模式动物小鼠

1、模式(msh)动物-小鼠陈元红环境安全与健康风险(fngxin)研评价究办公室）1共五十七页小鼠的基本特性及实验小鼠的发展小鼠作为(zuwi)模式动物的优缺点小鼠的一般操作技术小鼠的实验应用主要(zhyo)内容2共五十七页分类(fn li)：哺乳纲、啮齿目、鼠科、小鼠属一、小鼠的基本(jbn)特性3共五十七页1.体型小 ；2.生长期短、成熟早、繁殖力强；3. 性情温顺，易于抓捕；4. 对外界环境的变化敏感，不耐冷热，对疾病抵抗力差5.喜黑暗安静环境，因门齿生长(shngzhng)较快，需经常啃咬坚硬物品，习惯于昼伏夜动，进食交配分明等多发生在夜间。基本(jbn)特

2、性4共五十七页5共五十七页普通级、清洁级、SPF（无特殊病原体），GF（无菌级）在多年远交、近交等遗传筛选的基础(jch)上，已经拥有大量遗传背景不同的品系，研究者可根据实验目的，选取实验研究所需的理想品系 远交系：为了保持品系内相对稳定的遗传多样性而通过随机交配所获得的繁育品系。例如ICR（CD-1）近交系：连续进行20代以上的兄弟x姐妹交配所获得的具有相同遗传背景的近交品系或具有同等遗传相似行的人工繁育群体。例如C57/B6，FVB，Balb/c等，世界范围内常用的近交系约有250个实验(shyn)小鼠的发展6共五十七页突变系： 指正常染色体的基因发生了突变，这种遗传变异造成后代的某个性状

3、或生物反应与亲本不同，具有某种特殊性状表型的各种遗传缺陷的品系。突变品系约有350个基因敲除系（KO）：利用现代遗传工程技术，对某个或几个感兴趣的基因，进行人工修饰或改造，使其丧失基因功能而产生的小鼠品系。转基因系：利用现代基因工程(jyn gngchng)技术，将某些外源基因整合到小鼠基因组中，使其获得新的遗传性状的品系。例如C57-GFP, FVF-GFP等7共五十七页优点：1）成熟早，繁殖力强。每胎产仔数为815只，一年产仔胎数610胎，属全年、多发情性动物，繁殖率很高，生育期为一年。2）体形(txng)小，易于饲养管理。小鼠是啮齿目实验动物中较小型的动物，一只小鼠出生时1.5克左右，哺

4、乳一月后可达1215克，哺乳、饲养1.52月即可达20克以上，可供实验需要，在短时间内可提供大量的实验动物。3）性情温顺，胆小怕惊二、小鼠作为(zuwi)模式动物的优缺点8共五十七页4）对外来刺激极为敏感。对于多种毒素和病原体具有易感性，反应极为灵敏，如百万分之一的破伤风毒素能使小鼠死亡，这是其他实验动物所不能比拟的。对致癌物质也很敏感，自发性肿瘤多。5）便于提供同胎和不同品系动物。可根据实验要求选择不同品系或同胎小鼠做实验，也可选择同一品种（或品系）、同年龄、同体重、同性别的小鼠做实验，由于(yuy)动物遗传均一，个体差异小，实验结果精确可靠。9共五十七页小鼠基因改造技术成熟(chngsh)

5、，且生理生化和发育过程与人类及其相似，基因组和人类99%同源，所以人类疾病的小鼠模型基本可以真实模拟人类疾病的发病过程及对药物的反应；小鼠基因组计划已经完成，为研究基因功能及其表达调控，胚胎发育和人类疾病的分子机制提供了条件基础和技术手段。小鼠的疾病模型的深入研究姜维生物医药技术产业发展提供技术支持其它(qt)优点10共五十七页如果以线虫、果蝇和斑马鱼为标准，小鼠的生活周期显得(xin de)缓慢而且操作难度大。早期胚胎可以从输卵管冲出，一旦着床后，必须进行手续，且胚胎不易在实验室作较长时间保持。胚胎在子宫内发育，很难对其进行观察和操作缺点(qudin)11共五十七页1. 实验动物的选择 2.

