钉螺及感染性钉螺的室内饲养方法

1、钉螺及感染性钉螺的室内饲养方法通过人工方法将湖北钉螺制备成血吸虫感染性钉螺，确定钉螺感染的最佳条件，建立钉螺人工感染传代的室 内株，为研究其感染活性、遗传变异和疫苗等提供实验室依据。方法：用尼龙绢筛集卵法收集日本血吸虫成 熟虫卵，常规法孵化毛蝴。将钉螺与毛蝴按不同比例进行感染，感染方式分为个体感染和集体感染。个体感染 随机分6组（I用组），每组200只钉螺，每只钉螺置单孔内分别感染，钉螺感染毛蝴比例分别为1： 0,1： 5,1： 10，1： 15，1： 20，1： 25;集体感染随机分6组（可XII组），每组200只钉螺，按组别集中感染，训XII组钉 螺感染毛蝴比例分别同I用组。然后对每组钉螺

2、的感染数、死亡数及尾蝴逸出量进行比较,确定最佳感染 方法和比例。以第1代人工感染性钉螺逸出的尾蝴感染实验动物，获取成熟虫卵并孵化毛蝴，然后采用个体感 染方式，以1： 15的比例继续感染钉螺，获得第2代人工感染性钉螺。比较第1代与第2代人工感染性钉螺的 感染数、死亡数及尾蝴逸出数。通过动物感染实验，比较人工第1代、第2代感染性钉螺与自然感染性钉螺 日本血吸虫成虫发育率、每克粪卵数（fecaleggspergram，FEPG）及每克肝卵数（livereggspergram，LEPG）。结果：个体感染I用组的钉螺感染数分别为00,22.74.2,31.74.5,53.05.3,39.35.9,32.

3、74.7;钉螺 死亡数分别为 21.73.1,25.03.6,31.34.9,44.76.5,78.39.5,89.713.6;钉螺平均逸蝴量为 00,308.0 96.6,428.1 146.2,527.0171.1,571.4148.9,602.9356.3。集体感染训XII组,钉螺感染数分别为 00,12.3 2.5,18.7 4.7,28.3 4.2,33.3 4.7,29.3 5.5;钉螺死亡数分别为22.7 3.8,23.7 4.5,28.3 5.5,47.0 9.5,75.7 8.5,86.3 12.2;钉螺平均逸蝴量为 0 土 0,244.5 57.3,292.3 74.8,3

4、47.1 100.8,477.2 142.1,447.3 161.4。用人工制备的第1代感染性钉螺对血吸虫进行人工传代研究，成功获得了人工第2代感染性钉螺, 感染率为24.65%,钉螺死亡率为24.50%;与人工第1代钉螺26.65%的感染率及22.35%的死亡率差异均无统 计学意义（P0.05）。在尾蝴感染动物试验中,人工第1代、第2代感染性钉螺与自然感染性钉螺的成虫发 育率分别为68.50%,73.50%,71.00%,3组间差异无统计学意义（P0.05）;自然感染性钉螺和人工第1代、第 2代感染性钉螺的FEPG分别为 1503269,1683233,1541 117;LEPG分别为 66

5、41 1819,6272 1419,7263 1643,3组间比较差异无统计学意义（P0.05）。结论：通过用人工感染的方法可以获得日本血吸虫感染 性钉螺。个体感染方式优于集体感染方式，感染时钉螺与毛蝴的最佳比例为1： 15。人工感染性钉螺经传代 后，第1代与第2代钉螺在感染数、死亡数及尾蝴逸出数等方面无明显差别。比较人工第1代、第2代感染 性钉螺与自然感染性钉螺的成虫发育率、FEPG及LEPG,差异也无统计学意义，证明人工传代的血吸虫尾蝴 （室内株）能达到自然野生株尾蝴的感染效果。目的：探求适宜的钉螺饲养方法及日本血吸虫尾蝴释放的最佳条件，为血吸虫病防治科研课题的开展提供 可行的实验方法。方

6、法：将200只钉螺分为A、B、C、D四组，采用不同的光照、容器、饲料等条件饲养， 比较观察不同条件下钉螺存活时间与释放尾蝴的次数及钉螺死亡率；设置15组不同的条件，观察释放尾蝴 的时间与尾蝴数量。结果：用混合饲料饲养、光照射、活动空间大的C组，钉螺存活时间为45 d，释放尾 蝴4次；用砚台饲养、无光照射B、A组及用奶粉饲料、光照射D组，钉螺存活时间分别为10 d、15 d、 29 d；释放尾蝴次依次为1、2、3次；用自来水、塑料网罩组5 h无尾蝴释放；用脱氯水或凉开水、晴天、 温度2930 C组，30180 min每组平均释放尾蝴1 783条；同样条件下，温度2526 C组，60180 min

7、每组平均释放尾蝴1 733条；阴雨天组，90180 min每组平均释放尾蝴716条。结论：温度为24 28 C，白日持续日光灯照射，去氯水保湿，活动空间较宽的环境中，用泥土混合饲料饲养钉螺，活动状态较好, 生存时间相对较长，可多次释放尾蝴；在2630 C温度，晴天，用脱氯水或凉开水，加钢丝网罩，尾蝴释放 快、数量多。【关键词】饲养；钉螺；日本血吸虫尾蝴；观察 基金项目：湖北科技攻关计划资助项目（2006AA402C51）钉螺是日本血吸虫的中间宿主，所释放的尾蝴可感染动物引起血吸虫病。血吸虫病严重危害人和动物 健康，杀灭钉螺，预防尾蝴感染是血吸虫病防治的重要研究课题。而血吸虫病防治科研课题的开展

