高效液相色谱仪的使用及运行性能测试

1、高效液相色谱仪的使用及运行性能测试实验目的. 了解高效液相色谱仪的基本原理和结构。？.掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。.掌握测试高效液相色谱仪运行性能的指标和方法，验证各部件及整机的性能。实验器材？高效液相色谱仪，LC-ATvp高压泵、SCL-10Avp程序控制器、SPD-M10Avp 二极管阵列检测器、CTO-10Asvp 温度控制器。Shim-packVP- ODS C18 150别析柱、20川进样器、AS3210型超声波发生器。无水甲醇和双蒸水各500ml （脱气处理）、蔡、咖啡因（均为色谱纯或分析纯）。实验原理高效液相色谱法是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入装

2、有填充剂的色 谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置 记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本 法具有分离性能高、分析速度快的特点。描述高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。LC-2010和Agilent1100 型为单泵型，适于单一流动相的洗脱；LC-10Avp 型为双泵型高效液相色谱仪，适于程序洗脱。单泵型高效液相色谱仪的结构示意见图9-1L压力般曲II怖器自朝就编5实验步骤？（一）高效液相色谱仪的基本操作步骤（以岛津 LC-10A为例）.依照顺序开机，自检

3、完毕后进入操作模板；.设定洗脱程序、检测器的条件及测定报告；.完成实验过程，打印试验结果，依照顺序关机。（二）性能测试高效液相色谱仪的性能检查分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证 ,、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。验证 |目的是检查并确认高效液相色谱仪运行性能是否符合要求。.验证标准按照中华人民共和国国家计量检定规程，高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的 合格标准见表9-1。表9-1高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的合格标准验证部件验证项目合格标准流量设定值误差Ss输液泵流量稳定性误差SR柱温箱设定值误差ATs 2C柱温箱rc2%2X +0AU

4、1避的甲酉!溶液）5XRSD0%SS、流量稳定性误差SR的检定柱温箱控温稳定性Tc自动进样器进样量准确度误差基线噪声检测器最小检测浓度基线漂移整机性能定性测量重复性误差.验证步骤（1）输液泵泵流量设定值误差将表9-2流量、次数、收集时间表流量设定值（mL/min ）测量次数3 3 3流动相收集时间（min ） 10 55区=卬.一艮)井，100臀(1).式在3sl流量设定值误差();也 流量设定值(mL垃小)；S.流量稳定性误差(%); F：同一组测量值的算术平均值区.miniEim；同一组测量中流量最大值GnL. mirT”加；同一组测量中流量最小值(mL. min L) F F为流量实测值

5、(通mi-%其值由下式计臬 F=(MT*(3).其轧 帖；容量瓶+流动相的重量(g)i Wn容量瓶的重量(g)*jt：实验温度下流动相的密度(盛5”卜h收集流动相的时间(ininh(2)柱温箱拄箱温度设定值误爰工和拄温稳定性工的检定+，将数字温度计探头固定前璇箱内，选择35c和行C进行检定，按仪器说 明节操作，通电升温，待温度稔定后，记下温度计读数并开立凯1时，以后每隔 10血口记录一次读数，共计7次，求出平均值1平均值与设定值之差为7 次堞数中最大值与最小值之差为控温稳定性Tc，结|工_ . -中?(3)自动进样器进样量准确度误差的检定取进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动

6、进样器上让其进样 10次，每次50M。进样完成后再精密称定其重量，由重量差计算进样量准确度，结果 填入数据记录与处理的表16-5中。(4)检测器的检定的蔡/甲醇溶液进样20 M,记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高算按照下列公式计最小检测浓度CL。CL=(2X NdX C)/Hmm ；式中：CL:最小检测浓度，；Nd:基线噪声峰峰高，C:标准溶液浓度，；H:标准溶液峰峰高,mm o实验结果填入数据记录与处理的表 16-6中。(5)整机性能的检定C数据记录与处理将上述的实验数据记录于下列各表，并进行相应的数据处理，得出检定结论(1)输液泵泵流量设定值误差 SS、流量稳定性误差SR的检定表9-

7、3输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定结果仪型号：泵型号：流动相：色谱柱：鉴定日期：检定人：复核人：Fs1次 2次 3次 1次 2次 3次 1次 2次 3次W1W2tTpTFm=(W2- W1)/ p T tSS= (Fm - FS)/FS 乂 100%平均SSF=(Fm1+Fm2+Fm3)/3FmaxFminSR= (Fmax Fmin)/F x 100%此项检定结论:(2)柱温箱柱箱温度设定值误差 ATS和控温稳定性TC的检定表9-4柱温箱柱箱温度设定值误差 ATS和控温稳定性TC的检定结果仪型号：柱温箱型号：数字温度仪型号：T 设定35 C 45 C时间读数时间读数稳定时

8、第1次第2次第3次第4次第5次第6次第7次T平均T最大T最小A Ts=T均-T设定Tc =T最大-T最小此项检定结论：(3)自动进样量准确度误差的检定表9-5自动进样量准确度误差的检定结果液相色谱仪型号:自动进样器型号:检定温度:进样后进样瓶加水的总重水的密度P进样量准确度误(g)W2(g)(g/ml)差(%)进样量准确度误差=(W1-W2)- (50X10X 10-3X p)/ (50X 10Xl0-3Xp) X100%此项检定结论：(4)检测器的检定表9-6检测器的检定结果液相色谱仪型号：检测器型号：色谱柱：流动相：流速：蔡甲醇标准溶液浓度C:配制人：配制日期：基线噪声Nd基线漂移H最小检测浓度CL最小检测浓度的计算：CL=(2 X NdX C)/H此项检定结论：(5)高效液相色谱仪整机性能的检定表9-7整机性能的检定结果液相色谱仪型号：检测器型号：色谱柱：检测波长： nm流动相:流速：标准溶液类型：浓度：配