新血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠主动脉斑块的形成及th fth失衡影响

1、Effect of Renewed Xuefuzhuyu Decoction on the formation of Aorticplaque and the imbalance of Th1/Th2 Cytokine in AtherosclerosisRatsSpeciality:Traditional chinese medicineAuthor: Wang YongTutor: Ji ZhongqiangAbstractObjective：To observe the effect of Renewed Xuefuzhuyu Decoction on theformation of A

2、ortic plaque and the imbalance of Th1/Th2 Cytokine in AS rats ,andresearch the mechanism of Renewed Xuefuzhuyu Decoction preventing AS.Methods： 65 SPF Wister male rats were randomly divided into five groups: Theblank group, model group, Chinese medicine in low dose group and high dose group,western

3、medicine group. Except the blank group, other groups were made into AS modelby feeding high-fat diet and injecting vitamin D3 into abdominal cavity. The drug wasgiven through irrigation stomach in each group. After 8 weeks ,IFN-r、IL-4 in serum wasmeasured by using ELISA, then the ratio of IFN-r / IL

4、-4 will be calculated. The intima andmedia thickness of Thoracic aortic was measured through Microscope, and then observethe change of Thoracic aortic pathology through microscope.Result：Xuefuzhuyu Decoction can decrease the thickness of the intima and mediaof Thoracic aortic ,can improve the Aortic

5、 pathology. Campared with the model group,thecontent of IFN-r in serum was reduced, and IFN-r in serum was increased. the function ofTh1 / Th2 cell offset to the Th2 .Conclusion ：Renewed XuefuZhuyu Decoction can inhibit the immuneinflammatory reaction in AS, prevent the formation of AS though regula

6、ting the functionimbalance of Th1/Th2 cell.cellsKey Wards：Renewed Xuefuzhuyu Decoction; Atherosclerosis; Th1 cells; Th2目录引言 . 1动物实验 . 3一、实验材料 . 3（一）实验动物 . 3（二）试验用药 . 3（三）主要试剂 . 3（四）主要仪器 . 3二、试验方法 . 3（一）实验分组 . 3（二）模型建立 . 4三、主要观测指标及测定方法 . 4（一）取材 . 4（二）IL-4 及 IFN-r 测定 . 4（三）观察动脉病理性改变及测量内膜及中膜厚度 . 4四、数据处

7、理与统计 . 5五、结果 . 5（一）内膜及中膜厚度对比： . 5（二）血清 IFN-r、IL-4 测定 . 6（三）各组治疗后 IFN-rIL-4 比值： . 6（四）观察动脉形态学改变 . 7讨论 . 9一、活血化瘀法防治动脉粥样硬化的确立 . 9（一）中医对动脉粥样硬化的认识 . 9（二）瘀血内阻、痰浊凝聚是 AS 发病之标 . 10（三）理气活血化瘀法是防治动脉粥样硬化的基本法则 . 10（四）活血化瘀法防治动脉粥样硬化与“治未病”理论. 11二、动脉粥样硬化大鼠模型的确立 . 12三、动脉粥样硬化免疫炎症的研究 . 13（一）细胞免疫 . 13（二）体液免疫和补体系统 . 14四、他

8、汀类药物对 AS 作用的研究 . 14（一）抗免疫炎症反应 . 14（二）抗氧化作用 . 15（三）其它作用 . 15五、新血府逐瘀汤的研究进展 . 15结语 . 18参考文献 . 19综附致述 . 22录 . 27谢 . 28引言动脉粥样硬化(Atherosclerosis ，AS)作为一种全身性疾病，病理变化主要累及大、中型动脉，引起心脏、脑组织等重要器官的血液供应，诱发冠状动脉粥样硬化性心脏病和脑卒中等心脑血管疾病，为我国居民死亡的主要原因之一。近年来较多研究证实 AS 是机体对动脉内膜损伤做出的炎症纤维增生性反应，病变形成过程中涉及多种免疫炎症反应，多种免疫细胞(巨噬细胞、T 细胞)和

9、细胞因子参与了疾病的发生+ +类异源性群体，受抗原刺激后在不同的细胞因子作用下可分化为不同的亚群，包括辅助性 T 细胞 1（Th1）和辅助性 T 细胞 2（Th2），以及新近发现 Th17 细胞和调节性 T细胞(Treg)。Th1 细胞介导的免疫反应具有促进 AS 发生和发展的作用，Th2 细胞介导的免疫反应具有抗 AS 作用【1】。Th1 细胞分泌的 IFN-r 可促进 Th1 细胞的进一步分化，产生更多的 Th1 细胞，同时还能抑制 Th2 细胞的增殖。相反，Th2 细胞分泌的 IL-4和 IL13 可促进 Th2 细胞的分化，同时抑制 Th1 细胞的增殖。正常情况下，Th1/Th2细胞存

10、在着网络调节，细胞免疫功能趋于动态平衡。已有研究证明 AS 的发生和发展过程中 Th1/Th2 的功能失衡起着重要的作用。AS 的中医病理机制较为复杂，涉及精、气、血、津液的代谢失常，脏腑功能失调而形成的瘀血、痰浊等，属于本虚标实之证，本虚以气虚为主，标实则以瘀血内停、痰浊凝聚为主。痰瘀又可因气的病变互相转化。痰性粘滞，易于阻碍气机，气机不畅，血液运化失常，停而为瘀，由痰致瘀；瘀血易于阻滞气机，滞涩脉道，气机不利则津液运化失常，化为痰浊，最终形成痰瘀互结。大量的研究证明活血化瘀法可以通过不【2-4】。“治未病”的思想来自于黄帝内经，内涵主要包括两个方面：未病先防与已病防变。AS 引起的心脑血管

