鱼病专题-日本国立北海道大学兽医学部传染病学讲座8

1、鱼病专题日本国立北海道大学兽医学部传染病学讲座林子恩郭登赋儿玉洋十、鱼病疫苗9.3 鱼类所使用的药物及相关问题(1)化学疗法剂：如表 9 1 9 4 所列 9 个抗生素、4 个合成药剂、7 个鶫喃剂、4 个磺胺剂，共计 24 种化学药剂供参考。(2)生物制剂：随着近年来化学药剂的无效後，开发生物制剂 ( 即疫苗或菌苗 ) 变得相当重要。日本正在开发中的 6 个是弧菌症 ( Vibrio )，Aeromonas 感染症 ( Aeromonas sp. )，类结节症 ( Pasteurella )，Norcardia 症 ( Norcardia sp. ) 及鲑鱼的 I P N、I H N。都以不

2、活化疫苗方式来使用。(3)一般化合物：a. Machilite greew ：据毒，水中霉菌去除时用 2.5 - 4 ppm1 小时 5 7 日3 周流水添加或 0.2 - 0.5 ppm池中散布。b. Methylene blue：水中霉菌或表在性害 去除时 1 5 ppm池中散布。c. Formalin：害 驱除 10 - 30 ppm池中散布。d.过锰酸钾：害 驱除 3 - 5 ppm池中散布。e. Trichlonofonm ( 有机磷 )：害 驱除 0.2 - 0.5 ppm。f.硫酸铜：害 驱除 0.5 - 1 ppm。9.4 诊疗的基本技术鱼病的发生多群体性，因此其诊疗法也以群体

3、为对象，但对所谓玩赏鱼则牵涉到外科技术或物理疗法，对兽医师是发挥专长的时候。(1)诊断要领：由於养殖池的集团式发病，允许多量剖检病鱼，因此由剖检最能够且容易进行诊断，而个别的疾病并不能解释群体的发病现象。a.早期发现：鱼和一般陆地动物或人类一样，疾病发现得早，愈能早做处理，治疗效果愈能奏效。事实上，天候也影响鱼的生理变化，对鱼异样的观察稍有影响。b.环境的观察：做为一个诊疗鱼病的兽医工作人员，特别要留意季节和天候，因为疾病在各季节的消长，天候剧变影响的水质变化和鱼类生理变化，都必要考虑。後者的例子如酸性雨 ( P H 4 - 5 ) 和水温 3上下的变化都使鱼的食欲低下。一位有经验的兽医师，在

4、开始观察鱼体之前，对周遭的环境应先详细观察。c.畜主的报告：对以下的重点，如畜主未涉及之时或未详细报告时，应主动再问清楚，记录之。1.初发病的情形：异样初出现是何时？死鱼被检出是何时？2.病历：该场过去的病历曾经如何处理过，结果如何？3.病况经过及预先做了何处理，投了何种药剂？4.鱼的产地来源及购入径路，应掌握实在的资料。5.饲养期间、年龄及准备上市的预定时间。6.饲料的种类、厂牌和给饲方法，是相当重要的。7.水的来源及流水量：河川水的污染及地下水空气过饱和溶存是常发生的问题。8.饲养尾数，是推算饲养管理方式的正确与否及投药的参考。9.消毒、杀菌剂如何使用。剂量计算正确否。d.临床症状的观察：

5、鱼在水中的各种动作是提供诊断最好的资料方向，1.摄食量、抢食动作，2.异常的游泳表现，如上浮、开口、擦池壁、狂奔跳跃、蛇行回旋、离群。e.剖检前的外观检查：外观的异常充出血，颜色改变，肥瘦程度，眼及嘴吻的异常否，鳃盖的闭锁，都应详加记录。9.5 投药(1)经口方法：可分为胶囊投入及混合在饲料中给饲 2 种方法。前者多应用在观赏鱼行个别治疗，後者对群体疾病时操作上省劳力，但效果颇受以下因素的影响，是为其缺点。a.必需正确算出总重量，即数 10 尾的平均体重乘以推定尾数，这点相当难把握，常有误差。过量投药则易生药害，不足则易造成抗药性。b.养殖现场对药物之称重，常忽略其精确性，且数百公斤的饲料与数

