应用人巨细胞病毒核酸扩增反应对复方黄芪颗粒治疗感染人巨细胞

1、应用人巨细胞病毒-核酸扩增反响对复方黄芪颗粒治疗感染人巨细胞【关键词】应用摘要：目的应用人巨细胞病毒-核酸扩增HVPR反响讨论中药复方黄芪颗粒对感染HV小鼠治疗作用。方法用小鼠尾静脉染毒法建立HV全身获得性感染模型，并用复方黄芪颗粒给小鼠灌胃治疗，然后应用HVPR反响测定其内脏HVDNA阳性率。结果复方黄芪颗粒42.0，21.0g/kg组HVDNA阳性率明显低于模型组P0.05。结论复方黄芪颗粒对感染HV小鼠有一定的治疗作用。关键词：人巨细胞病毒-核酸扩增HVPR；复方黄芪颗粒；人巨细胞病毒；人巨细胞病毒感染小鼠模型EvaluatinfurativeEffetfRadixAstragaliGr

2、ainSallRatutreatingHuanytegalvirusInfetininiebytheHV-PRRespndAbstrat：bjetiveTstudytheurativeeffetfradixastragaligrainfhineseherbalediinepundpresribenrightinfetinHVbyHVPRrespnd.ethdsDyethepisnethdtestablishtheHVhlebdytaquireithvEinfietailsexydyethedel,andunterattheradixastragaligrainfpundpresribetthe

3、ierespetivelythetreatent,thenapplytheHVPRtrespndteasuresethealeratefHVDNAfitsinternalrgans.ResultsRadixastragaligrainfpundpresribe42.0g/kg，21.0g/kgaleratefHVDNAfsetsesbviuslyarriveinthedelset(P0.05).nlusinTheradixastragaligrainfpundpresribetreatentinfetinHViehadertainlyfuntin.Keyrds：HV-PR;Radixastra

4、galigrain;Huanytegalvirus;SallratdelfHVinfetin人巨细胞病毒Huanytegalvirus,HV感染非常普遍。在妇产科，妊娠妇女孕早期原发HV感染可造成流产、早产、死胎、畸形，宫内生长缓慢、智力低下及听力损害等。目前，尚无对妊娠期HV活动性感染平安有效的治疗方法。本研究首次采用小鼠尾静脉染毒法建立HV全身获得性感染模型，并进展了复方黄芪颗粒对感染小鼠体内研究，应用HVPR测定，证实黄芪颗粒组HVDNA阳性率明显低于模型组。现将本研究结果报道如下。1材料1.1标本搜集和处理选取60只雄性小鼠，1822g，共分6组，每组10只，分别为复方黄芪颗粒大、中、

5、小剂量组，阴性对照组，模型病毒组和阳性对照组。均采用小鼠尾静脉注射HV10-1，每只0.1l,阴性对照组注射0.9%生理盐水，每只0.1l，于染毒第2天开场治疗。大剂量组42.0g/kg，中剂量组21.0g/kg，小剂量组10.5g/kg，阴性对照组及模型病毒对照组均给蒸馏水，上述各组给药途径为灌胃，每天每只0.5l，阳性对照组更昔洛韦，实验完毕时，取主要脏器做HVPR。1.2HVPR引物按文献1，由山东省医科院生物医学研究中心合成并纯化，引物序列：上游引物为5-GATGAATTGTTAAG-3，下游引物为5-GGAGTATGTGATGGGA-3。2实验方法PR检测标本中HV-DNA片段，每次

6、扩增均设标准阳性和阴性对照。PR体系25l,其中含10PR缓冲液2.5l，2.5lL-1dNTP21l,上下游混合物各10lL-11.5l，TaqDNA聚合酶1l，标本处理后取10l提取物，无菌蒸馏水加至25l，覆以30l无菌石蜡油。反响按941in，561in,711in,40个循环，最后于72保温10in，扩增物经2%琼脂电泳，溴乙淀染色，紫外灯下检测荧光条带，与阳性模板同一位置即为阳性。产物长度151bp。转贴于论文联盟.ll.3结果上述结果说明，黄芪颗粒组HV-DNA阳性率明显低于模型组，与模型组比拟有明显差异P0.05，与阴性对照组相近，小剂量组与模型组相比虽无统计学意义，但其阳性率

7、明显低于模型组。结果见表1，图12。表1复方黄芪颗粒对感染HV小鼠HV-DNA影响组别略4讨论诊断HV感染主要依靠实验室检查。利用特异抗HV单克隆抗体的免疫组化技术，从病毒别离培养、病变组织、脱落细胞及外周血中直接检测到HV抗原，提示存在活动性HV感染，是诊断HV感染可靠的根据。因受灵敏度限制，检测HV抗原的免疫组化技术尚难于检出微量存在的病毒抗原，不能满足临床诊断要求，进步其灵敏度亟待解决3。原位免疫PR技术2，可用于检测微量存在的抗原，极大地进步了免疫组化检测的敏感性，我们利用其根本原理,建立了检测HV抗原的原位免疫PR方法,用于诊断活动性HV感染。研究结果说明，本法检测HV感染的小鼠内脏

8、组织细胞，可在感染后8h明晰地检出阳性信号，与常规免疫组化相比阳性信号强，阳性细胞数多，显示高敏感度。HV感染细胞后可在细胞核内表达即刻早期、早期和晚期蛋白，即刻早期、早期蛋白通常在病毒复制前即可产生，其存在提示病毒呈活动状态4。本法采用pBV220质粒DNA片段作为指示元件DNA，它是与人基因组无关的DNA片段，与HV-DNA序列也无同源性。在检测中平行设置的阴性对照(正常小鼠内脏组织细胞、不加抗HV单抗),无阳性信号出现。同时我们用本法检测了搜集到的5例因感染HV小鼠内脏组织标本，也呈阳性染色。且黄芪颗粒组HV-DNA阳性率明显低于模型组，与模型组比拟有明显差异P0.05，与阴性对照组相近，小剂量组与模型组相比虽无统计学意义，但其阳性率明显低与于模型组，显示本法有较强特异性。本研究成功地将原位免疫PR技术应用于HV感染小鼠模型诊断，显著进步了HV感染诊断敏感性，为中药复方黄芪颗粒治疗HV感染疗效评价提供重要的参考根据。参考文献：1AlainS.Transplanatin,1997，63:1533.2张波，董荷，陆哲明，等.进步免疫组织化学敏感性的原位免疫聚合酶链反响技术J.中华病理学杂志，1995,24(3):182.3董永绥.继续深化进展巨细胞病毒感染的研究J.中华儿科杂志,1995,33(1):34.4GaetaA,Nazzari,Angelettis,etal.nitr