11、疾病为我国居民死亡的主要原因，但目前对 AS 的防治主要从合理饮食、适当运动、戒烟、戒酒、降低血糖血脂等方面，所使用药物主要为他汀类及抗血小板药物，从临床上观察应用以上手段来防治 AS 尚不能达到很好的效果。目前大量研究证实他汀类药物除降脂外，主要从抑制 AS 形成过程中的免疫炎症来发挥作用【5】，但此类药物引起的肝肾功能及肌肉等的损害日益受到人民的关注，同时也限制了此类药物的广泛应用。1和发展，其中 CD4 T 细胞在动脉粥样硬化形成过程中起到重要作用。CD4 T 细胞是一同途径来防治动脉粥样硬化的发生和发展基于以上原因，我们可以看出中医药在此有较明显的优势，基于此本课题旨在研究新血府逐瘀汤

12、对维生素 D3 腹腔注射联合高脂饲料喂养复制的 AS 大鼠模型主动脉斑块形成的影响，检测 IFN-r、IL-4 含量及 IFN-r 与 IL-4 的比值反映 Th1 和 Th2 在 AS大鼠中的失衡表达，并观察新血府逐瘀汤对 Th1/Th2 细胞功能失衡的影响，为临床上用新血府逐瘀汤防治动脉粥样硬化提供新的证据，并为活血化瘀法防治动脉粥样硬化提供新的依据。2动物实验一、实验材料（一）实验动物SPF 级雄性 wistar 大鼠，体重(2005)g，购于山东鲁抗医药股份有限公司，动物合格证号：slxk 鲁 20080002。符合一级实验动物质量标准。（二）试验用药1.中药：新血府逐瘀汤由生地 9g

13、、桃仁 12g、红花 9g、赤芍 6g、川芎 5g、当归9g、牛膝 9g、枳实 6g、生山楂 6g、泽泻 9g、首乌 9g 组成，上述药物由青岛市海慈医疗集团药房提供。中药低剂量组生药浓度为 0.6g/ml，中药高剂量生药浓度为1.2g/ml。按处方比例称取中药材，浸泡 23 小时，共煎煮二遍，每遍煮 30 分钟，分别过滤煎液，合并两次煎液备用(含生药 0.6g/m1)。高剂量组在此基础上稀释一倍。2.西药：注射用维生素 D3（上海通用制药股份有限公司,国药准字 H31021404，生产批号： 101003） 阿托伐他汀钙（立普妥 ）（辉瑞制药有限公司,国 药 准 字J20070061，生产批

14、号 013211k）3.大鼠高脂饲料：将 1胆固醇、0.5胆酸钠、0.1甲巯咪唑、5猪油、93.4为普通饲料搅拌均匀后烘干。（由青岛市海慈医疗集团制剂室制备）（三）主要试剂IL-4 及 IFN-r 试剂盒（美国 R&D Systems 公司，进口分装,批号 20110901A）（四）主要仪器RT-6000 酶标分析仪，深圳雷杜生命科学有限公司；CR-312 高速离心机，法国安莱公司生产；LEICA ASP 300 全自动组织脱水机，德国徕卡公司生产；LEICA EG 1160 石蜡包埋机，德国徕卡公司生产；LEICA RM 2135 轮转切片机，德国徕卡公司生产；OLYMPUS CX41 光学

15、显微镜，日本奥林巴斯公司生产。二、试验方法（一）实验分组选用健康成年 SPF 级雄性 Wister 大鼠 65 只，体重(2005)g，随机（采用随机3数字表法）分为五组，每组 13 只：空白组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组、西药组。中药组给予中药灌胃。西药组给以阿托伐他汀加蒸馏水稀释后灌胃。空白组及模型组蒸馏水灌胃。药物组具体给药量分别为中药低剂量组（9g/kg.d）、中药高剂量组（18g/kg.d）、 西药组(2mg/kg.d)。每周称重 1 次，根据体重调整用药量。（二）模型建立【6】对照组大鼠喂食普通饲料；模型组及药物干预组大鼠则从实验第一天开始即喂食高脂饲料，并于实验开始时腹腔

16、注射维生素 D3(每次注射 17.5 万 IUkg ,隔 2 d 注射一次，共注射 4 次)。整个试验周期为 8 周。三、主要观测指标及测定方法（一）取材：全部大鼠喂养 8 周，于最后 1 次给药后禁食 12 小时，10%水合氯醛（4.5 mL/kg）麻醉大鼠，切开胸腹，腹主动脉取血 3mL，然后游离胸腹主动脉全长（从胸主动脉弓到腹主动脉分叉），剥离外膜脂肪组织，取一段胸主动脉 3-5 cm，生理盐水冲洗，置于 10中性缓冲福尔马林液(PH=7.2)中固定。（二）IL-4 及 IFN-r 测定：将血液离心后取血清，按试剂盒说明步骤用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中IFN-r、IL-4 水平的变化。

17、（三）观察动脉病理性改变及测量内膜及中膜厚度1.病理切片：取胸主动脉长约 5 mm，脱水并透明 15 小时，常温下石蜡包埋，冷冻后连续切片，切片厚度约 5um，常规贴片、脱腊、HE 染色，具体步骤：(1)石蜡切片二甲苯 I 脱腊 l015 分钟。(2)二甲苯 II 脱腊 l015 分钟。(3)无水乙醇 5 分钟。(4)95乙醇 5 分钟。(5)80乙醇 5 分钟。(6)自来水冲洗 1 分钟。(7)蒸馏水洗 1 分钟。(8)苏木素染液 515 分钟。(9)自来水冲洗 15 分钟。4(10)分化液分化数秒至数分钟。(11)自来水冲洗 l3 分钟。(12)返蓝液返蓝 30 秒1 分钟。(13)自来水