6、公克的抗生素混合应小心混合才能均匀。c.投药时为求正确给药，常在投药前数日开始绝食，投药当天减少饲料量，是故鱼在投药期间几乎不生长，影响经营效益。d.鱼对化学物质的异味相当敏感，常把已咽下口的饲料再吐出。e.有 20 - 30%的水吞下口後自鳃逸散，且饲料与水接触的瞬间少部分溶於水，故应考虑比常量多添加以补足这些损失。f.因个体间摄食量的差异，所进入体内的剂量也有差异，如以多次投药方式可以减少不均的缺失。g.因病鱼食欲已相当低下，故投药饵时常造成健康鱼的过量摄入，病鱼却不足。(2)浸渍法：常用於疫苗或化学药剂的经皮或经鳃投药法，达成预防或治疗的目的。对体表真菌、害 的驱除也是常用的方法。疫苗的

7、浸渍法有所谓的“ 一浴法 ”和“ 二浴法 ”两种，前者是直接浸渍鱼体於疫苗液中，而二溶法则指以高张食盐水 ( 5.32% ) 先浸 2 分钟，再用疫苗液浸数分钟，达到较好的效果。但浸渍法必需注意以下事项。a.水温、P H、光线影响药物浓度及安全量，故投药时得先检查水质。b.止水池的池水量计算稍困难，对於安全剂量小的应特别小心投药。c.注水口应停止注入，以高浓度短时间 ( 0.5 - 2 小时 ) 完成投药。(3)喷雾法：以喷雾器直接喷雾在鳃部达到目的。10.1 鱼病疫苗开发的历史及现状至目前为止，就鱼病对策而言，已在鱼群的卫生管理、遗传改良、药物治疗以及免疫预防方面做了相当多的努力。但是，随着

8、高频度地使用抗生素和化学药物的结果，使得由药物引起的环境污染，鱼体内药物残留和药物耐性菌的出现成为大家头痛的问题。因此，以疫苗为中心的预防卫生，被认为今後越来越重要了。但是，和哺乳类及鸟类相比，有关鱼病疫苗的研究历史还非常浅。开发高效的鱼病疫苗是当务之急。开发鱼病疫苗的尝试始於 1940 年代，首先是开发了 Aeromonas salmonicida 的疫苗。乃将氯仿 ( chloroform ) 处理过的不活性菌体，经口投与鳟鱼 ( Cutthroat trout )，证明该疫苗有效，同时，对疫苗成分、不活性的方法、Ajuvant 及疫苗投与法等也做了很多研究。其方法也被应用於其它细菌性疾病

9、。表一乃列举了现在已上市的各种实用疫苗及其使用国家。表 1：目前世界各国使用的主要鱼病疫苗疫 苗国 名投与方法市贩检定制度 Vibrio disease Furunculosis Enteric vedmouth disease 澳洲 美国 挪威 丹麦、芬兰、日本 纽西兰、瑞士 英国 澳洲 美国 澳洲 美国 义大利 喷雾、浸渍、注射 喷雾、浸债 浸渍、注射 浸渍 浸渍 浸渍、注射 注射 喷雾、浸渍、注射 喷雾、浸渍 浸渍 有关 Yersinia ruckeri ( enteric redmouth disease 的病原菌 ) 疫苗的开发，首先报告於 1965 年，乃采用 Phenol 不活化

