饲用小肽产品应用与检测

1、饲用小肽产品的应用与检测技术总监:唐旭内 容肽类产品的主要应用小肽的转运吸收3. 肽的分离和分析技术肽类产品的应用现状欧美肽类药物和试剂营养性小肽和具有生理活性功能的肽中国尚无具有独立知识产权的肽类药物营养性小肽和具有生理活性功能的肽蛋白质吸收机理的研究历史1950以前 传统理论: Dogma提出的蛋白质必须水解成 FAA,才能被吸收的观点居主导地位1953 Agar首次证实了完整的双甘肽被大鼠肠道吸收 Smyth证实肽可完整进入肠粘膜细胞1980-现在 证实了肽有独立的转运通道, 其转运效率 可能超过氨基酸的转运通道肽和氨基酸的吸收两种独立的转运机制 氨基酸的转运吸收: 钠离子泵: 逆浓度,

2、 消耗ATP 非钠离子泵: 逆浓度, 消耗ATP 小肽的转运吸收 Ca+ / H+ 转运系统: 逆浓度, 消耗ATP Na+ / H+ 转运系统: 依赖H+ 的电化学梯度, 不耗能 谷胱甘肽(GSH)转运系统: 具有特殊的生理意义 肽的转运吸收两种转运吸收机制的比较肠道肽载体对底物具有广泛适应,能接受几乎所有的二,三肽作为底物2. 小肽吸收速度快,耗能低3. 小肽吸收可避免氨基酸之间的吸收竞争 ( Addison 1972, Ganapathy 1981, Guandalini等 1982, Hara 1984, Rarat 1992 1995.)两种吸收机制的竞争肠道底物中肽所占比例肽链长度

3、SP和FAA两种吸收机制转运量和转运效率的研究Matthews 1972 大鼠对酪蛋白，乳清蛋白酶解产物的吸收率高于相应的游离氨基酸Hara 1984 大鼠对白蛋白等的酶解产物的吸收强度 高于相应的游离氨基酸的7080%Rerat 1998 猪十二指肠灌注小肽混合物时，出现在 门静脉的氨基酸比灌注相应的氨基酸混 合物时更早，且吸收峰更高小肽对动物组织蛋白质代谢的影响Boza 1995, Hara 1984,Infamle 1992,Monchi 1993, Pullain 1989, Zaloga 1991 当以小肽形式作为氮源时，整体蛋白质沉积率高于相应的氨 基酸日粮或完整蛋白日粮。Funa

4、biki 1990 肽日粮组小鼠组织蛋白合成率较相应的氨基酸日粮组 高Nielsen 1998 灌注小肽混合物的猪组织蛋白质合成率显著高于灌注相应 的混合物组两种独立的转运吸收机制（小结）与氨基酸的转运通道相比，肽转运通道具有载体耐 受性强，不易饱和，吸收速度快，可避免氨基酸之 间的吸收竞争等特点。两种转运通道对蛋白质吸收的贡献取决于肠道废物 中肽的比例和肽链的长度。 肽的分离与分析反相高效液相色谱（） 保留系数与肽的结构：肽链长度，氨基酸极性等 反相载体：小肽的分离 Altex Ultrasphere C18和C8, Waters NovaPak C18 大分子量肽 Vydac C18 ,

5、Synchropak C18 300A肽图分析 (Peptide Mapping)Peptide mapping and differential display of glycopeptides 疏水作用色谱（）利用多肽中的疏水基因达到分离分析的目的优点：多肽变性较少，活性稳定膜蛋白色谱(CMP) 分离强疏水性蛋白,多肽混合物的层析系统,常用去垢剂(如SDS)溶解膜蛋白形成SDS-融膜蛋白,由羟基磷灰石柱分离纯化CE在多肽分析中的应用 肽的鉴别分析,结构分析微量制备纯度检测.非均一性检测稳定性和动力学研究CE肽图CZE纯度检测CZEMECC SDS-CGE非均一性检测CZE MECC CIE

6、F CE-MS稳定性和动力学研究CZE SDSCIEF质谱的应用电雾离子化质谱(ESI-MS) 分子量较大多肽的在线分析 精度0.01%; 分辨率1000 ESIHPLC ESICZE 基质辅助激光离子化飞行时间质谱MALDITOFMS 高效, 快速, 高灵敏度, 特别适合于测定肽的混合物(如蛋白质酶解产物)的分子质量 可以测量的分子量范围是无限制的 精度0.01%-0.1%蛋白质组合酶解产物的MALDI质谱图富力肽的分子量分布分析方法：基质辅助激光解吸附飞行时间质谱 （MALDI-TOF-Mass Spectroscopy） 分子量 摩尔百分含量 0-160 3% 161-650 87% 651-1000 8% 1000 2%未知肽的序列测定 Ladder测序: Edman降解与MALDI结合翻译后修饰的鉴定磷酸化: 比较碱性磷酶脱磷前后的MALDI质谱,确定磷酸化的位点, 精度高, 耗时少糖基化: MALDI不易受缓冲液影响,是测定特定糖苷酶水解引起分子量变化的理想技术蛋白质酶解效果的判定-常规方法酸溶性氮得率蛋白水解度(DH)氮溶指数(NSI): 小分子肽与大分子蛋白质