18、冲洗 l5 分钟。(14)伊红染液 515 分钟。(15)自来水冲洗 l5 分钟。(16)80乙醇脱水 30 秒。(17)95乙醇 I 脱水 1 分钟。(18)95乙醇 II 脱水 l3 分钟。(19)无水乙醇 I 脱水 25 分钟。(20)无水乙醇 II 脱水 25 分钟。(21)二甲苯 I 透明 25 分钟。(22)二甲苯 II 透明 25 分钟。(23) 凉于、中性树胶封片，顺序编号、贴号。2. 图像分析：光镜下观察动脉内膜斑块形成情况，用 Image Tool 图像分析仪分别测量胸主动脉内膜和中膜厚度。四、数据处理与统计采用 spss13.0 统计软件进行分析，所有数据用均数标准差（x

19、s）表示，统计指标均进行正态性分布及方差齐性检验，多组间比较如方差齐用方差分析，方差不齐用近似 F 检验，两组比较用 LSD 检验，P0.05 表示有统计学意义。五、结果（一）内膜及中膜厚度对比：与空白组相比，模型组的主动脉内膜及中膜厚度增高，差异具有统计学意义(PO.01)。与模型组相比，西药组、中药低剂量组、中药高剂量组内膜及中膜厚度降低，差异具有统计学意义(PO05)；中药高剂量组与中药低剂量组内膜及中膜厚度相比，差异有统计学意义(P0.05)；中药高剂量组与西药组相比，内膜厚度无统计学意义（P=0.063），中膜厚度有统计学意义（P0.05）（见表 1）5表1主动脉内膜及中膜厚度比较（

20、xs,um）组别空白组例数12内膜厚度7.10.91中膜厚度47.83.9模型组西药组中药低剂量组11131017.21.410.01.315.51.794.72.457.53.478.23.2中药高剂量组1211.11.360.34.4注：与空白组相比， P0.01；与模型组相比， P0.05；与中药低剂量组相比，P0.05，P0.05100908070605040302010空白组模型组西药组中药低剂量组中药高剂量组0内膜厚度中膜厚度（二）血清 IFN-r、IL-4 测定与空白组相比，模型组血清中 IFN-r 升高、IL-4 降低，差异具有统计学意义（P0.01）；与模型组相比，西药组、中

21、药高剂量组、中药低剂量组血清中 IFN-r 水平降低、IL-4 水平升高，差异具有统计学意义(P0.05)；中药高剂量组与中药低剂量组相比 IFN-r、IL-4 水平差异具有统计学意义（P0.05)。（见表 2）（三）各组治疗后 IFN-rIL-4 比值：与空白组相比，模型组血清中 IFN-r/IL-4 升高，差异具有统计学意义（P0.01）；与模型组相比，西药组、中药高剂量组、中药低剂量组血清中 IFN-r/IL-4 降低，差异具有统计学意义(P0.05)；中药高剂量组与中药低剂量组相比 IFN-r/IL-4 水平差异具有统计学意义（P0.05)。（见表 2）表2血清 IL-4、IFN-r

22、含量及 IFN-rIL-4 比值的比较(xs,ng/l)组别空白组例数12IL-4210.899.58IFN-r257.0530.7IFN-IL-41.210.12模型组西药组1113117.3918.47178.9618.08388.5119.58292.0536.573.360.361.630.14中药低剂量组10148.679.04336.5113.272.270.15中药高剂量组12174.6920.61290.6921.071.670.11注：与空白组相比， P0.01；与模型组相比， P0.05；与中药低剂量组相比，P0.0540035030025020015010050空白组模型

23、组西药组中药低剂量组中药高剂量组0IL-4IFN-r中药高剂量组中药低剂量组西药组模型组空白组IFN-r/IL-400.511.522.533.54（四）观察动脉形态学改变1.空白组: 光镜下可见动脉血管内膜、中膜及外膜结构完整，动脉内皮细胞无增生、脱落，内膜内无泡沫细胞、淋巴细胞聚集，未见血管平滑肌增生。2.模型组: 光镜下可见动脉内膜显著增厚，血管内皮细胞脱落；内膜可见大量泡沫细胞及淋巴细胞聚集，血管平滑肌明显增生，动脉壁各层分界不清。3.中药低剂量组: 光镜下可见动脉内膜部分区域增厚，内有数量不等泡沫细胞沉7积，部分区域内皮细胞脱落，结构尚完整；动脉壁各层分界界较清，平滑肌轻度增生。4.

24、中药高剂量组: 镜下可见动脉内膜增厚，内膜中见少量泡沫细胞堆积，比模型组明显减少；动脉内膜部分区域欠光滑，少量内皮细胞脱落，动脉壁各层分界尚清；血管平滑肌轻度增生。5. 西药组：病理形态改变基本同中药高剂量组。8讨论一、活血化瘀法防治动脉粥样硬化的确立（一）中医对动脉粥样硬化的认识由于在中医的古籍中并有动脉粥样硬化（AS）的具体论述，在 AS 进行中医分析时我们可以根据其导致的疾病，如胸痹、真心痛、脱疽、中风等其进行研究。 AS 的中医病机涉及多个方面，包括精、气、血、津液的代谢失常，气血阴阳的亏虚，脏腑功能失调而形成的瘀血、痰浊等，概括来说 AS 属于本虚标实之证，本虚以气虚为主，标实则以瘀

