过敏原检测方法分析课件

1、过敏原检测方法分析过敏原检测方法分析2022/9/10Name of presentation2临床常见过敏性疾病有过敏性鼻炎、哮喘、荨麻疹、湿疹、食物过敏及过敏性休克等。近年来，过敏性疾病的发病率呈上升趋势，国内医学界对这种疾病日益重视，其实验室诊断也得到充分发展。2022/9/4Name of presentation4临过敏性疾病研究的历史20世纪人们用动物抗血清治疗烈性传染病时发现 “血清病”1906年奥地利医生Clemens von Pirquet发表“Allersie”(变态反应)一文，开拓了变态反应临床和实验研究新领域1963年Gell及Coombs根据变态反应病的机理和特点，将

2、其分为四型1966年石坂夫妇发现了速发型变态反应中的IgE抗体1967年Johansson从骨髓瘤病人中分离到纯化的IgE并进行了其分子结构的研究过敏性疾病研究的历史过敏原检测方法分析通常过敏性疾病是由IgE介导的I 型变态反应所涉及的疾病也有例外，比如一些药物（如多粘菌素、吗啡、某些造影剂或阿斯匹林）引起的过敏性休克。IgE通常过敏性疾病是也有例外，比如一些药物（如多粘菌素、吗啡、某型变态反应的特点是反应迅速、强烈、消退亦快，通常不遗留组织损伤，也称为速发型超敏反应有明显的个体差异及时令性。好发于呼吸、消化、皮肤等系统。特征性病理变化以水肿，分泌物增多，平滑肌痉挛，嗜酸细胞增多为主型变态反应

3、的特点是反应迅速、强烈、消退亦快，通常不遗留组织过敏性疾病的触发因素 -过敏原（变应原）过敏性疾病的触发因素 -过敏原（变应原）过敏性疾病常见的过敏原包括：药物（如引起过敏性休克的青霉素类、多粘菌素、吗啡、某些造影剂或阿斯匹林）粉尘螨、真菌（如曲霉属和青霉属的霉菌、以及交链孢霉和枝孢霉等）花粉（包括蒿属、豚草、树、牧草和杂草的花粉）、其他吸入过敏原（如引起哮喘的蚕丝、皮毛、羽毛、屋尘）食物（如引起食物过敏的牛奶、鸡蛋、花生、豆类、坚果、鱼、虾、肉类、贝类和谷物）化工材料（如造成接触性皮炎的油漆、甲醛、乳胶、香料和染料等）过敏性疾病常见的过敏原包括：过敏性疾病的临床诊断临床症状、病史体检及临床试

4、验实验室检查过敏性疾病的临床诊断临床症状、病史父母双方均有变态反应病者，或父母一方有变态反应者，子代患变态反应的机率较高父母双方均无变态反应病者，子代的发病机率少，一旦发病，临床表现较轻，持续时间较短过敏的发生与后天的环境关系同样非常密切，变态反应的临床表现并不一定符合遗传规律。过敏体质是导致变态反应的内因父母双方均有变态反应病者，或父母一方有变态反应者，子代患变态过敏进程食物过敏和特应性皮炎在出生早期发病率较高，而呼吸道过敏性疾病在儿童期发病率较高。伴随着儿童年龄增长，过敏性疾病的表现会发生阶段性变化，各系统次序出现不同的过敏症状，此现象被称为“过敏进程”过敏进程食物过敏和特应性皮炎在出生早

5、期发病率较高，而呼吸道过过敏性疾病的临床症状以一个典型的顺序 出现在儿童期，并持续数年的自然进程过敏进程Eugene G Weinberg, MB ChB. The allergic march. CME 2010; 28(2).过敏性疾病的临床症状以一个典型的顺序过敏进程Eugene GProgression of the allergic marchEugene G Weinberg, MB ChB. The allergic march. CME 2010; 28(2).Progression of the allergic ma明确过敏原，阻止过敏进程 Eugene G Weinber

6、g, MB ChB. The allergic march. CME 2010; 28(2).儿童早期，明确过敏原，进而规避过敏原，可阻止过敏进程，改善患儿生活质量明确过敏原，阻止过敏进程 Eugene G Weinber特应性变应原及可能诱因的回避是治疗的基本原则如何明确过敏性疾病的过敏原？特应性变应原及可能诱因的回避是治疗的基本原则如何明确过敏性疾过敏性疾病的诊断详细的病史体检及临床试验过敏性疾病的诊断详细的病史家族过敏史既往过敏史既往发生过敏时的临床表现季节和室内/外变化疑似过敏原种类、接触频率、接触量、接触时间生活环境、工作环境、精神压力的影响其它因素询问病史家族过敏史询问病史体内试验

7、贴斑试验（patch test ）点刺试验（prick test ）或挑刺试验（puncture test ）皮内试验（intradermal test 或 intracutaneous test ）眼结膜试验（conjunctiva test） 鼻粘膜激发试验（nasal mucosa provocation test）或抗原鼻内滴入试验（灌输测试）体内试验贴斑试验（patch test ）舌下试验（sublingual test ） G.Pfeiffer 数十年一直用此法进行诊断食物激发试验（food provocation test ） ，亦称为白细胞减少指数试验舌下试验（subling