8、，时常 需要饲养钉螺与释放尾蝴，为探求适宜的钉螺饲养方法及尾蝴释放的最佳条件，特进行本实验研究。1材料1.1钉螺由江苏省血吸虫病防治研究所提供阳性钉螺，试验当日释放日本血吸虫尾蝴。1.2钉螺饲料1.2.1混合饲料将干燥的泥土和兔饲料(玉米35%、尾粉35%、豆粕30%、鱼粉8%、含钙磷的矿粉1.5%、食盐0. 5%)分别碾碎，按1:2的比例混匀，并用铁丝筛筛出细粉末，烤干备用。兔饲料由长江大学医学院动物中 心提供。1.2.2奶粉饲料奶粉：三鹿牌，高铁高锌奶粉，石家庄三鹿集团股份有限公司出品。临用时将烤干碾碎的细粉末泥土 与奶粉按1:2的比例混匀。1.3砚台 直径10.40 cm。1.4 搪瓷盘

9、 23 cmx17 cm。1.5铁丝筛180目，孔径0.087毫米，浙江省上虞市五四沙筛厂生产。1.6 玻璃烧杯 小烧杯(2.5 cmx3 cm)，中烧杯(5.5 cmx6 cm)。1.7网罩钢丝网罩，塑料网罩。2方法2.1 钉螺饲养方法将阳性钉螺分为A、B、C、D四组，采用不同的光照、饲料、活动空间条件饲养，A组：用砚台饲养， 将草纸铺于砚台内，上层加混合饲料，放入阳性钉螺50只，用脱氯水保湿，加盖(留有0.3 cm间隙)， 无灯光照射，温度2428 C，每日拣出死亡钉螺，每34日换一次草纸。B组：用奶粉饲料饲养，方法同 A组。C组：用搪瓷盘饲养，搪瓷盘内层垫海绵，上层铺草纸，加混合饲料，放

10、入阳性钉螺50只，外加洗 净的绿纱网罩，用脱氯水保湿，温度2428 C,白天用日光灯持续照射，晚上熄灯，每34日换一次草纸， 每日拣出死亡钉螺。D组：用奶粉饲料饲养，方法同C组。2.2尾蝴释放方法用脱氯水将钉螺洗4次，分15个实验组，采用不同水质、容器、网罩、天气、温度、光照条件释放 尾蝴，解剖镜下计数。四组钉螺释放尾蝴的方法大致相同，其A、B、C、D组释放尾蝴依次为2、1、3、 4次，见表1。表1钉螺释放尾蝴的15组不同条件（略）3结果3.1钉螺饲养结果A组饲养钉螺存活时间为15 d，释放尾蝴2次后100%死亡；B组钉螺存活时间为10 d，释放尾蝴1 次；C组钉螺存活时间为45 d，释放4次

11、尾蝴后100%死亡；D组钉螺存活时间为29 d，释放尾蝴3次。 见表2。表2不同条件下钉螺存活时间与释放尾蝴的次数及钉螺死亡率（略）3.2尾蝴释放结果1、2、3组在5 h中无尾蝴释放；6、13组60180 min每组平均释放尾蝴825条；9、10、15组9 0180 min每组平均释放尾蝴716条；7、8、11组30180 min每组平均释放尾蝴1 783条；4、5、12 组60180 min每组平均释放尾蝴1 733条；14组60180 min释放尾蝴1 450条。见表3。表3不同 条件下钉螺释放尾蝴的时间与尾蝴数量（略）4讨论为尽可能的模拟自然环境，延长钉螺存活时间，本实验观察了光照、饲料

12、、活动空间三个因素对钉螺存 活时间的影响，表2结果显示，用搪瓷盘加混合饲料饲养、外用绿纱网罩、光照射的钉螺存活时间为45 d，释放尾蝴4次，且钉螺死亡率随释放尾蝴次数增加而增加；而用砚台饲养、无光照射组及用奶粉饲料、 光照射组的钉螺存活时间分别为10 d、15 d、29 d，释放尾蝴次依次为1、2、3次；表明在相同温度下， 白日持续日光灯照射，去氯水保湿，活动空间相对较大，用泥土混合饲料饲养的钉螺活动状态较好，生存时间比 其他实验组长，释放尾蝴次数多。这可能与光照、较大活动空间、空气流通、混合饲料成分比奶粉更接近 自然环境中钉螺的食物等有关。而砚台饲养组虽用混合饲料，但钉螺无光照、活动空间小，

13、空气不流通，易 死亡；奶粉饲料组，蛋白量虽高，营养丰富，但易滋生细菌和寄生虫导致钉螺死亡。本次实验钉螺存活最长 时间为45 d，释放尾蝴4次，与人工感染获得的感染性钉螺,在常温下可连续使用60 d 2相比较尚有 一定的差距，这可能与未按时更换草纸，未注意保湿等因素有关。尾蝴释放的成功与否与多种因素有关3,4，本实验观察了不同水质、容器、网罩、天气、温度、光 照条件等尾蝴释放的情况，表3显示，在脱氯水或凉开水、晴天、温度2930 C的条件下，30 min即有 尾蝴释放，180 min每组平均释放尾蝴1 783条；同样条件下，温度为2526 C时60 min开始释放尾蝴， 180 min每组平均释放尾蝴1 733条；表明温度高尾蝴释放快、数量多，因温度高，光线充足，钉螺活动 较活跃，有助于尾蝴释放。而相同条件下的阴雨天90 min开始释放尾蝴，至180 min每组平均释放尾蝴7 16条，表明阴雨天不宜释放尾蝴，这可能与阴雨天光线昏暗，影响钉螺活动有