25、血内停、痰浊凝聚为主。（1）气、血、阴、阳的亏虚为 AS 发病之本气虚与瘀血、痰浊：气与血均为人体维持生命活动的基本物质，素问、调经论言“人之所有者，血与气耳”，二者彼此之间具有密切的关系。气是血生成和运化的动力，血是气的化生基础物质和载体，概括起来即为杨士赢所讲的“气为血之帅，血为气之母”。宗气由水谷之气和自然界的清气构成，积于胸中。灵枢客邪篇说:“宗气积于胸中，出于喉咙，以贯心脉，而行呼吸也。”可见宗气有推动血行的作用。气虚与血瘀之间存在逻辑辨证关系。一方面气虚则无力行血，血脉滞涩，而产生血瘀的病变；另一方面血瘀日久，脉络不通，血亏气耗，也可致气的亏损。气是推动津液在体内正常输布运行的动力

26、，津液的输布、排泄等代谢活动都离不开气的推动作用和升降出入的运动。如若气虚，推动作用减弱，气化无力进行，都可以引起津液的输布、排泄障碍，并形成痰、饮等病理产物。血虚与瘀血、痰浊：血为循行脉中而富有营养的精微物质，具有濡养机体各脏腑、经络、形体、关窍的作用。气血二者，气属阳，血属阴，二者具有相互滋生的关系。血虚导致血瘀可从两个角度来理解：（1）血虚日久可致气虚，气虚无力行血可致血瘀；（2）血虚则脉道不充，失于濡养，脉络不通，血行滞涩，易于凝聚成瘀。灵枢天年篇曰：“血气虚,脉不通。”张景岳云：“血盈则经脉自至,血既枯竭而经闭不行。”【7】临症指南医案亦有“血虚络涩”的记载。此外，瘀血阻滞脉络，血行

27、失畅，脏腑失于血液濡养，也必然影响其化生血液的功能，久而产生血虚。四物汤出自于仙授理伤续断秘方，主治“营血虚滞证”，即为血虚致瘀的最好实证。血虚则脏腑失于濡养，脾失健运、肺失宣降，津液代谢失常，停而为痰、为饮。临床上有些9医家从血虚痰浊来论治偏头痛，治疗以养血化痰为主，取得较好的疗效【8】。阴虚与血瘀、痰浊：血液由营气和津液构成，津液在阴阳属性上类属于阴，此处所言“阴虚”主要指津液亏虚。中医中讲“津血同源”，二者可以相互转化，故“夺血者无汗，夺汗者无血”。“阴虚致瘀”在病机上与血虚致瘀有相似之处，阴液不足可致血液黏滞，同时阴虚日久则损及阳气，阳气亏虚，无力温运血液，血行迟缓，停而为瘀。参照阴虚

28、血瘀理论，临床上医家采用养阴活血法治疗中风、胸痹等【9】日久可致阴虚火旺，火旺可煎灼津液为痰浊，阴虚痰热证在肺系病症中较为多见，如肺积。阳虚与血瘀、痰浊：阳虚导致血瘀从脏腑而言主要在于心与肾。“心为阳脏，而主通明”，“心藏君火”，可见心脏以阳气为用。血液之所以能在脉中循环不休，全赖于心阳的推动和温煦，正如任应秋先生所说“心的功能首先是主阳气，其次是主血脉”【10】。若心阳不足，无力推动血液在脉道中运行，则血行瘀滞。肾先天之本，内藏元阴元阳，肾阳充足，则上资心阳，以助血行。胸痹即可从“阳虚血瘀”的角度来论治。阳虚导致痰浊则主要脏腑在脾肾，脾阳亏虚，失于健运，肾阳不足，蒸化失常，津液不归正化，化为

29、痰浊。（二）瘀血内阻、痰浊凝聚是 AS 发病之标AS 多见于老年人。老年人肾气肾精不足，先天之本亏虚；饮食不节日久伤脾，脾失健运，后天之本失养；加之久病、劳倦耗伤正气。本虚既成，脾肾亏虚虚则津液失于运化，停而化为痰浊；气虚则无力推动血行，血行滞涩，停而为瘀。津血运行输布全赖气的推动，若气滞、气虚推动无力，则津液代谢失常，易凝聚、停滞而为痰浊。“气为血之帅”，气行则血行，故气虚、气滞均可导致血行瘀滞。其次，痰瘀又可因气的病变互相转化。水液代谢失常化为痰浊停留于体内，可随气升降，内达五脏六腑，外至经络诸窍。痰性粘滞，易于阻碍气机，气机不畅，血液运化失常，停而为瘀，由痰致瘀。故素问、调经论曰：“孙道

30、水溢，则经有留血。”瘀血易于阻滞气机，滞涩脉道，气机不利则津液运化失常，化为痰浊，最终形成痰瘀互结。对痰瘀之间的相互影响，诸病源候论曰：“诸痰者，此由血脉壅塞，饮水积聚而不消散，成痰也”。唐容川血证论对痰血的关系也有明确的论述：“血积既久，亦能化为痰水”。（三）理气活血化瘀法是防治动脉粥样硬化的基本法则阴阳学说中认为“血”与“气”二者，血属阴，气属阳，相互之间关系密切。 灵10。阴虚枢营卫生会:“血之于气，异名而同类焉。” 生理上，血为气化生之源，气则可推动、固摄、化生血液。在病理上，气虚则血少，气滞则血瘀。气的升降出入运动正常，对保证血液的产生、运行和功能的发挥都有着重要意义，气机失常则血液

