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文档简介

1、负荷尿中维生素B2测定 荧光分析法1维生素B2（核黄素）黄色粉末状结晶体，水溶液呈现黄绿色荧光。酸性及中性环境中对热稳定，碱性环境中易被热和紫外线破坏代谢活性形式：黄素单核苷酸（FMN）， 黄素腺嘌呤二核苷酸辅酶（FAD）生理功能： 1、 参与体内生物氧化与能量代谢 2 、参与维生素B6和烟酸的代谢 3、其他生化反应，药物代谢等。2 维生素B2缺乏与过量维生素B2缺乏：口腔：口角炎，唇炎，舌炎，地图舌皮肤：脂溢性皮炎眼：对光有过度敏感的反应、视物模糊等其他影响：干扰体内铁的吸收、贮存及动员 影响生长发育一般核黄素不会引起过量中毒。8/12/20223食物中维生素B2来源8/12/20224实验

2、目的应用尿负荷试验评价人体维生素B2营养状况。8/12/20225实验原理 代谢角度：-水溶性维生素，在机体内存留时间短，满足机体需求后，多余部分迅速从尿中排出。-当日常摄入量达不到机体需要量时，摄入的维生素制剂将首先留在体内满足机体需要，从而尿中排出量较少，反之亦然。因此，可由尿中排出的维生素量来判断体内水溶性维生素的水平。 8/12/20226 方法角度 -荧光化合物，在一定波长的光波照射下发黄绿色荧光。 -荧光强度F与溶液浓度C成线性关系 F=KC8/12/20227仪器与试剂荧光光度计酸性水：取浓硫酸0.3ml，加蒸馏水稀释至200ml;核黄素储备液(已配好)：50g/ml。酸性水配制

3、，棕色瓶低温保存核黄素标准应用液：1g/ml。吸取核黄素储备液2ml，用酸性水稀释至100ml，棕色瓶低温保存，现用现配；低亚硫酸钠（荧光熄灭剂）8/12/20228实验步骤1 收集负荷尿 清晨排空小便后，空腹口服维生素B25mg，根据季节饮水200-500ml，收集服药后4h内所有尿液，并在瓶中加入1g左右草酸，使尿液保持在PH3-5，防止维生素B2降解，必要时还可加甲苯防腐。用量筒量取总尿液量并记录，做好标记后4短期保存，-20长期保存。2 测定前读取尿液PH值，确保PH=353 负荷尿维生素B2测定8/12/20229负荷尿维生素B2的测定标准管样品管尿样(ml) 1 1B2标准应用液(

4、ml) 1.5 0酸性水(ml) 7.5 9混匀荧光光度计读值（420、530nm） C A低亚硫酸钠 1平匙 1平匙混匀背景荧光值（420、530nm） D B8/12/202210实验计算及结果 A-B 总尿量(ml) 尿中核黄素含量（g）= (C-D)-(A-B) 内标核黄素量（g） 分析用尿量(ml) F=KC C=F/K, K=F/C K= (C-D)-(A-B)内标核黄素量 缺乏（g）不足（g）正常（g）充裕（g）400400 799800 130013008/12/202211注意事项避光操作，酸性体系，迅速操作；低亚硫酸钠不能加入过多，否则影响吸光值，加入后必需立即读数，否则维生素B又会被空气氧化成荧光型；

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