兽医流行病学血清流行病学revised

1、第十一章 血清流行病学第十一章 血清流行病学目的要求： 掌握血清流行病学的概念与主要用途 了解血清学试验的解释方法重点：血清流行病学的主要用途难点：血清学试验的解释方法 内容提要第一节 概述第二节 血清抗体的测定第三节 血清学试验的解释第四节 血清库1、概念：指用血清学（免疫学）和流行病学原理和方法来研究血清成分中出现和分布的规律，以阐明疾病在畜群中的分布和原因，并在采取相应措施后，检验其效果血清中的成分： 特异性抗体、酶、微量元素、矿物质、激素第一节 概述2、用途查明疾病的流行情况 未免疫动物 免疫动物疾病的地理分布检查疫苗的免疫效果病因研究疫情预测和检测3、方法（1）调查方法 A、短期调查

2、：确定诊断，暴发调查时测双份血清 B、长期调查：种畜群的跟踪，多次采样（2）检测的方法：HI，AGP，ELISA等（3）结果的分析 血清学结果：转换成几何均数，不用算术均数，利于t检验和F检验。 标准的采用：国际、国内和地方第二节 血清抗体的测定一、抗体量的表示（一）滴度的对数转换试验检测前往往将血清作倍比稀释；2倍、10倍，两者交叉应用等；结果统计时必须转换，常用倒数滴度和对数滴度；目的：保证滴度呈正态分布 1、算术平均数 对数滴度相加，除以样本数； 2、几何平均滴度 （GMT） 对数平均滴度的反对数，可通过查对数表或计算器计算。（二）平均滴度例如：对数平均滴度为 4.7 2 倍稀释： 即2

3、GMT=4.7, GMT=2 4.7=26 换算成： 10GMT= 4.7x 102 10倍稀释： 10GMT=4.7， GMT=10 4.7 先作10倍，后作2倍稀释： 在取以2为底的对数前，应除以10. 稀释度为1/10，1/20，1/40，1/80，对数滴度为0,1,2,3表示平均滴度为1.5GMT/10=2 1.510 GMT/10=1.5x0.301=0.45取GMT/10 =0.45的反对数 GMT/10=2.8 GMT=28结果的分析（1）感染率相同，但抗体滴度不同 表明，最近发生感染（2）滴度相同，但感染率不同二、抗体测定1、单系列稀释测定： 本系统每稀释度测定一次, 如，ND

4、V的HI测定2、多系列稀释测定 本系统每稀释度测定几次，如中和试验的抗体测定，一般要重复4次。多系列稀释测定的指标LD50：半数致死量, 药物毒性或病原微生物的毒力；TCID50：组织培养半数感染量ED50：半数有效量。防止50%的试验组成员产生特定后果的血清稀释度。 Reed-Muench二氏法 Spearman-K rber 二氏法 Spearman-K rber 二氏法计算实例公式： 10 ED50=L-d(p-0.5) L:所有单层都未出现病变的最高稀释度对数； d:稀释度的对数； p：从显示全部阳性结果（所有单层都未出现病变）的最高稀释度开始的各稀释度试验阳性比例总和。血清稀释度10

5、稀释度显示细胞病变的单层数完整单层数阳性比例1-P1/10.0051.000.001/2-0.3051.000.001/4-0.6051.000.001/8-0.9140.800.201/16-1.2140.800.201/32-1.5320.400.601/64-1.8410.200.801/128-2.1500.001.00Spearman-K rber 二氏法计算过程L=-0.60 d= 10 2=0.3p=1.0+0.8+0.8+0.4+0.20=3.20带入公式： 10ED50=-1.4ED50=1/25.1 0.1mL血清含有25.1个ED50三、畜群中血清抗体水平的估计和比较（一

6、）检测抗体的存在 定性检测结果与暴露水平、样本含量和方法的敏感性有关。（二）抗体水平的比较 1、不同畜群的比较 抗体存在与否：离散数据，用卡方检验，需连续校正 抗体的频率分布：参数检验。 2、同一畜群不同估计值的比较：t检验，使用对数滴度第三节 血清学试验的解释（一）精密性（refinement) 检测微细抗原的能力，与不同方法的检测能力有关 必须不断改进诊断方法的敏感性（二）准确性(accuracy) 真阳性、假阳性 真阴性、假阴性血清学试验中阳性和阴性结果的原因现象判定结果实际感染真阳性群交叉反应、非特异抑制剂、非特异凝集假阳性缺乏感染、天然或诱发免疫耐受真阴性时间不当、试验选择不当、假阴

7、性非特异抑制物（抗补体、组织培养毒性）假阴性抗生素诱导的Ig抑制假阴性不全或封闭抗体、试验不敏感假阴性（三）试验的敏感性传统的检测方法 ELISA，免疫荧光和放射免疫 琼脂扩散试验：敏感性低，特异性强分子生物学方法 常规PCR 荧光（定量）-PCR特异性敏感性C下图：疾病群体中一变量的频率分布；C：确定健康与有病个体界线的分界点上图：健康群体中一变量的频率分布敏感性与特异性的相互关系敏感性与特异性的相互关系敏感性为真实有病的动物试验阳性的比例特异性为真实无病的动物试验阴性的比例敏感性与特异性的相互关系试验状态真实有病真实无病总计有病aba+b无病cdc+d总计a+cb+da+b+c+d敏感性特

8、异性a=da+cb+d（四）预测值真实阳（阴）性动物在试验阳（阴）性动物中的比例阳性结果预测值阴性结果预测值a=da+bc+d预测值取决于方法的敏感性、特异性与群体的患病率敏感性、特异性是试验本身的特征，不发生改变（五）可重复性可重复性是可靠性的表现，与多种因素有关：试剂的标准化程度操作者的技术熟练程度抗体滴度两倍变化不被认为是显著变化，几何性4倍变化反映真正变化可重复性高是真实性的必要条件（六）真实性与可靠性Validity and Reliability真实真实可靠不可靠不真实四、抗体流行率抗体存在表明动物或其母体曾经暴露于刺激产生该抗体的抗原物质抗体持续时间与抗体的半衰期、持续感染等有关第四节 血清库Serum bank: 有计划地血清收集，代表一个群体的随机样本，编有目录，并以保持免疫活性和生化特性的方式储存。（一）用途1、确定主要的保健问题2、建立优先进行预防接种的项目3、划出疾病分布的界线4、调查新出现的疾病5、确定流行的周期性6、增加对病原学的了解7、评价疫苗接种工作8、估计疾病造成的经济损失（二）血清