10、菌体，经口或接种虹鳟。被免疫鱼经攻击其後，耐过率达到 90%，为本病的疫苗向商品化方向打下了基础。目前使用的疫苗为福马林不活化疫苗。另外，1970 年初在美国首先研制了弧菌病 ( Vibrio disease ) 疫苗。随後，世界各国也相继开发出其死菌疫苗。已知 Vibrio 菌有数种血清型，因此，目前使用的疫苗多为多价疫苗。此外，enteric vedmouth disease 和 furunculosis 病的混合疫苗已达到实用化的程度。现在使用的疫苗中，Vibrio 病疫苗是最有效的鱼病疫苗。除少数实用化疫苗外，更多的是尚处於研究阶段，还未达到实用化的程度。主要被研究的疫苗对象有 Aer

11、omonas hydrophila 感染症，Edwardsiella disease、Cowmnavis disease、细菌性肾脏病 ( Bacterial Ridney disease )、Pasteurellosis、Streptococcosis、Nocardiosis 以及 Pseudomonas disease。传染性胰脏坏死症 ( infectious pancreatic necrosis ) 病毒性出血性散血症 ( viral haemorrhagie septicemia ) 和传染性造血器坏死症 ( infectious hematopoietic necrosis )

12、等病毒性疾病的试验疫苗也陆续被研制出来，但都没有得到令人满意的效果。现在尚无病毒性疾病疫苗市贩。10.2 影响疫苗效果的诸因素免疫疫苗的开发，其主要研究对象可分成以下几个重点。(1)防御免疫反应的解析。(2)免疫反应诱导抗原的性状。(3)抗原的大量生产。(4)投与条件。在此，就影响免疫效果的因素加以说明：1.鱼体重疫苗投与时机影响抗体产生所需的时间，抗体产生量及免疫持续期间。预防效果和鱼体重有密切的关系。以 V. anguillarum 及 Y. ruckeri 的菌苗做浸渍免疫 ( batk immunization ) 的效果实验时，对体重 0.9 2.5 g 的鲑鱼幼鱼，投与後可获得充分

13、的预防效果。但是对体重 0.5 g 以下的幼鱼，投与後就只得到较弱的免疫效果。免疫体重 1 g 的幼鱼时，防御效果可持续大约 120 天，2 g 幼鱼时，约 180 天，4 g 以上的幼鱼时，免疫效果能维持达一年以上。由以上的结果，对象 I P N、I H V 只在幼鱼期流行的传染病，必须考虑开发其它免疫预防法。在此，可以考虑移行抗体法。但至目前为止，有关鱼类是否存在母子免疫的问题，持否定的意见较多。2.水温抗体产生量及抗体产生所需的时间，或者二次免疫反应等鱼类免疫反应易受环境水温的影响。因此，要获得充分的免疫效果时，就必需考虑水温的重要因素。关於鲤鱼，低水温不仅会延迟抗体产生细胞的出现时间，

14、而且使抗体产生量减少。用 V. anguillarum 菌苗免疫不同水温饲养的 Sockeye Salmon 鱼後，再用强毒细菌攻击观察其防御效果的表现，在 10饲养时，免疫防御效果 10 天後才能获得，但在 18饲养时，只需 5 天就可获得。在 4 饲养时，获得同样的防御效果花费天数更长，约 40 天。另外，在 6.7饲养的银鲑，接种 A. Salmonicida 的 LPS 後 4 周才能检测出抗体，但在 17.8饲养时，一周後就可检测出抗体。3.紧迫因素 ( Stress )饲育水温、饲养密度、水质等饲养环境条件变化，会使鱼产生紧迫。red sea bream 鱼在饲养时的水中盐浓度、水

15、温急剧变化时，其血中类固醇含量显着增加。同样的现象在 Striped bass 鱼也可以观察到。对鲑鱼种种的紧迫因素不仅会使血中类固醇量增加，而且会影响抗体产生细胞数，抗体价及淋巴球反应性等免疫反应。4.疫苗投与方法目前，主要疫苗投与法有以下四种：a.接种法 ( 注射法 )，b.浸渍法，c.喷雾法 ( Spray ) 或散布法 ( Shower ) 和 d.经口法。从迅速性，效果性及易於调节投与抗体重而言，接种法乃为疫苗投与法中最理想的。在 V. anguillarum 菌苗免疫鲑鱼，观察不同投与法的效果实验时，腹腔内接种，一周後就会出现免疫效果。和其相比，浸渍或喷雾法，约於 6 周後才有防御

