丙型肝炎病毒不同片段抗体蛋白芯片的制备及评价

1、丙型肝炎病毒差异片断抗体卵白芯片的制备及评价何谦，楚雍烈，林联成，王香玲，刘余静【关键词】肝炎病毒PreparatinandevaluatinfprtEinhipfrdifferentHVantibdydetetin【Keyrds】hepaivirus;prteinarrayanalysis;antibdies【摘要】目的：制备丙型肝炎病毒hepatitisvirus,HV差异片断抗体卵白芯片，并对其临床应用代价举行评价.要领：别离取HV交融抗原及分片断抗原，点至醛基化玻片上，制成HV差异片断抗体卵白芯片.举行抗HVELISA试剂和RIBA试剂与卵白芯片法的比力.效果：卵白芯片的交融抗原检测与

2、ELISA法比拟，阴性切合率为93.8%，阳性切合率为97.1%.卵白质芯片分片断检测与ELISA法比拟，阴性切合率为96.8%，阳性切合率为97.1%.卵白芯片的交融抗原检测与RIBA法比拟，阴性切合率为96.9%,阳性切合率为98.5%.卵白芯片分片断检测与RIBA法比拟，阴性切合率为100%,阳性切合率为98.5%.结论：卵白芯片法与RIBA试剂检测效果比拟力，与RIBA试剂有精良的同等性P0.05)，证实其具有精良的检测正确率,并可以低落ELISA法的假阳性.【关键词】肝炎病毒；卵白质陈列阐发；抗体0弁言比年来，丙型肝炎病毒HV差异编码区抗体检测成为一个热门1，2.固然如今外洋都用RI

3、BA3.0试剂作为HV简直认试剂，但是其有代价昂贵、操纵庞大等诸多不敷.丙肝患者简直诊、献血员筛癣治疗药物的研发、患者的追踪不雅察急迫必要更先辈、更轻便、更廉价的诊断试剂的问世，为此我们举行了HV差异片断抗体卵白芯片的实行研究,得到了较满足的效果.1质料和要领1.1质料美国artesian点样仪；美国SanArray4000B扫描仪；基因工程表达的HV交融抗原、焦点抗原区、NS4抗原、NS5抗原中国医学科学院病毒所；基因工程表达的NS3抗原7日本东燃公司；Y3抗人IgG结合物美国Siga公司；差异片断抗体尺度品由深圳赛尔生物技能惠赠；RIBA3.0试剂，载玻片美国hirn公司；抗HVELISA

4、试剂上海永华细胞和基因高技能阐发中央；血清标本99例，均泉源于西安交通大学第一病院和第二病院门诊及住院患者.1.2要领2效果2.1实行条件选择用棋盘滴定法举行抗原浓度、样品稀释倍数及Y3抗人IgG结合物浓度简直定.差异浓度的各片断抗原点样，测试尺度品并与RIBA试剂比力，切合率最高者为点样浓度.效果以交融抗原100g/L,区抗原100g/L,NS4抗原50g/L,NS5抗原50g/L为最正确.样品稀释倍数以110为宜.Y3抗人IgG结合物浓度测定以1500为最正确浓度.2.5稽核评估卵白芯片各片断检测与RIBA确证试剂举行比力，效果见Tab2.表2HV卵白芯片与RIBA各区段抗体检出比力略2.

5、6抗HVELISA试剂和卵白芯片法的比力抗HVELISA试剂检测样本99例，此中阳性标本69例,阴性30例.30例抗HVELISA试剂检出的阴性样本，卵白质芯片的交融抗原检测均为阴性，卵白质芯片的分片断检测均为阴性；69例抗HVELISA试剂检出的阳性样本，卵白质芯片的交融抗原检测检出阳性67例，阴性2例；卵白芯片分片断检测按照差异片断中有1个阳性判为可疑，2个或2个以上阳性那么判为阳性标本的判断尺度，卵白质芯片的分片断检测检出阳性67例，阴性1例，可疑标本1例.统计学阐发表白，卵白芯片的交融抗原检测与ELISA法比拟，阴性切合率为93.8%，阳性切合率为97.1%,具有较好的同等性Kappa

6、值=0.953,P0.05.卵白质芯片分片断检测与ELISA法比拟，阴性切合率为96.8%，阳性切合率为97.1%，具有较好的同等性Kappa值=0.954,P0.05.2.7RIBA试剂和卵白芯片法的比力RIBA试剂检测样本99例，此中阳性标本66例,阴性31例，可疑标本2例.卵白质芯片的交融抗原检测检出阳性67例，阴性32例.卵白质芯片的分片断检测检出阳性67例，阴性31例，可疑标本1例.统计学阐发表白，卵白芯片的交融抗原检测与RIBA法比拟，阴性切合率为96.9%,阳性切合率为98.5%.具有较好的同等性Kappa值=0.955,P0.05.卵白芯片分片断检测与RIBA法比拟，阴性切合率

7、为100%,阳性切合率为98.5%，具有较好的同等性Kappa值=0.978,P0.05.3讨论卵白芯片是比年陪同基因芯片生长起来的一项新技能3,4，这项技能是将卵白质的阐发微缩到小型芯片上，使用荧光或酶显色举行检测，并用电脑举行阐发.该技能在对抗原抗体检测、疾病诊断、药物开拓等研究方面表现出快速、高效、高通量处置惩罚信息的本领.通过对100份抗HVELISA阴性的其他肝病血清，20份巨细胞病毒阳性血清，20份类风湿因子阳性血清，218份正凡人血清，用本试剂举行检测，效果均为阴性，证实该试剂与其他肝炎病毒抗体无交织反响，且不受类风湿因子、巨细胞病毒的影响，具有较好的特异性.对载玻片举行特别处置

8、惩罚后，卵白质抗原与片基结合不变，并保持原活性状态，HV差异片断抗体卵白芯片的不变性及重复性得到满足效果，试剂的不变性可达1a，较成熟的技能使其具有了较好的开拓远景.【参考文献】1YnSK,ParkY,ByunBH,etal.Therelatinshipbeteenvirlgialharateristisfhepatitisvirus(HV)andreativitytthereginalspeifiprtEinfHVJ.KreanJInterned,2000;15(2):109-116.2BdurS.SerlgialdiagnsisandgentypingJ.edirbil,2002;51(8):700-704.3罗进,李丁,张文红,等.卵白芯片标识表记标帜体系的优化研究J.第四军医大学学报,2022;26(4):311.LuJ,LiD,ZhangH,etal.ptiizatinfprteinirarrayarkingsysteJ.JFuthiledUniv,2022;26(4):311.4范德刚,范清宇,张惠中,等.使用基因芯片技能挑选差异转移本领骨血瘤细胞差异表达基因J.第四军医大学学报,2022;24(9):816-819.FanDG,FanQY,ZhangHZ,etal.Studynetasta