医学地衣共生菌藻的分离

1、地衣共生菌藻的分离、培养和人工重建地衣是否能分为单个生物不同有机组织的相互关系更多的了解地衣的生理、形态、发育和分子生物学方面的问题次生代谢物的研究一、共生真菌的分离和培养1、地衣型真菌常用的培养基2、子囊孢子释放法3、组织培养法4、培养共生菌的保存1、地衣型真菌常用的培养基WA4培养基含4%蒸馏水的琼脂培养基 琼脂 4g 蒸馏水补足100ml MY培养基麦芽酵母提取物培养基 麦芽提取物 20g / 酵母提取物 2g / 琼脂20g / 蒸馏水补足1000ml LB培养基Lilly and Barnett s培养基 葡萄糖10g / 天冬酰胺酸2g / KH2PO4 1g / MgSO47H2

2、O 0.5g / Fe(NO3)39H2O 0.2 mg / ZnSO47H2O 0.2mg / MnSO44H2O 0.1mg / 维生素B1 0.1mg / 维生素H 5ug / 蒸馏水补足100ml 可以在以上组分上加入1520g的琼脂，并补足 1000ml，并制成固体培养基。LBG 培养基Lilly and barnett gelrite 培养基 LB培养基中以1%的Gelrite 代替琼脂。 注意：在利用和倒入皮氏培养皿（5mm）或试管（5ml）之前应将所有培养基进行灭菌。 2、子囊孢子释放法3、组织培养法4、培养共生菌的保存共生菌可以存放很长时间 （大约一年左右）。 通常共生菌在1

3、520时表现出最大生长率。每种均有其最适生长PH值，通常PH范围为56。太高或太低的PH均会阻碍其生长。在共生菌群体保存培养中，光并不是必须的。地衣共生菌可以在液氮中保存很长时间，仍能保持活性。 二、共生藻及蓝细菌的分离和培养1、培养基2、培养前处理3、共生藻的培养4、无菌培养群体的分离5、共生藻培养的保存 1、培养基BBM培养基Bolds Basal Medium 3 N BBM培养基Trebouxia培养基MDM培养基2、培养前处理1）清洗对于大型地衣（叶状和枝状）：从地衣体顶端切下约12，然后放在自来水中浸泡510分钟，用画笔刷在流动的自来水中清理地衣体表面，然后用无菌水冲洗。对于小型地

4、衣：如果地衣体较小（多壳状地衣），可将其放入装有12 ml的无菌水和一滴Tween20的小试管中。超声波粉碎约3分钟。离心去除地衣体表面的附属物。 2）地衣体匀浆液的制备大型地衣（枝状或叶状）：（1）清洗之后，将地衣体放在一个无菌的载玻片上。（2）在解剖镜下，利用针锉平的小刀仔细刮去地衣皮层。（3）在显微镜下，取下藻层并转移到一个新的无菌的玻片上。（4）在无菌玻片上滴一滴无菌水，用另一个玻片把切取的的共生藻层盖上，轻轻压玻片，将地衣体磨成较小碎片。这样，尽管仍有一些菌丝存在，但实际上共生藻就机械地同共生菌分离了。两种共生体均悬浮在液体中。较小地衣体： 清洗之后，将小部分地衣体放在无菌的载玻片之

5、间，轻轻磨动玻片。不像大型地衣的处理，由于小型地衣没有去除表皮，故应需较大的压力。这样会得到含有菌藻的悬浊液。也可以采用搅拌器或研钵弄碎较大片地衣。但是，搅拌器会使脆弱的细胞受到破坏，因此，应采用较温和的方法处理，如在两玻片间轻轻磨动。3、共生藻的培养含共生藻的悬浊液 15天培养：1520 共生藻群（1个月左右）要注意藻的污染4、无菌培养群体的分离直接挑选法：体视显微镜喷雾法微量吸管吸法离心法利用喷射法对共生藻进行分离的方法 利用微量锡罐分离单个细胞的共生藻 5、共生藻培养的保存在低光照的条件下，可以培养很长一段时间 （约1年） 。最好每23个月传代一次。大多数的地衣共生藻的最佳生长温度为15

6、20。其生长的最佳pH范围是47。（1）用解剖刀将带有琼脂培养基的共生藻群体分为几部分（约mm2），将群体放在有合适培养基的皮氏培养皿中培养2-3个月.（2） 每2-3个月将生长的群体转移到相同成分的新鲜培养基上，在相同的条件下培养。地衣共生藻也可以在液氮下冷冻保藏相当长的时间仍保持活性。 三、地衣菌、藻共生的人工重建Stocker-Wrgtter（1994）地衣体人工重建的基本操作步骤如下：（1）收集你想重建的地衣（如Peltigera aphthosa）基物处的土壤。（2）用筛孔约12mm的筛子将500g土壤过筛，然后在其中加入100ml的二次蒸馏水。（3）将湿的土壤放入10015mm的玻