16、效果，经口法，所需时间更长，大约 6 周至 8 周。但接种法也有其缺点，一是得花费大量的劳力，二是需技术熟练的操作者。特别在野外作业，接种大量幼鱼时更显得此方法不实用。和接种法相比，浸渍法一次则可以免疫大量的鱼，甚为方便。此法乃将鱼直接放入疫苗液中浸渍或放入高张溶液中浸渍。仅十多秒钟就可获得较好的免疫效果。含有抗原的高张溶液浸渍鱼时，抗原会比一般溶液高效率地渗透进血液中。喷雾法或散布法和浸渍法一样，一次可以免疫大量的鱼的优点，而且效果良好。和以上三种投与法相比，经口法可以大大地减少不必需的紧迫，且操作者不需花费太多的劳力，为本法的优点。本法的缺点是防御效果较差，需要多量的抗原，并且不易控制投与

17、抗原量。用 V. anguillarum 抗原经口投与欧洲产的 Plaice 鱼时，肠管粘液中的抗体价比血清中的要高。但用腹腔内接种或皮下接种时，肠管或皮肤粘液中的抗体价比血中抗体价要低，明显地可以看出不同的投与法影响抗体产生。因此，就肠管感染症而言，可以检讨经口法来免疫。5.抗原的种类抗原的理化学性状影响抗原进入鱼体及免疫抗体的产生。目前实用的疫苗几乎都是福马林不活化菌苗。用浸渍法或喷雾法投与时，抗原进入鱼体内经路主要有：鳃或头部、侧线 ( lateral line )。但不论何种经路，菌苗直接进入鱼体内是很难理解的。用 V. anguillarum 菌苗投与虹鳟的实验结果表示，使用全菌体不

18、如使用可溶性有效抗原更容易进入鱼体。因此，今後有必要多考虑利用可溶性有效抗原或菌体成分来进行免疫鱼类。实验证明，像 V. anguillarum、Y. ruckeri 及 E. tarda 的脂多糖类 ( L P S ) 是优良的感染防御抗原对鱼也没有毒性，因此，由其引起的细菌性疾病可以考虑使用 L P S 作为免疫抗原。6.活疫苗对哺乳类及鸟类，弱毒性或无毒性的活菌或病毒常做为疫苗来使用。被接种的动物不仅不发病，且保持感染性及免疫性。因抗原在体内可以增殖，所以用较少的投与量就可以获得较好的效果。关於鱼类的 V H S 病毒及 I P N 病毒的弱毒化及无毒化，以及免疫效果的研究早有报告。但是

19、，有无毒力的突然回复变异以及对宿主以外的鱼种有无病原性都是应该检讨的问题。因为原先认为 I P N 仅是鲑鱼科学的疾病，但後来从鳗鱼、他种淡水鱼、海水鱼及贝等软体动物也分离出 I P N 病毒或类似病毒。因此，目前使用活疫苗尚不安全。1984 年 O I E 会议上得出同样的结论。7. Adjuvant使用 Adjuvant 将提高鱼的免疫效果，在虹鳟体内的抗原随 Adjuvant 的添加而大大地增加了免疫效果。Adjuvant 还具有非特异性的免疫活性化能力，乃为免疫效果的一部份。将 A. salmonicida 的菌苗加在已做成的 Mycobacterium butyricum 的 Adjuvant 一起免疫鱼时，不仅对 A. salmonicida，而且对 A. hydrophila 及 V. ordalii 也都有防御效果。仅用 Adjuvant 接种後的银鲑，对以上的细菌攻击也产生了部分的防御效果。免疫活性化因子被认为在 M. butyricum 内存在，能非特异地