Waters1525型高效液相色谱仪操作及维护保养规程

1、第 页共9页QB-C-QD-SOP-013版本号01修订号001目的：规范Waters1525型高效液相色谱仪的操作，确保检测设备安全稳定的运行。2范围：适用于Waters1525型高效液相色谱仪、Waters2489紫外检测器、GCK3308全自动空气源、ELSD2000ES蒸发光散射检测器的操作使用。3职责：质量管理部检验员负责本规程的执行。4控制内容与要求：4.1仪器及部件Waters1525输液泵；Waters2489紫外检测器；GCK3308全自动空气源；ELSD2000ES蒸发光散射检测器；Empower3色谱数据工作系统使用前检查室内温湿度，保持在15-30C，和20-85%RH

2、；线路连接是否正常，外部组装是否完整，液体管道连接是否正确，废液瓶是否需要更换或者或者倾倒；若不正常应尽快上报并检修。4.2开机4.2.1依次打开Waters1525输液泵（左面板上部）、Waters2489紫外检测器（主面板底部）、柱温箱电源（右板面下部），待自检通过后打开计算机电源，进入Empower色谱工作站。4.2.2依次打开Waters1525输液泵（左面板上部）、GCK3308全自动空气源（主面板底部）、ELSD2000ES蒸发光散射检测器（后面板底部左侧）、柱温箱电源（右板面下部），（注意空气源的排水及更换硅胶和活性炭）待达到设置的条件时打开计算机电源，进入Empower色谱工作

3、站。根据情况可先用甲醇或者异丙醇冲洗色谱柱。4.3设置4.3.1设置系统进入Empower3色谱数据工作系统，单击“配置系统”单击Empower3配置下“系统”若有在线系统，查看是否是所需系统，如果不是，则单击在线系统，后右击“离线”，单击“确定”；再单击所需系统，后右击“启用”，单击“确定”。4.3.2设置项目和方法4.3.2.1设置项目配置系统一文件f新建f项目f下一步f设定表空间为250，取消全面审计跟踪一下一步一选择PDAf下一步f下一步f选择一个源项目f下一步f项目名（例如:花青素20150922）f完成，关闭窗口4.3.3设置仪器方法双击“运行样品”，选择已设置的项目和系统，单击“

4、确定”。（1）页面排版，调整为最佳状态。检查页面上泵的流量及压力窗口、检测器、柱温、仪器方法样品信息框等信息。QB-C-QD-SOP-013版本号01修订号00（2）仪器方法一编辑PCM/15xx流量一泵设定，压力上限4000.0，压力下限0.0；设定的流量，选择泵模式等度或者梯度，设定等度或梯度流速以及总流量。事件一启用事件监视，时间：0.0，事件：事件1.功能：脉动，间隔：0.02。溶剂一溶剂说明：注明所使用溶剂的名称W2489（波长模式：单）通道A-灯开启；设置相应波长（例如:540）；数据模式为吸光度；采样速率1；滤光器时间常数：正常；波长改变时自动复零：维持基线。模拟输出1一灵敏度2

5、.0000；极性：正（+）；电压补偿：0；启用图表标记事件一矩形波段：0.2；脉冲宽度：1.0；运行事件TCM区域1一启用区域1，设定值：相应的柱温（例如：25）；上限110.0，下限0.0。保存一名称（例如：花青素20150922）eSATIN常规f通用，环境60Hz，启用BCD极性：正（+）；通道1,启用通道：开；采样率:2；说明：通道1;单位：mV；放大因子：1000.0；通道2,启用通道：关。事件一初始状态，继电器：关；TTL1：关；TTL2:关；中继操作模式：标准。4.3.4设置样品方法页面左侧单进样样品名：（例如：对照-150922-01）功能：样品进样方法组：单击开发方法f选择仪