8、ual test ） G.Pfeif其他检查影像学诊断：包括胸部透视和摄片、支气管造影、鼻窦X线摄影、胃肠造影、B超、CT、核磁共振等。治疗性诊断：某些病例经各种检查仍无法确认时，可使用对变态反应有良效的药物（如肾上腺素、2 受体兴奋剂、抗组织胺类药物及肾上腺皮质激素类药物等），进行试探性治疗。其他检查影像学诊断：包括胸部透视和摄片、支气管造影、鼻窦X线特异性IgE测定有时也称为“过敏原测定”特异性IgE的检测主要是酶免疫分析根据标记酶指示底物的不同分为：荧光酶免疫分析（如ImmunoCAP）、发光酶免疫分析（如Immulite和Access）酶联免疫吸附剂测定（ELISA）。特异性IgE测定

9、有时也称为“过敏原测定”体内试验和体外试验的比较体内试验和体外试验的比较 皮肤实验结果解释如果病史提示敏感性 还有皮肤实验结果阳性 然后与抗原相关的可能性极强如果病史不提示敏感性 皮肤实验结果阳性 在高强度的自然暴露中观察患者病史提示敏感性 皮肤实验结果阴性 1 回顾患者用药情况，抗组胺、抑郁药 2回顾其他引起假阴性实验原因如： 劣质的实验材料和技术不恰当 3在高强度自然暴露中观察患者 4 进行激发试验（很少做） 帕特深 变态反应性疾病 人民卫生出版社 2004 皮肤实验结果解释如果病史提示敏感性sIgE 体外检测和皮试的比较 不受患者皮肤条件的影响 不受患者药物治疗的影响 不受操作者技术的影

10、响 符合WHO标准sIgE 体外检测和皮试的比较 不受患者皮肤条件的影响ImmunoCAP 全自动 、体外过敏原特异性IgE检测、全定量血液测定检测原理：荧光酶联免疫分析法 FEIA荧光酶底物比显色底物的灵敏度高10-1000 倍。ImmunoCAP 全自动 、体外过敏原特异性IgE检测、ImmunoCAP固相载体抗原吸附能力是纸片法的3倍；是试管法的150倍。ImmunoCAP固相载体抗原吸附能力是纸片法的3倍；是试管ImmunoCAPTM全面的检测项目总IgE 特异性IgE嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 ECP（评估气道炎症状态） IgG & IgG4（评价特异性免疫治疗的反应）类胰蛋白酶（严重过

11、敏反应的标记物）自身免疫性疾病诊断 过筛试验 单价S-IgE检测 多价S-IgE检测 组分过敏原诊断ImmunoCAPTM全面的检测项目总IgE 过筛试验总IgE（Total IgE )IgE是介导 I 型变态反应的抗体，血清IgE水平升高提示机体可能患有变态反应性疾病。但是，总IgE不一定是过敏， 过敏者总IgE也不一定高，过敏与否主要取决于sIgE的存在。影响总IgE的因素 遗传、年龄、性别、种族 吸烟、寄生虫感染测定患者血清中总IgE抗体的含量总IgE（Total IgE )IgE是介导 I 型变态反应特异性IgE（Specific IgE, SIgE）如果对某种过敏原过敏，血清中便存在

12、针对该过敏原的S-IgE 。 单价S-IgE检测 多价S-IgE检测 过筛试验 常见的单价S-IgE d1 户尘螨 d2 粉尘螨 i6 蟑 螂 f1 鸡蛋白 f2 牛 奶 常见的多价S-IgE mx1（m1,m2,m3,m6） mx2（m1,m2,m3,m5,m6,m8） hx2 （h2,d1,d2,i6） 过筛试验吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop） 食物过敏原过筛试验（Fx5） 儿童吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop Infant）特异性IgE（Specific IgE, SIgE）如果对某草类花粉： w6（艾蒿） w22（葎草）树木花粉： t11（梧桐）螨类： d1（屋尘螨）

13、 d2（粉尘螨）微生物： m6（交链孢霉）动物皮毛： e1（猫毛皮屑）食物： f1（蛋白） f2（牛奶）屋尘： h1昆虫/毒液：i6（蟑螂）药物： c1（青霉素G）职业性过敏原等：k82（乳胶）超过600种的过敏原和80种以上的组分过敏原草类花粉： w6（艾蒿） w22（葎草）超过600种的过敏特异性IgE（sIgE）结果判断检测范围：0.35 100 kUA/l高灵敏度：89%高特异性：91% 定量结果分级标准及临床意义：0级 100 特别严重之过敏特异性IgE（sIgE）结果判断检测范围：0.35 10全定量检测特异性IgEImmunoCAPL. Soderstrom, G. Lilja,