31、停而为瘀。血证论川说:“凡有所疲，莫不壅塞气道阻滞生机。”“故血之运，气运之，即瘀血之行，亦气之行，是气行而血不自留也。”现代研究也证实冠心病气滞血瘀型患者血液流变学指标明显增高【11】疏泄，调畅气机。清末唐容川言“肝属木，木气冲和条达，不致遏郁，则血脉通畅”。气滞血瘀可出现在许多疾病的不同阶段，二者往往同时并存，互为因果，表现为多种疾病的不同发展阶段中同时出现气滞和血瘀症状。AS 的中医病机中瘀血的形成为重要的致病因素，已有大量的临床研究证实理气活血化瘀法可以通过多种机制来干预AS 的发生与发展【12-14】。新血府逐瘀汤由血府逐瘀汤加减而成，偏重于行气活血，体现出活血化瘀与疏肝理气的良好组

32、合，按照“气行则血行”的理论，适用于血瘀证或气滞血瘀证。该方经临床证实对冠心病有较好的临床疗效。（四）活血化瘀法防治动脉粥样硬化与“治未病”理论“治未病”思想是中医理论的核心内容，东汉孙思邈在千金要方 中强调“上医医未病，中医医欲起之病，下医医已病之病”，可见“治未病”在中医治病的重要性。“治未病”理论早在黄帝内经就有论述，素问.四气调神大论言“是故圣人不治已病治未病，不治已乱治未乱，此之谓也夫病已成而后药之，乱已成而后治之，譬犹渴而穿井，斗而铸锥，不亦晚乎！”之后经过众多医家的不断延伸，其内涵也得到了扩展。张仲景在伤寒论中言“若人能养慎，不令邪风干忤经络”，并阐述了应通过注意调摄饮食、导引、

33、吐纳、针灸、膏摩等途径已达到“正气存内，邪不可干”的状态。金匮要略中言：“夫治未病者，见肝之病，知肝传脾，当先实脾”。概括起来说“治未病”理论主要包括两个方面：未病先防、既病防变，在具体措施上则强调调摄精神、注意饮食起居、适应四时阴阳、锻炼身体、药物预防等。近年来有人提出用中医“治未病”理论作为指导来构建中医特色的 AS 的健康管理模式，其中强调 AS 的三级预防，包括一级：未病先防，养生保健；二级：已病早治，截断病程；三级：既病防变，防止 AS 性疾病的发生。”可见“治未病”理论在 AS 的防治过程中大有可为。中医理论认为在 AS 的形成过程中瘀血既是致病因素，又是病理产物。活血化瘀法的应用

34、不仅可以消除已成之血瘀，又可截断血瘀的发展过程。可见活血化11。中医学认为气滞血瘀在脏腑上主要在肝，肝主瘀法防治 AS 符合中医的“治未病”理论。二、动脉粥样硬化大鼠模型的确立在 AS 动物模型的复制中，研究者尝试用多种动物来复制模型，报道中常用的实验动物涉及家兔、大鼠、小型猪等，由于大鼠具有动脉粥样硬化的特性，饲养方便，价格低廉，造模成功率较高，因此大鼠成为研究者复制 AS 模型最常用的动物。在造模方法上研究者进行了多种尝试，具体方法涉及以下几个方面：（1）通过长期喂养高脂饲料来复制 AS 模型。高脂饲料的配方中通常加入较多的动物脂肪以提高胆固醇的摄入量，但是由于大鼠没有胆囊，相应的胆固醇的

35、吸收量就会随之下降。通过研究发现，在高脂饲料中加入胆酸钠及甲巯咪唑，胆酸钠可以促进胆固醇的吸收，甲巯咪唑可以通过抑制甲状腺的功能来降低胆固醇的降解，从而使 AS 大鼠模型的复制成功率得到提高，但此种通常需要较长的周期，而且造模成功率较其他的方法低。（2）利用基因敲除或转基因动物制备 AS 模型。目前最常用的是 apoE 基因敲除大鼠模型，apoE基因的敲除将使大鼠肝脏摄取富含甘油三酯的脂蛋白障碍，甘油三酯脂蛋白在体内的大量存留，从而导致 AS 的形成。（3）高脂饲料加维生素 D3。通常认为维生素 D3 可导致血钙升高，破坏动脉管壁内皮的完整性，有利于血浆脂质对管壁侵入和损伤，从而形成动脉粥样硬

36、化。刘磊，焦向英等采用高脂饲料及维生素 D3 联合应用建立大鼠15脂饲料加手术。单纯利用高脂饲料来造模通常需要较长的时间，为了进一步的缩短试验周期，有的研究者就在高脂饲料导致血脂紊乱基础上加手术直接损坏血管内皮来加速致 AS 的形成。王庆林，陈文捷等采用高脂饲料喂养加血管钳夹术的方式造模，发现此种方法可以明显的缩短试验周期，提高造模成功率【16】法的比较，可以发现采用基因敲除的方法来造模，所需要的操作技术难度较大，消费较高；单纯喂养高脂饲料所需时间较长，成功率也较低；手术造模会增加动物的死亡率。高脂饲料加药物的方法因其方法简单，造模成功率高，消费较低，成为研究者的首选。本实验参照章义立，周秀云

