同济医院检验科ISO15189体系文件15微生物药物敏感试验(K-B法)

1、同济大学附属同济医院检验科微生物组项目操作指导书TJYYJYKWSW/XMZ115第2版标题：微生物药物敏感试验(K-B法)第1章 第15号第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页1. 药敏试验目的: 一是指导临床医师选用效果最佳的药物进行治疗感染性疾病；二是在一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐药的微生物流行病学资料。2. 适用范围 临床微生物室药物敏感试验3. 基本术语3.1 敏感（Sensitive）： 指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治愈。3.2 中度敏感：指通过提高某种抗菌药物的剂量或该药物浓集的部位，细菌生长可被抑制。 由于微小的技术因素失控可以对结果解

2、释错误，所以这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”。3.3 耐药（Resistant）：指被测菌株所引起的感染不能用该抗菌药物治愈。3.4 最低抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration）：抗菌药物能够抑制细菌生长所需的最低浓度。单位：ug/ml或u/ml。4. 琼脂扩散法敏感试验（改良K-B法）4.1 检测原理: 将含有一定量抗生素纸片或药片贴在已接种试验细菌的琼脂平板上，抗生素即向周围扩散。敏感株在纸片周围的生长受到抑制而形成抑菌圈。依抑菌圈的大小判断细菌的敏感性。4.2 培养基与试剂4.2.1 M-H 平板、M-H肉汤见: 基本分离培养基及配

3、制。4.2.3 各种药敏纸片，主要为 OXOID产品。4.3 操作步骤4.3.1 挑取被测菌4-5个菌落接种于MH肉汤中，35培养5小时；或挑取菌落于5ml生理盐水中制成菌悬液，其浊度相当于0.5麦氏比浊管（此法适用于任何细菌）。4.3.2 接种平板 用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液。用拭子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度。最后沿周边绕两周，保证涂均匀。4.3.3 贴纸片 待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用镊子取纸片一张，贴在琼脂平板表面，用镊尖轻压一下，使其贴平。每张纸片间距离不少于24mm.直径90mm的平板最好贴6张。4.3.4 置35

4、孵箱。平板在孵箱内最好成绩单独摆放，不应数个叠在一起，否则会影响中间的平板，达不到孵育温度而产生扩散的作用。18-24小时，读取结果。4.3.5 判定结果: 培养后取出，测量抑菌环的直径。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株会出现蔓延生长，进入抑菌环，磺胺药在抑菌环内会出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。判定标准参考“抗生素纸片法药敏试验操作标准”4.4 注意事项:4.4.1 培养基用MH琼脂，该培养基在维持细菌正常发育，不拮抗抗菌药物活性及商品的批间差等方面优于其它培养基。测肺炎链球菌时，在培养基中加5%的脱纤维羊血；测嗜血杆菌以及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1%血红素和2.5mg/ml辅酶。加入后校正PH7.2-7.4。4.4.2 药敏纸片: 直径6.35mm，每张吸水量约20ul；片间差2mm（抑菌环）纸片实际含药量与标量一致。4.5 质量控制:4.5.1 质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC25923，大肠埃希ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853。4.5.2 操作方法:4.5.2.1 采用与常规实验相同的操作方法，测定上述三种质控菌株的抑菌环。测定的抗菌素种类亦与常规鉴定的相同，每周作两次；如发现失控则每日监测。4.5.2.2 抑菌环质控范围 参考附表中抑菌环允许范围，