14、 M. P. Borres, and C. Nilsson。Allergy 2011; 66: 10581064.全定量检测特异性IgEImmunoCAP过筛试验 吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop） 食物过敏原过筛试验（Fx5） 儿童吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop Infant）过筛试验 吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop）Phadiatop吸入性过敏原过筛试验 含有95%常见吸入性过敏原 筛查是否吸入性变应原过敏 临床准确率 90% 21项研究，超过2700个病例 灵敏度91% 特异度93% 准确率92%Reference: Eriksson NE. Allergy

15、1990;45:285-292 Crobach M.J. et al. Allergy 1994;49:170-176Phadiatop吸入性过敏原过筛试验 含有95%常见吸入 包括6种最常见的食物变应原 鸡蛋白、牛奶、小麦、花生、大豆、鱼 检测结果直接、客观 高灵敏度：89 高特异度：96Fx5食物过敏原过筛试验Fx5食物过敏原过筛试验如何过筛过敏性疾病 推荐的检测组合 TPF： T-IgE + Phadiatop + Fx5如何过筛过敏性疾病 推荐的检测组合 TPF： T-IgE 过敏原检测流程临床病史Phadiatop阳性螨、宠物、真菌系列三个花粉系列IgE检测T-IgE+Phadiat

16、op+fx5过敏原检测流程临床病史Phadiatop阳性螨、宠物、真菌系过敏原检测流程临床病史fx5阳性分别测定单价特异性IgE食谱分析T-IgE+Phadiatop+fx5过敏原检测流程临床病史fx5阳性分别测定单价特异性IgE食谱ImmunoCAPTM系统 体外过敏原诊断金标准 检测结果真实、可靠，重复性好；为临床提供客观的实验室指标 灵敏度高，特异性好；减少漏诊、误诊 全自动化，减少实验工作量，提高检测效率 检测结果全定量，指导临床脱敏治疗和儿童早期诊断 完善的检测项目，600多种过敏原和80多种组分过敏原，充分满足临床和科研需要 ImmunoCAPTM系统 体外过敏原诊断金Diagno

17、sis and Identification of Causative AllergensConfirmation of allergy and identification of causative allergens are crucial to correctly manage allergic diseasesPrecise diagnosis allows the implementation of therapies oriented to the etiologic factors of allergic diseases, such as environmental measu

18、res and immunotherapy WAO White Book on Allergy2011-2012: Executive SummaryDiagnosis and Identification oDiagnosis begins with a detailed medical history and physical examination.The identification of a temporal association between symptoms and allergen exposure constitutes the basis for further tes

19、tingDiagnosis begins with a detailClinical suspicion is confirmed by means of investigation of IgE antibodies in vivo (skin tests) or in vitro.Skin tests should include relevant llergens and the use of standardized allergen extracts.In vitro testing is especially useful when skin test results do not

20、 correlate with the history or cannot be performed.Clinical suspicion is confirmeIn vitro tests can be applied to “probability of disease” prediction in food allergy.There is a need for increased accessibility to allergy diagnosis and therapies and improved diagnostic methodologies that can substitu

21、te in vivo provocation tests for drug and food allergy.In vitro tests can be applied The use of unproven tests increases the unnecessary costs of allergy diagnosis.使用未经证实的测试增加了不必要成本过敏原的诊断过敏原检测方法分析IgE与过敏性疾病IgE是血清中含量最少的一类免疫球蛋白，占血清总量的0001%。致敏阶断，过敏原作用于机体，机体产生过敏原特异性IgE；当机体再次接触到过敏原时，过敏原特异性IgE抗体与过敏原结合，并且与肥

22、大细胞、嗜碱性粒细胞等结合，使其释放组胺等生物活性物质，进而产生过敏症状。IgE与过敏性疾病IgE是血清中含量最少的一类免疫球蛋白，占所以，特异性IgE介导了过敏反应的发生只有特异性IgE检测才能认为是过敏原的体外诊断IgE检查具有高度的抗原特异性，如出现阳性反应，表示对该物质过敏所以，特异性IgE介导了过敏反应的发生 体外过敏原测定方法及检测系统非IgE检测 生物共振（百康，摩拉）过敏原特异性IgE检测 荧光酶联免疫法（ImmunoCAP） 液相酶联免疫法ELISA（ Adaltis） 酶联免疫印迹法（Allergyscreen） 酶联免疫捕获法（Dr. Fooke） 体外过敏原测定方法及检测系统非IgE检测非IgE检测生物共振 百康生物共振技术，通过红外扫描检测过敏原不是直接检测体内的IgE抗体检测结果为定性据称可检测上百种过敏原检测结果未通过WHO标准案不受学术支持的过敏原检测产品非IgE检测生物共振 百康生四种检测仪器性能比较 -检测原理与参数ImmunoCAPAdaltis敏筛Dr.Fooke备注检测原理荧光酶联免疫法液相酶联免疫法酶联免疫印迹法酶联免疫捕获法？检测底物荧光底物显色底物显色底物显色底物荧光法的灵敏度是显色法的101000倍抗原载体ImmunoCAP专利载体微孔板（试管法）硝酸纤维