37、等的研究采用高脂饲料喂养联合维生素 D3 腹腔注射的方法来复制大鼠 AS 动物模型，在高脂饲料中加入胆酸钠、甲巯咪唑以促进胆固醇的吸收；采用分次腹腔注射维生素 D3，造成血液 Ca 超载，从而破坏动脉管壁内皮的完整性，同时也克服了一次性腹腔注射维生素 D3 死亡率高的缺点，于实验结束时发12动脉粥样硬化模型,发现 3 周后大鼠的动脉可见明显的动脉粥样硬化斑块【 】。 ）高（4。通过对以上几种造模方现模型组大鼠动脉内膜镜下可见 AS 斑块，动脉内膜及中膜厚度增厚证实 AS 模型造模成功。三、动脉粥样硬化免疫炎症的研究近年来许多研究表明，各种原因导致的免疫炎症损伤在 AS 的发病机制中占重要地位。

38、AS 是一个发生在血管壁的具有慢性免疫炎症反应特征的病理过程，是对血管内皮损伤做出的炎症纤维增生反应。在免疫炎症反应中，T 细胞亚群比例失衡、体液免疫功能亢进、补体系统处于活化状态及某些炎症因子、细胞因子及降解细胞外基质抑制其降解的酶水平的变化等都参与了炎症过程。（一）细胞免疫CD4+T 细胞是一类异源性群体，受抗原刺激后在不同的细胞因子作用下可分化为不同的亚群，包括 Th1 和 Th2，以及新近发现的辅助性 T 细胞 17（Th17）和调节性 T细胞(regulatory Tcells，Treg)。他们各自分别分泌不同的细胞因子，通过不同的途径发挥不同的免疫效应。研究显示在 AS 斑块中有较

39、多的 Th1 和 Th2 细胞。Th1 细胞主要分泌 IFN-r、IL-2、TNF-a 等与细胞免疫功能相关的细胞因子。已有众多实验表明，Th1 细胞介导的免疫反应具有促进 AS 发生和发展的作用。Th2 细胞可分泌 IL-4、IL-5、IL-10 和 IL-13，促进过敏反应和辅助 B 细胞产生抗体，与体液免疫功能相关。众多实验证明 Th2 细胞介导的免疫反应具有抗 AS 作用。这两类 T 细胞亚群具有相互调节的作用，它们可以相互抑制。Th1 细胞分泌的 IFN-r 可促进 Th1 细胞的进一步分化，产生更多的 Th1 细胞，同时还能抑制 Th2 细胞的增殖。相反，Th2 细胞分泌的 IL-

40、4和 IL-13 可促进 Th2 细胞的分化，同时抑制 Th1 细胞的增殖。正常情况下，Th1/Th2细胞存在着网络调节，细胞免疫功能趋于动态平衡。普遍认为 Th1/Th2 细胞出现功能失衡与自身免疫性疾病的发生有密切关系，已有研究发现，动脉粥样硬化的发生与Th1/Th2 细胞的失衡密切相关【17】要通过以下两种方式发挥抑作用。一方面，可通过分泌 IL-10、转化生长因子(TGF)-B、IL-4 等具有免疫抑制作用的细胞因子发挥节作用。另一方面，CD4+CD25+Treg 细胞主要是通过细胞与细胞直接接触来发挥抑制作用【18】。目前，Thl7 在 As 中的作用研究尚不透彻，已有动物实验研究表

41、明，IL-17 参与巨噬细胞的活化并能诱导其分泌蛋白水19细胞与 Th17 主要与斑块的不稳定性密切相关。由以上所述可以看出，Th1/Th2 细胞13。调节性 T 细胞可以抑制动脉粥样硬化的形成，主解因子，此外，Th17 分泌的 IL-17 可与 TNF-a 协同促进 AS 的发生发展【 】。调节性 T失衡在动脉粥样硬化的发生及发展过程中起着举足轻重的作用，而 IFN-r/IL-4 的比值可以反映 Th1 和 Th2 细胞的失衡表达。（二）体液免疫和补体系统临床及动物研究发现, 在 AS 形成过程中血液免疫球蛋白如 IgG、IgA、IgM 的含量会增高, 且有补体沉积, 这些都提示体液免疫功能

42、的紊乱和补体的激活在 AS 过程中发挥作用。动脉粥样硬化过程中 IgG、IgA、IgM 等免疫球蛋白及血浆脂蛋白可共同侵入血管内皮所致, 导致血管内皮受损。补体作为一种促炎因子可参与吞噬细胞对内皮细胞的附着及对 LDL 的吞噬和氧化过程，从而间接的起到促进 AS 的发展作用22。越来越多的免疫学、病理学、组织生物化学证据表明，免疫炎症反应是导致 As发生、发展及斑块不稳定性乃至临床心血管不良事件的重要原因。对于 AS 形成过程中免疫炎症反应的研究较多，涉及多个方面：（1）降低促发炎症反应的因素；（2）c反应蛋白(CRP)；（3）白介素（IL)；（4）CD40-CD40L 系统；（5）超氧化物歧

43、化酶(SOD)、丙二醛(MDA)；（6）体液免疫和补体系统；（7）基质金属蛋白酶(MMPs)；（8）核因子 KB(NFK B)；（9）细胞粘附分子；（10）清除氧自由基；（11）Th1/Th2 等。四、他汀类药物对 AS 作用的研究他汀类药物是近十几年开发的三羟基三甲基戊二酰辅酶 A(HMGCoA)还原酶抑制剂，能有效地降低 LDL-c，提高 HDL-c，经许多大型临床实验及动物实验证实其对AS 有较好预防和治疗作用，可以抑制大鼠主动脉动脉粥样硬化斑块的形成【21】。许多年以来，人们将他汀类对 AS 有较好预防和治疗作用单一归结于它的调脂作用。近来有研究发现除了调脂作用外，他汀类药物还有其他的

