实验目的学习从动物组织中提取DNA及其含量、纯度测定的原VIP

1、实验目的学习从动物组织中提取DNA及其含量、纯度测定的原理和方法 掌握离心机的使用方法兔肝脱氧核糖核酸（DNA）的提取和测定1在0.15M的氯化钠溶液中脱氧核糖核蛋白的溶解度最低。用0.15M氯化钠溶液洗涤可洗去其它物质。沉淀用SDS处理，SDS使蛋白质与DNA解离，再用氯仿异丙醇抽提，将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解。DNA溶液用乙醇沉淀析出。实验原理2实验操作1. 弃上清留沉淀兔肝称取4 g 加8ml 1X SSC1X SSC洗两次取8ml匀浆液离 心匀浆、过滤2.弃上清留沉淀加至8ml 1X SSC离 心加至 8ml 0.15MNaCl-0.1MNa2EDTA离 心3.弃上清留沉淀（脱氧

2、核糖核蛋白）3加约2倍体积95% 乙醇沉淀加 0.15MNaCl-0.1MNa2EDTA至4ml搅拌10min逐滴加入0.5ml 15% SDS加1ml5M NaCl去塞！离心加塞反复倒置抽提10min吸取上清液勿吸到中间层！等体积氯仿-异丙醇混合液DNA析出用玻棒挑出挑取DNA至一离心管(小烧杯)用10ml 0.01N NaOH溶解重复一次轻搅10min4注意事项尽可能避免DNA的断裂 1. 匀浆时应保持低温，且匀浆时间应短； 2. 实验中使用的吸取DNA水溶液的滴管口应粗短并成钝口。保持DNA活性，避免酸碱或其他变性因素使DNA变性。搅动不要太大，以免使DNA断裂。整个实验过程应在低温条件

3、下进行。搅拌时动作要轻，反复倒置抽提，不可激烈振荡。5加入15% SDS时要慢，边搅边滴加（两人配合）。SDS的温度不能太低，易凝固。吸过SDS的吸管要及时清洗。加入CHCl3/IAA液离心后，分为三层，由上到下为：无机相-蛋白相-有机相。DNA溶解在无机相中，吸取无机相时动作要轻，不要吸到蛋白相。CHCl3/IAA会溶解有机玻璃，用完后不能竖直放置在试管架上，必须冲洗干净。6离心机的使用打开电源开关；平衡放置离心管；盖上盖子。调节时间旋钮至10min；缓慢调节速度旋钮至9档，每5-10s上升1档；离心完毕后机器自动停止，待完全停止后，打开盖子取出离心管。离心管必须平衡后，才能启动离心机；离心

4、机的盖子必须盖紧；离心过程中不要用重物撞击离心机；要等离心机完全停止转动后再打开盖子。7二苯胺显色法测定DNA含量DNA的-脱氧核糖在酸性条件下转变成-羟基-r酮基戊醛，与二苯胺共热后形成蓝色化合物，该化合物在595nm处最大吸收。每ml含20400g范围内光密度与DNA的浓度成正比。用标准曲线法测定DNA含量。用生物分光光度计（用紫外光度法）分析DNA含量与纯度实验原理8取8支试管，按实验指导的表格加入试剂。加毕置沸水浴10分钟，取出冷却；以0号管（空白管）调零点，于595nm波长比色。以光密度为纵坐标，DNA含量（g/ml）为横坐标，绘制标准曲线.将实验中所得到的兔肝DNA溶液作为待测样品，取两只试管，分别标“U”和“B”，按表加入试剂。混匀，置沸水中10min, 取出冷却。在595nm处，以B管调零，测得待测液的光密度值，从标准曲线上查出相当于该光密度值DNA的含量。实验操作9核酸在220-320nm处呈特征性吸收，在260nm处有最大吸收，测A260/A280可得知核酸的大致纯度。 A260/A280 1.8 表示DNA纯 1.8 RNA含量高 1.8 蛋白含量高核酸紫外吸收的测定10 以0.0