备课资料：动物细胞细胞培养vero细胞及CHO细胞的特性

1、动物细胞细胞培养vero细胞及CHO细胞的特性在接种疫苗的时候很多人会发现疫苗上标注着vero细胞，对此很多人都不甚了解，只知道自己接种的是灭活疫苗，却不知道其中的意思与原理。也有的重组新冠病毒疫苗是用CHO细胞来生产。这些细胞的学习对新教材选择性必修3有一定的帮助。新冠疫苗vero细胞的原理是什么？CHO细胞的特性有哪些？试题解析试题：基于哺乳动物细胞表达的基因工程制药行业在最近10年发展迅速，其中构建稳定表达细胞株是最重要的环节，常见过程为：获得目的基因一将目的基因导入宿主细胞初步筛选扩增单克隆化筛选驯化工业生产。回答下列问题：（1）如果该目的基因的序列是未知的，我们可以建立一个 ，然后在

2、这里面寻找到要研究的目的基因。（2）为了实现工厂化生产蛋白质类药物，常用CHO细胞（中国仓鼠卵巢的建株纤维母细胞）作为哺乳动物表达系统的宿主细胞，这种细胞应该具有 能力，从而可以反复传代使用。为了得到CHO细胞，可以直接将组织从机体中取出后立即进庁细胞、组织培养，当细胞从组织块中迁移出来，形成 并增大后，再传代培养。（3）利用“裹有重组质粒的脂质体与动物细胞融合”、“病毒浸染细胞”是将目的基因导入动物细胞的两种常用方法，前者所用的脂质体结构上由 分子构成，后者不能用噬菌体的原因是 。（4）对细胞进行单克隆化培养时，培养基中往往需要添加血清、激素、滋养细胞等，这些措施的目的是 。确定生产用的细胞

3、株后，需要对细胞驯化使其适应生产规模下的培养条件，工业生产使用的培养基大多是无血清培养基，这对生物制品的好处有 。答案：（1）基因文库（2）无限增殖 生长晕（3）双层磷脂 噬菌体不能侵染动物细胞（4）提高细胞克隆形成率 有利于生物制品的纯化解析：（1）如果该目的基因的序列是未知的，我们可以建立一个基因文库，然后在这里面寻找到要研究的目的基因。（2）常用CHO细胞可以反复传代使用，故应无限增殖，为了得到CHO细胞，可以直接将组织从机体中取出后立即进行组织培养，当细胞从组织块中迁移出来，形成生长晕并增大后，再传代培养。（3）脂质体是由双层磷脂分子构成，噬菌体是专一侵染大肠杆菌的病毒，不能侵染病毒。

4、（4）对细胞进行单克隆化培养时，培养基中往往需要添加血清、激素、滋养细胞等，这些措施的目的是提高细胞克隆形成率，确定生产用的细胞株后，需要对细胞驯化使其适应生产规模下的培养条件，工业生产使用的培养基大多是无血清培养基，这样有利于生物制品的纯化。新冠疫苗vero细胞在接种疫苗的时候很多人会发现疫苗上标注着vero细胞，对此很多人都不甚了解，只知道自己接种的是灭活疫苗，却不知道其中的意思与原理。vero细胞新冠疫苗vero细胞：新型冠状病毒肺炎灭活疫苗（vero细胞）是一种可以用于预防新冠病毒的疫苗，也就是说其可以预防由新型冠状病毒感染引起的疾病（COVID-19）。而vero细胞是一种异倍体细胞

5、，其指的是非洲绿猴肾细胞，是经猕猴肾细胞培养衍化后产生的，和著名的Hela细胞系、犬肾细胞（MDCK细胞）一样是常用的细胞系。vero细胞可以用于检查大肠杆菌毒素、作为培养病毒的细胞宿主，并作为真核寄生虫的宿主细胞。之所以选择vero细胞来来生产病毒，是因为其具有容易培养、传代稳定、且可以无限分裂的能力，因此vero细胞被用于很多疫苗的生产之中。新冠疫苗vero细胞的生产原理：新冠灭活疫苗生产的第一步就是需要繁殖出大量的新冠病毒，被分离出来的新冠病毒毒株会被送到疫苗生产车间进行繁殖，而vero细胞被用来作为病毒大量繁殖的基质。新冠疫苗vero细胞的原理实际上是将培养扩增的活病毒，灭活以后经过系

6、列纯化技术，进而制备而成的疫苗。灭活主要特点免疫应答强，而且具有良好的安全性和稳定性，所以在运输上很方便。其采用的是两针免疫程序，两针之间间隔是大于28天，不少于56天。新冠疫苗CHO细胞CHO细胞Chinese hamster ovary cell，一个转化细胞系，1957年从中国仓鼠卵巢细胞得到，是一种实验室常见的贴壁细胞系，广泛用于生物制品的表达。CHO的研究简史：1919年，北京协和医学院的E.T.Hsieh博士，在进行肺炎球菌感染研究时，一时找不到实验室小鼠，便到北京郊外抓了一些中国仓鼠（Chinese hamsters）带到实验室做动物模型。1924年，在协和工作的Jocelyn

7、Smyly与同事Charles Young发现中国仓鼠可以非常容易地制备寄生虫感染模型，如黑热病等。1928年，协和医学院的Marshall Hertig运送了150只中国仓鼠到哈佛医学院，希望建成一个品系，但驯养失败了。1943年，Guido Pontecorvo在低倍显微镜下观察中国仓鼠，他只发现了14条染色体（实际为2n=22），比起其它常用的实验动物（小鼠的40条和大鼠的42条）要少，这使得中国仓鼠成为一个很好的研究染色体的对象。1987年，基因泰克公司的tPA(抗凝血药)被FDA批准，这是第一个CHO细胞表达的上市药品。从这时开始，CHO细胞作为哺乳动物蛋白表达系统全面走入制药行业。

8、CHO细胞大规模培养技术及其生物反应器工程可广泛应用于抗体、基因重组蛋白质药物、病毒疫苗等生物技术产品的研究开发和工业化生产。通过几十年的发展，CHO细胞已成为生物技术药物最重要的表达或生产系统，成为了基因工程和生物制药的重要工具。CHO细胞的特性：CHO细胞具有不死性，可以传代百代以上,CHO细胞属于成纤维细胞，是一种非分泌型细胞，它本身很少分泌CHO内源蛋白，因此对目标蛋白分离纯化工作十分有利。CHO为表达复杂生物大分子的理想宿主。CHO细胞虽可像微生物细胞一样，在人工控制条件的生物反应器中进行大规模培养，但其细胞结构和培养特性与微生物细胞相比，有显著差别：动物细胞比微生物细胞大得多，无细胞壁，机械强度低，适应环境能力差；倍增时间长，生长缓慢，易受微生物污染，培养时须用抗生素；培养过程需氧量少；培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在；原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡；代谢产物具有生物活性，生产成本高。重组新冠病毒疫苗生产原理：将新冠病毒S蛋白受体结合区（RBD）基因重组到中国仓鼠卵巢（CHO）细胞基因内，在体外表达形成RBD二聚体，并加用氢氧化铝佐剂以提高免疫原性。接种后可刺激机