44、抗动脉粥样硬化作用。（一）抗免疫炎症反应近年来随着研究的逐渐深入，人们发现他汀类药物可以明显降低 AS 过程中的多种免疫炎症介质，如高敏 C 反应蛋白、丙二醛、超氧化物歧化酶等，通过这些途径来防治 AS。药红梅、吕吉元采用高脂饲料喂养方法复制 AS 模型，药物组大鼠给予阿托伐他汀进行灌胃治疗，发现阿托伐他汀可显著降低动脉粥样硬化大鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、TNF-、hsCRP 水平，及心肌 NFKB 的活化程度，证实阿托伐他汀除具有调脂作用外，还具有抗炎、抗氧化等抗动脉粥样硬化作用【22】。解学军、李光来等选取颈动脉粥样硬化患者 80 例，随机平分为对照组和试验组。分14别给予饮

45、食控制和阿托伐他汀治疗，随访 12 周，治疗前、治疗后检测血清 sCD40L和颈动脉彩超。结果显示治疗组治疗后 sCD40L 浓度水平显著低于治疗前水平(PO05)，彩超显示颈动脉斑块较前改善【23】。刘科卫，李晓燕等阿托伐他汀可以调节 Thl 和 Th2 亚群分化失衡，抑制炎性反应，提示他汀类药物对 ACS 患者有更广泛的保护作用【24】。（二）抗氧化作用有研究显示，他汀类药物可以抑制巨噬细胞表达清道夫受体，减少对 LDL 的摄取，抑制 LDL 的氧化，降低细胞因子如肿瘤坏死因子、白细胞介素、C 反应蛋白等的水平。章义利，周秀云等研究阿托伐他汀干预 AS 大鼠结果表明阿托伐他汀治疗前后比较差

46、异无统计学意义，但有提高机体 SOD 活力，降低 MDA 含量的趋势，研究显示 SOD 活性可反映机体清除氧自由基的能力，MDA 可反映机体受氧自由基损害的程度。阿托伐他汀具有独立于调脂外的抗炎、抗氧化等多方面的抗动脉粥样硬化作用。（三）其它作用他汀类药物还可以通过改善血管内皮细胞功能、抑制血管平滑肌细胞的增殖、诱导平滑肌细胞的凋亡和抗炎等调脂外的作用来防治动脉粥样硬化斑块的形成，减小斑块面积，稳定斑块，阻止 AS 斑块的进一步发展，可以很好的降低临床心血管病事件的发生率，降低死亡率。五、新血府逐瘀汤的研究进展新血府逐瘀汤（生地 9g、桃仁 12g、红花 9g、赤芍 6g、川芎 5g、当归 9

47、g、牛膝9g、枳实 6g、生山楂 6g、泽泻 9g、首乌 9g）为血府逐瘀汤与通脉降脂 l 号方(我院自制方)加减组方。通脉降脂 1 号方由首乌、泽泻、山楂、茵陈组成，具有祛痰湿、活血化瘀的功效。自 90 年代起老师先后对通脉降脂 1 号进行了动物实验及临床实验研究，证实其对降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白，升高高密度脂蛋白，抑制血小板聚集均有良好作用【25-26】。新血府逐瘀汤方中以桃仁、红花、赤芍、川芎、牛膝、山楂活血化瘀；生地、当归、首乌养血活血；枳实行气、川芎行气活血，泽泻利湿化痰，体现出活血化瘀与疏肝理气的良好组合，按照“气行则血行”的理论，该方重在活血化瘀、调达气机、行气止痛，

48、适用于血瘀证或气滞血瘀证，具有行气活血、补肾养血、利湿化痰兼清热凉血的作用。该方经临床证实对冠心病有较好的临床疗效。研究显示红花可经过提高机体内 NO 和降低 ET 的水平、抗 PAF 等途径起到抗炎症反应15的作用【27】；丹参可以通过抗氧化、抑制血管平滑肌增值抑制 AS 的形成。研究显示川芎提取物川芎嗪可以通过提高血管内皮细胞抗氧化酶 SOD、GSHPx 的活性抑制 OXLDL 诱导的血管内皮细胞诱导的损伤，从而起到很好的抗 AS 的作用【28】。 大量研究证实活血化瘀类中药不仅具有改善血液高凝状态，还可以通过抗脂质氧化损伤作用、干预内皮细胞凋亡等途径来保护血管内皮，而血管内皮的损伤为动脉

49、粥样硬化形成的始动环节，从而起到抗 AS 的作用。血府逐瘀汤血可以通过降低 AS 大鼠血清非对称性二甲基精氨酸水平抑制 AS 的形成。现已经对新血府逐瘀汤进行了多项临床及动物实验，主要涉及以下几个方面：（1）新血府逐瘀汤可降低高血压大鼠血浆 D 一二聚体(DD)、血管性假性血友病因子(vWF)、内皮素(ET)水平，在改善内皮功能及高血压血栓前状态方面作用明显【29】。（2）新血府逐瘀胶囊对不稳定型心绞痛血瘀征象及OXLDL、hsCRP 均有改善作用，其可抑制脂质过氧化、抑制血管内皮炎症反应、改善内皮功能【30】。（4）新血府逐瘀软胶囊可以改善高血压患者内皮功能，降低氧化低密度脂蛋白，对于保护高

50、血压病患者靶器官功能， 延缓高血压病的发展进程， 改善心肌重构可能有极其重要的意义【31】。（5） 新血府逐瘀软胶囊可以改善冠心病患者血瘀征象，降低外周血 OX40L 及 hs-CRP 水平,提示其可能通过降低炎症反应、稳定动脉粥样硬化斑块来降低心血管事件的发生率【32】。总结来说本方有：(1)保护血管内皮功能的作用；(2)促进血管新生；(3)改善血液高凝状态；(4)降血脂及抗炎；(5)稳定 AS 斑块等功效。 随着研究的逐渐开展，新血府逐瘀汤在临床上的应用范围也越来越广，在多种心血管疾病如高血压、冠心病、肥厚性心肌病、心脏神经官能症等中都得到了很好的应用，无论功能性还是器质性改变，只要是属于