6、器方法（例如：花青素20150922）f下一步f下一步f完成样品瓶：1进样体积：10.0运行时间：（例如：40.0）4.3.5设置检测器参数在ELSD2000ES蒸发光散射检测器面板上出现MenuRun，按Menu对应的下方键，面板显示：1.Method2.Configuration3.Diagnostics，按数字键1,面板显示：1.SelectMethod2.EditMethodf按数字键1,面板显示编辑好的方法，按数字键盘选择相应的检测方法f按OK下方键QB-C-QD-SOP-013版本号01修订号00按RUN下方键；按数字键2,面板显示各参数项目，通过数字键盘输入相应的参数，输入完毕按

7、Save下方键按Run下方键，等各项参数达到设定值后方可使流动相进入检测器进行检测。各参数的确定根据流动相的种类、配比，参照Alltech2000ES蒸发光散射检测器（ELSD）操作手册中4.4.1，对温度、气体流量等进行设置。如果是已设置的项目，核对设置的仪器方法、方法组、检测器参数等信息。4.4操作运行4.4.1根据样品性质选择合适的系统，如果系统不合适，需要倒相：反相系统倒为正相系统断开检测器，不接色谱柱接入二通，先用甲醇冲洗系统，0.50ml/min:0.50ml/min的流速冲洗半小时左右，再用异丙醇0.50ml/min:0.50ml/min的流速冲洗2小时左右，也可根据实际情况确定

8、小流速冲洗较长时间。正相系统倒为反相系统断开检测器，不接色谱柱接入二通，先用异丙醇冲洗系统，0.50ml/min:0.50ml/min的流速冲洗1小时左右，再用甲醇0.50ml/min:0.50ml/min的流速冲洗1小时左右。4.4.2根据样品性质选择合适的色谱柱，正确安装色谱柱（注意箭头朝上，且不能太紧）；选择流动相类型，配制、过滤、并超声脱气。4.4.3按照要求开机、设置后，单击进入“运行样品”，打开排液阀（向内至扳不动为止），设定流量A:3.00ml/min,B:3.00ml/min,变化率3min。待都达到3.00ml/min，观察管路中是否还有气泡，再设定相应的流速（单泵或者双泵）

9、，变化率1-3min，待都达到设定流速时，根据情况再用注射器抽去管道及泵头内气泡，关闭排液阀（向外至扳不动为止），在仪器方法下选择设置的方法，单击“监视”，进行色谱柱平衡。观察压力变化情况，检查是否漏液，监视基线平稳半小时以上，准备进样。编辑样品名称，核对样品方法、方法组，点击进样图标，待下方显示“等待进样”后，迅速进样即可。样品分析4.5.1按照各样品检验SOP要求进行样品处理，再进行色谱柱平衡、进样、数据采集及谱图处理等操作。4.5.2进样时匀速稳定，确保当天的进样手法尽可能一致，进样针的使用应注意，每次使用前应洗针，使用结束时，用甲醇或先用异丙醇再用甲醇洗针，尽可能的洗掉残留的物质。4.

10、5.3结果及谱图信息处理4.5.3.1结果保存QB-C-QD-SOP-013版本号01修订号00进入“浏览项目”，选择所需样品的项目，单击“通道”，单击“刷新”，选择样品名称，双击或者右击选择“处理”自动积分或者手动积分，文件f保存f全部，保存当前的处理方法f选择相应的名称（例如：HM）,后关闭窗口。结果查看单击“结果”，单击“刷新”，选择样品名称查看结果。谱图处理单击“结果”，选择样品名称右击一预览/出版，打开报告方法一使用以下的报告方法一简单报告或者进样综合报告或者其他f确定f关闭f调整谱图整体布局，平移至合适位置f右击f字段属性（或者单击样品类型）f编辑字段（标记位置：数据之上）、字体、

