细菌的生化试验

1、细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白月东水溶液（蛋白月东1% （氯化钠0.5%）适量糖，1%1.6%澳甲酚紫酒精溶液0.1%分装10*100mm小试管，每管3-4ml,内置一密闭端向上的发酵管，10磅10分灭菌。方法：用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。结果：产酸则培养基由兰紫变黄，用“ +”表示。产酸又产气，则培养基变 黄，小管内有气泡，用表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管 内也无气泡，用“-”表示。原理：指示剂澳甲酚紫的指示范围为 PH5.2-6.8 （黄-紫）。每一种糖（醇） 培养基内只含一种糖（醇）的成分，接

2、种进去的细菌若能发酵这种糖， 则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时 还产生CO2 H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分 解这种糖，则培养及不变色也无气泡。二、靛基质实验 培养基：蛋白月东水蛋白月东1% 氯化钠0.5%蒸储水适量其中的蛋白月东最好选用含色氨酸较多的多价蛋白月东。 每支小试管分装3-4ml, 10磅10分灭菌。试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇95ml浓盐酸20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醍约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醍与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，

3、待乙醍浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基 质试剂4-5滴，不要摇。结果：乙醍层现红色为阳性，以“ +”表示，不变者为阴性，以“-”表示。 原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白月东中的色氨酸，产生靛基质（呻噪）（ 靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质， 以肉眼可见。三、甲基红实验: 培养及：葡萄糖蛋白月东水（PH7.4）葡萄糖0.5%磷酸氢二钾0.5%蛋白月东0.5%蒸储水适量加热溶解后，分装小试管，每管 3-4ml, 10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300m195%醇中，加蒸储水至 500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M

4、 R试剂3-4 滴。结果：红色者为阳性，以“+”表示，桔黄色者为阴性，以“-”表示。 原理：甲基红是一种指示剂，其变色范围 PH4.4-6.2 （红-黄）。若细菌产酸 量多，则培养PH下降，当加进M R试剂时变为红色；若细菌产酸量 少，或产酸后，又不断转化为其他物质（醇、醛、酮、气体和水）时， 则PH变化不大，培养基为桔黄色。四、V-P实验培养及：同M R实验试齐I：甲液6% %-茶酚酒精溶液乙液40%KOH溶液方法：接细菌于培养基中，37摄氏度培养2天后，取出加1滴管甲 液和一滴管乙液，摇匀，37摄氏度放置30分钟。结果：液体呈现红色者为阳性，以“ +”表示，不变色者为阴性，以 “-”表示。

5、原理：某些细菌能分解葡萄糖，产生丙酮酸，并将丙酮酸脱竣变为中 性乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中被空气中的氧气氧化为 二乙酰，二乙酰与蛋白月东水中的精氨酸所含的服基起作用，生成红色化合物为V-P试验阳性， -蔡酚的作用是加速反应进行。五、枸椽酸盐利用实验培养基：西蒙氏（SUMMONS枸椽酸盐培养基磷酸二氢镂0.1g硫酸镁 0.02g磷酸二氢钾0.1g枸椽酸钠（柠檬酸三钠）0.5g氯化钠 0.5g蒸储水 100mlPH 6.8琼脂 2g10磅10分1艰麝香草酚兰1ml混匀，分装小试管，每管4-5ml, 10磅10分灭菌，趁热摆成斜面。方法：接种细菌于培养基斜面上37摄氏度培养24小时后观察

6、。结果：斜面上有菌苔出现，培养基颜色变为深蓝色，为枸椽酸盐利用试剂阳 性，以“+”表示，斜面上细菌不生长，无菌苔出现，培养基不变色 为阴性，以“-”表示。原理：指示剂澳麝香草酚兰的指示范围为 PH6.0-7.6 （黄-兰）。枸椽 酸盐培养基中仅含有唯一的有机盐， 即枸椽酸盐。一般细菌能利用磷 酸二氢镂作为氮源，但不一定能分解枸椽酸盐而去的碳源。可分解枸 椽酸盐取得碳源者，不仅能在本培养基上生长，形成菌苔，而且有碳 酸盐生成，是培养基转为碱性，培养基由绿色变为深蓝色。六、硫化氢实验培养基：醋酸铅培养基普通琼脂200ml硫代硫酸钠0.5g15磅20分灭菌，待冷至55摄氏度左右，灭菌加入8磅15分灭

7、菌的 10%昔酸铅溶液1ml,混匀，立即无菌分装，直立静止待凝。方法：按东西南北四个方向将细菌穿刺接种于培养基与试管壁之间，37摄氏度培养24小时后观察结果。穿刺部位呈褐黑色者为阳性（+）, 不变色者为阴性（-）。原理：某些细菌能分解胱氨酸等含硫氨基酸，生成硫化氢。硫化氢与铅盐（铁 盐，如硫酸亚铁），则形成黑褐色的硫化铅（硫化铁）沉淀物。黑褐 色沉淀物愈多，表示生成的硫化氢量亦愈多。硫化氢实验用的培养基中含有硫代硫酸钠，是一种还原剂，能保持环境使形成的硫化氢不再被氧化。七、尿素分解实验培养基：Christensen氏尿素琼脂培养基蛋白月东0.1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.2g蒸储水100ml

8、PH7 4琼脂2g10磅10分钟0.6% 红 0.2ml10嫡萄糖1ml20标素1ml混合，分装小试管，每管4-5ml, 8磅15分灭菌后摆斜面方法：接种细菌于培养基斜面上，37摄氏度培养18-24小时结果：培养基呈红色者为阳性，以“ +”表示。原理：酚红指示剂的指示范围为PH6.8-8.4 （黄-红）。具有尿素分解酶的细菌，能分解尿素形成大量的氢，是培养基的碱度上升，培养基变为红八、硝酸盐还原实验培养基：硝酸钾蛋白月东水蛋白月东1%硝酸钾0.1%蒸储水适量PH7.4分装小试管，每管3-4ml, 15磅15分灭菌。试齐I：甲液：对位氨基苯磺酸 0.8g5N 醋酸溶液 100ml乙液：%-蔡胺 0.5g5N 醋酸溶液 100ml方法：接种细菌后，37摄氏度培养24-48小