51、血瘀证范畴，采用本方辩证加减进行治疗，常收到满意疗效。在上述理论研究的基础上，结合临床疗效观察，本实验研究旨在观察新血府逐瘀汤对 AS 大鼠主动脉斑块形成的影响及探讨其防治机制。研究显示新血府逐瘀汤可下调实验性 AS 大鼠胸主动脉内膜及中膜增厚，差异有统计学差异（P0.05），可以使AS 血清中 IFN-r 含量降低、IL-4 含量升高，Th1/Th2 细胞功能失衡向 Th2 偏移,抑制AS 免疫炎性反应，预防 AS 的形成。结果显示与空白组相比，模型组的主动脉内膜及中膜厚度增高明显，模型组血清中 IFN-r 升高、IL-4 降低，IFN-r/IL-4 升高，差异具有统计学意义（P0.05），

52、两组胸主脉内膜厚度相比 P 值为 0.063，中膜厚度 P 值为 0.046。显微镜下观察两组之间无明显差别，均较模型组显著改善，可见二者疗效相当。而中药高剂量组在下调内膜及中膜厚度方面与中药低剂量组相比差异就有统计学意义，其 P 值小于 0.05；中药高剂量组与中药低剂量组相比，血清IFN-r、IL-4 水平及 IFN-r/IL-4 比值差异具有统计学意义（P0.05）；镜下观察示高剂量组较低剂量组改善，提示新血府逐瘀汤抗大鼠 AS 的作用具有一定的剂量依赖性。通过研究结果可以证实 Th1 与 Th2 的功能失衡在 AS 的重要机制之一，通过改善二者功能失衡新血府逐瘀汤具有较好的防治 AS

53、形成的作用。17结语通过对动脉粥样硬化中医及西医理论的学习，相关文献的回顾和整理，在导师多年临床实际应用基础上，提出了瘀血内停是 AS 的病机关键，并认为理气活血化瘀法是防治 AS 基本治法。在此理论的指导下，对新血府逐瘀汤防治 AS 进行了动物实验研究。结论如下：1.瘀血内停是 AS 的关键病机之一，理气活血化瘀法是防治 AS 的基本法则。采用新血府逐瘀汤防治 AS 既有充足的中医理论依据，又有充分的现代科学证据，同时与临床紧密结合，值得进一步研究。2. 新血府逐瘀汤可通过调节细胞中 T 细胞亚群 Th1/Th2 细胞的分化失衡，抑制AS 过程中的免疫炎性反应，预防 AS 的形成。选用 SP

54、F 级雄性 Wister 大鼠分为空白组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组、西药组。采用高脂饲料喂养联合维生素D3 腹腔注射的方法复制 AS 模型。8 周后腹主动脉取血测量大鼠血清中细胞因子 IFN-r及 IL-4 的含量，计算 IFN-r/IL-4 的比值。取胸主动脉 3-5cm,经固定、染色后，镜下观察胸主动脉病理学改变，并测量其内膜及中膜的厚度。结果显示模型组相比，药物组主动脉内膜及中膜厚度下降，差异有统计学意义（P0.05），大鼠血清中 IFN-r含量降低、IL-4 含量升高，IFN-r/IL-4 比值降低，Th1/Th2 细胞功能失衡向 Th2 偏移，差异有统计学意义（P5ngL

55、者 6 个月病死率明显增高；IL-10 可抑制炎性细胞粘附，浸润，还抑制各种炎症因子的合成与分泌，是理想的炎症免疫与抑制因子，具有稳定粥样斑块的作用；IL-18 在动脉粥样硬化形成和斑块破裂过程中起重要作用，是冠心病患者心源性死亡的强有力的独立预测因子；CD40-CD40L 系统是斑块不稳定的标志，可识别死亡以及心肌梗死复发风险及危险分层。活血化瘀方药可使 ACS 患者血清 sCD40L 水平明显降低，对斑块炎症反应有类似他汀类药物的抗炎作用，从而有利于动脉粥样硬化斑块的稳定，对 ACS 可能有防治作用【8】超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)：研究表明，高脂血症是目前公认的最重要的致

56、AS 的危险因素之一，在此过程中，TC 起着重要作用，而 LDL-C 是 TC 的主要23。b, 胰岛素抵抗（IR）。在胰岛素抵抗时，细胞于减少或抑制动脉粥样硬化的形成。携带者，特别是氧化修饰后的 LDL 可导致 VEC 的损伤、坏死。脂质过氧化产物丙二醛(MDA)可修饰 LDL，导致 LDL 变性生成 ox-LDL，ox-LDL 不能被正常的 LDL 受体识别，但可被巨噬细胞吞噬，造成胆固醇在细胞内大量堆积，形成泡沫细胞，从而导致 AS。而机体内的 SOD，可清除氧自由基，减少 MDA 的产生，抑制上述过程的进展。基质金属蛋白酶(MMPs):基质金属蛋白酶是酶活性依赖锌离子的蛋白酶超家族。动脉粥样硬化(As)形成的过程也是细胞外基质重构的过程，MMPs 是降解细胞外基质最重要的酶类。在生理状态下，MMPs 降解基质并促进新生基质合成，维持、稳定及均衡血管纤维结缔组织重塑，保障血管壁的完整性。在