7、璃皮氏皿中，填充高度为8mm。对其进行高压灭菌后放置24小时，然后再次高压灭菌。（4）用无菌培养的共生绿藻和蓝细菌对土壤进行接种，然后在以上所描述的培养条件下对其进行培养。（5）准备好用于人工重建的分离的共生真菌，并将其转移到无糖的液体培养基上（如BBM），然后培养约1个月。（6）将匀浆所得的菌丝体覆盖到绿藻或蓝细菌群体上。（7）将重建群体在培养室中培养，培养室条件应同他们共生藻的生长条件一致。 思考题：1地衣共生菌分离方法有哪些？并简述孢子释放法步骤。2共生藻的分离培养方法哟哪些？3简要说明地衣人工重建的研究进展。THANKS思考题：1衣共生菌的分离方法有哪些？并简述孢子释放法步骤。2共生藻

8、的分离培养方法有哪些？3简要说明地衣人工重建的研究进展。 1、病毒性肝炎：由病毒造成的肝炎按照其病毒系列不同分为甲、乙、丙、丁、戊和庚共六种类型病毒性肝炎。能引起肝脏细胞肿胀，是世界上流传广泛，危害很大的传染病之一。 1908年，才发现病毒也是肝炎的致病因素之一。1947年，将原来的传染性肝炎（infectious hepatitis）称为甲型肝炎（Hepatitis A, HA）；血清性肝炎（serum hepatitis）称为乙型肝炎（Hepatitis B, HB）。1965年人类首次检测到乙型肝炎的表面抗原。 我国经济和科学技术日益发展，学术文化领域百家争鸣，（df高血压958心脏病9

9、83u6糖尿病87fr）特别是思想家的革新精神，为中医学理论的创新和突破性进展，提供了有利的文化背景。宋代陈无择著三因极一病证方论一书，（45传染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）提出三因学说；并产生了最具盛名四大学派，刘完素倡导火热论；张从正力倡“攻邪论”；李杲提出“内伤脾胃，百病由生”的理论；朱震亨创造性地阐明了相火的演变规律。编辑本段明清时期（df肺25s血液f369血小板t5172红血球gdf55m白血球fd2）是中医学理论综合汇编、深化发展，临床各科辨证体系丰富、提高阶段。如明代楼英的医学纲目和王肯堂的证治准绳，清代吴谦等编著的医宗金鉴和陈梦雷主编的古今图书集成医部全

10、录等。王清任著医林改错，注重实证研究，（df高血压958心脏病983u6糖尿病87fr）纠正了古医籍中关于解剖知识的某些错误，肯定了“脑主思维”，发展了瘀血理论。温病学说的形成和发展，标志着中医理论的创新与突破，吴有性著温疫论，叶天士著温热病篇，吴鞠通著温病条辨等，在药物学研究方面，（45传染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）李时珍著的本草纲目，总结了16世纪以前我国药物学研究的成就。医的诊察疾病能参考现代医学的微观分析，将辨证与辨病相结合，实现宏观与微观的统一，使中医诊断客观化，即把分析与综合相结合的方法引入中医理、法、方、药的研究，使二者有机结合，互相借鉴、补充，避免各自的

11、片面性、局限性，这将有利于中西医学的优势互补，“和而不同”，多元发展。近年来，中医药在防治非典、禽流感和艾滋病方面发挥的独特作用也证实了二者的有机结合，具有肯定的临床疗效。编辑本段东西方医学交融不管是中医学还是西医学，从二者现有的思维方式的发展趋势来看，均是走向现代系统论思维，中医药学理论与现代科学体系之间具有系统同型性，属于本质相同而描述表达方式不同的两种科学形式。可望在现代系统论思维上实现交融或统一，成为中西医在新的发展水平上实现交融或统一的支撑点，希冀籍此能给中医学以至生命科学带来良好的发展机遇，进而对医学理论带来新的革命。编辑本段现代中医史上个世纪末,本世纪初，1996年,清华学界对中

12、医气本质，经络实质，阴阳，五行，藏象，中医哲学观等都有了新的全面整体创造性的认识和解说。如，邓宇等发现的:气是流动着的信息能量物质的混合统一体；分形分维的经络解剖结构；数理阴阳；中医分形集：分形阴阳集阴阳集的分形分维数，五行分形集五行集的分维数；分形藏象五系统暨心系统、肝系统、脾系统、肺系统、肾系统；中医三个哲学观新提出的第三哲学观：相似观分形论等。 还包括近代针灸经络的发展史,近代中医气的进展简史,中西医结合史,中医中药史等.六种类型的病毒性肝炎遗传因子不同，除乙型肝炎遗传因子是DNA外，其余几型肝炎遗传因子均为RNA。其中甲型肝炎的传播途径是粪口传播，乙型肝炎的传播途径是血液传播、性传播和母婴传播。疫苗。 2、酒精性肝炎：酒精性肝炎早期可无明显症状，但肝脏已有病理改变，发病前往往有短期内大量饮酒史，有明显体重减轻，食欲不振，恶心，呕吐，全身倦怠乏力，发热，腹痛及腹泻，上消化道出血及精神症状。体征有黄疸，肝肿大和压痛，同时有脾肿大，面色发灰，腹水浮肿及蜘蛛痣，食管静脉曲张。从实验室检查看，有贫血和中性白细胞增多，红细胞容积测定（MCV）大于95FL,血清胆红素增高，可达17.1moL/L或以上，转氨酶中度升高，常大于2.0，测定线粒体AST（mAST）及其与总AST（tAST）的比值