。化工无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、化妆品、染料。食品无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃。生物氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核