11、排序规则、名称等信息f确定f另存为f相应文件夹f相应谱图名称（例如：花青素对照1-1）。清洗及关机样品分析结束后，关闭Waters2489紫外检测器电源，按规定用10%甲醇或甲醇对色谱柱进行清洗各最少0.5h。清洗结束后，先关闭工作站再关闭仪器电源和电脑电源，做好仪器使用记录。样品分析结束后，断开色谱柱与ELSD2000ES蒸发光散射检测器流路，通气10min左右后，将检测器温度降至50C以下，再关闭检测器电源和全自动空气源电源。同时规定用10%甲醇或甲醇或75%异丙醇或异丙醇对色谱柱进行清洗各最少0.5h。清洗结束后，先关闭工作站再关闭仪器电源和电脑电源，做好仪器使用记录，有必要时卸下色谱柱

12、，接二通，。注意事项大流速排气泡时要设定适当的变化速率，升流速时一定要打开排气阀；降流速时，要等总流速降至1ml/min后再关排气阀，以防仪器报错。色谱柱应保存在色谱甲醇或者色谱异丙醇中，使用时轻拿轻放，连接正确，长时间未用的色谱柱，使用前用色谱甲醇或者色谱异丙醇冲洗。使用新色谱柱前，应根据说明书要求使用性能测试的流动相，处理之后才能使用，安装方向一定不能接反。更换溶剂瓶时，应注意排气。进样时要将外壁擦拭干净，以防残留的物质积攒，污染进样口。流动相应新鲜配制，尤其是有缓冲盐的流动相，尽可能精准，过滤、超声脱气后才能使用。样品处理后，进样之前要用微孔过滤膜过滤以防杂质污染色谱柱。梯度洗脱时，一个

13、程序未走完时，不能手动中断后进样，否则会影响出峰情况。4.8异常情况及补救措施QB-C-QD-SOP-013版本号01修订号00仪器出错，检查原因是因为流速过高排气阀未开，还是柱压达上限，信号连接器未开，修整后关机重启，尽量减少关机重启，伤害系统。溶剂走空，大流速排泵腔内气泡，后换用小流速冲洗2小时左右。压力问题压力不稳的原因和解决方法（1）泵内有空气：清除泵内空气、溶剂脱气和排气（2）比例阀失效：更换比例阀（3）密封垫损坏：更换密封垫（4）系统漏液：查找漏液处，维护密封（5）梯度变化压力为0的原因（1）泵头内没有液体，充满气泡（2）单向阀完全堵死（3）柱塞杆折断（4）压力传感器损坏，流动相流

14、动正常，但无压力基线问题4.8.4.1规则的基线噪音（1）流动相、泵、检测器中有空气：流动相脱气、冲洗系统（2）漏液：检查管路接口是否松动、是否漏液、是否有盐析出，扳紧接口（只用力），解决漏液问题，严重时更换泵密封（3）流动相混合不完全：手摇使混合均匀或使用低粘度溶剂（4）温度影响，柱温过高，检测器未加热：减少温度差异，适当降低柱温，加上热交换器（5）在同一条线上有其他电子设备（偶然噪音）：断开检测器、记录仪等，检查干扰是否来自外部，加以更正；采用精密稳压电源不规则的基线噪音（1）系统、检测器中有空气：清洗检测器后安装压力调节器（2）漏液：检查管路接口是否松动、是否漏液、是否有盐析出，扳紧接口，解决漏液问题，严重时更换泵密封；检查流通池是否漏液（3）流动相污染、变质、由低质溶剂配制：检查流动相的组成，重新配制（4）流动相各溶剂不相溶：选择互溶的流动相版本号01修订号00第 页共9页QB-C-QD-SOP-013（5）检测器灯能量不足：更换灯（6）色谱柱填料流失或堵塞：更换色谱柱维护或者更换混（7）流动相混合不均匀或混合器工作不正常:不走梯度时尽量不使用混合器合器（8）色谱柱污染：更换色谱柱（9）系统未平衡好：延长平衡时间，使用缓冲盐更应该注意平衡5.相关文件：5.1Alltech2000ES蒸发光散