（组织分离方法）学习资料单

1、第二章菌种的来源第五节：组织分离方法mi种类型所谓菌种分离指的是在无菌操作条件下，由泡子萌发、子实体组织分离或者种木等基质分离，让其在适宜的条件下生长繁殖而得到纯 菌丝体的过程。菌种通常分为母种、原种、栽培种三种。根据食用菌种类的不同可选用不同的分离方法，可分为组织分离法、泡子分离法和基内菌丝分离法三种。目前常采用的是组织分离法 和孑包子分离方法。二、组织分离法概念组织分离指的是在无菌操作条件下，利用子实体内部组织（菌肉、菌柄）、菌核或菌索来分离获得纯菌种的方法。食用菌的子实体实际 上就是双核菌丝的扭结物，它具有很强的再生能力，因此，只要切取小块组织，把它接种到适宜的培养基上，适温培养，就能得

2、到纯菌 丝体。这是一种无性繁殖方法，所得菌种遗传性稳定，无变异现象, 能够保持原品种的优良性状，而且取材广泛，操作简便，容易成功。在生产上常被用于菌种的复壮、新品种的选育和栽培种优良性状的稳 定等作用。组织分离最好采用正处于旺盛生长中的幼嫩子实体或菇蕾作为分离材料，采取菌盖与菌柄交接处的组织进行分离，效果最好，对于 那些有内或外菌幕保护的菇类来说，取在菌幕保护下的幼嫩菌褶接 种，生活力更加旺盛。对于某些菌根菌，则取用靠近基部的菌柄组织 才能成活。根据分离材料的不同，组织分离法又包括子实体组织分离，适用 于绝大多数食用菌；胶质菌类组织分离法，适用于黑木耳、毛木耳、 银耳等；菌核组织分离，适用于如

3、茯苓、猪苓、雷丸等；菌索组织分 离法，适用于蜜环菌、假蜜环菌等；生长点分离法，适用于金针菇等。三、子实体组织分离法操作：子实体组织分离是通过分离培养食用菌子实体的菌肉组织获得 菌种的方法，适用于平菇、草菇、香菇等绝大多数食用菌。但不同食用菌子实体的各种组织及不同部位生长分裂的旺盛程 度不同，因此在切取子实体组织部位时应该有所选择。多数食用菌选择切取部位是子实体菌盖与菌柄交接处的菌肉或 菌盖的边缘部位的菌肉。在无菌条件下，子实体表面用75%酒精擦拭消毒，将解剖刀插入 菌柄lcm左右，双手把子实体从菌柄处掰开，留下左手一半子实体， 右手持接种刀，灼烧并冷却后，在菌盖与菌柄交界处挑取米粒大小一 块组

4、织，迅速移接到试管斜面中央，置适温下培养，待菌丝长满斜面 即为母种。若技术熟练，子实体表面不经消毒处理，也可直接掰开子 实体进行分离。大多数伞菌均可采用这种方法进行分离。但有些菇类, 如红菇、乳菇等，它们的菇体细胞已抱囊化，再生力极弱，分离时可 选取菌柄未破损的子实体，在无菌条件下，菌柄经75%酒精做表面消 毒，掰断菌柄，用接种刀伸入菌柄内部，刮切着生内壁的球状绒毛移 接在斜面上，适温下培养即可。（配视频1,用老师画外音，配背景 音乐，视频长度与老师讲授保持一致）I、胶质菌类组织分离法:胶质菌类，如黑木耳、毛木耳、银耳等，组织层较薄，具有一定 韧性，组织分离较为困难，成功率较低。（一）黑木耳。

5、取耳片进行组织分离，具体步骤可按照“子实体组织分离法”中有关操作方法进行。与菇类相比，黑木耳只是在组织的 切取方式上有所不同。黑木耳切取的部位是子实体腹面部分的胶质 体。（二）银耳。银耳耳片薄，具有一定的复水性，表面消毒易杀死耳片内的组织，不易获得菌丝。只有取银耳胶质团内的组织进行分离,才有可能得到银耳菌丝或银耳菌丝与香灰菌丝的混合菌丝体。五、核组织分离法:是从食用菌菌核分离培养获得纯菌丝的一种方法，如茯苓、猪苓、雷丸等，子实体不易采集，常见的是菌核。菌核组织分离与子实体组 织分离的方法基本相同。其分离方法是在超净工作台上，对菌核进行 表面消毒，以无菌操作的方法将菌核从中切成两半，在中心位置挑取 黄豆粒大小组织块，接种于培养基上，于25C温度下培养。六、菌索织织分离法:是从食用菌菌索中分离培养得到纯菌丝的方法，如蜜环菌、假蜜环菌等。它们是以特殊结构的菌索进行繁殖的。其分离方法是在超净 工作台上，挑取生命力旺盛的菌索尖端部分，进行表面消毒，以无菌 操作的方法使用解剖刀除去菌索的黑色外皮层即菌鞘，抽出白色菌髓 部分，切成小段移接到培养基上，于25CT培养。七、生长点分离法: 是从食用菌菌柄与菌盖的连接处获得纯菌丝的一种方法，适用于菇小、盖薄、柄中空的伞菌