6、 实验动物的抓取和固定 3. 性别鉴定4. 实验动物编号(bin ho)标记 5. 实验动物染毒途径和方法（灌胃、腹腔注射、尾静脉注射）6. 生物标本的采集 （鼠尾取血、眼眶取血）7. 实验动物的处死三、小鼠的一般(ybn)操作技术12共五十七页实验(shyn)流程13小鼠的观察、抓取与固定性别的判定、称重、标记编号及分组小鼠灌胃操作（重点）小鼠腹腔注射、小鼠尾静脉注射鼠眼眶后静脉丛取血与小鼠的断尾取血，以及小鼠的处死共五十七页动物(dngw)物种选择基本原则： 动物(dngw)的选择14根据实验目的选择相应的品系对毒物代谢及毒性效应表现与人尽可能一致；繁殖生育力强，数量较大能够保证供应；易于

7、饲养和实验操作的物种；经济并易于获得的物种。共五十七页健康动物首先看外观： 体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮(mngling)，反应行动灵活。 有无明显疾病症状 体重、年龄 小鼠3周体重约为1015g外观(wigun)观察15共五十七页动物(dngw)的抓取和固定单手固定双手固定固定器固定板注意(zh y)抓取动物的手法抓取固定时力量大小适宜16共五十七页未成熟鼠生殖器发育不明显，肛门与生殖器之间的距离来区分(qfn)。远、近。成年鼠：雄性卧位可见睾丸，雌性可见腹部有12个乳头。性别(xngbi)鉴定17共五十七页Day 21Female-left Male-right共五十七页1

8、9Adult共五十七页 Simplex PCR assay for sex determination in mice20X-chromosome-specific gene Jarid1cY-chromosome-specific gene Jarid1dExon9-10 high degree sequence similarlyJaridIdJaridIcBioTechniques 38:702-706 (May 2005)共五十七页21乙醚(y m)吸入麻醉 适用于各种动物的麻醉，简单安全(nqun)，可随时调节麻醉深度。 腹腔注射麻醉 可使用戊巴比妥钠 、水合氯醛等 动物麻醉共五十七

9、页常用标记(bioj)，两种染料（苦味酸和中性红或品红）先左后右，先上后下动物(dngw)的编号标记22共五十七页穿耳孔法左耳代表十位，右耳代表个位应注意防止孔口愈合，多使用消毒滑石粉涂抹(tm)在打孔局部23共五十七页常用标记(bioj)工具24共五十七页原则： 同一实验中，实验动物的年龄尽可能一致，实验动物体重大致相近； 同组、同性别动物体重差异应小于平均(pngjn)体重的10%；不同组间同性别动物体重均值差异小于5%；动物各半，且实验结果分开统计、分析。称重编号随机分组 实验(shyn)动物的分组25共五十七页经口染毒（喂饲、灌胃、吞咽胶囊等）经呼吸道染毒（静式、动式和气管内注入）经皮

10、肤(p f)染毒注射染毒（皮下、皮内、肌内、腹腔和鼠尾静脉注射等）其它（直肠内、鼻腔等）实验动物染毒途径(tjng)和方法26共五十七页灌胃抓取老鼠时应是鼠 成竖直线(zhxin)灌胃成功时，所遇阻力较小灌胃时注意胃容量0.1ml/10g-0.3ml/10g ，1mL27共五十七页腹下1/3外侧(wi c)，避免损伤实质器官30-45角刺入扎入时有“落空感”，回抽无尿液或血液腹腔(fqing)注射28共五十七页酒精擦拭尾部左手(zushu)食指，拇指配合按住尾端右手持注射器，针尖轻轻抬起与血管平行刺入血管由红变白，按压止血尾静脉注射(jn mi zh sh)29共五十七页俯卧固定，左手拇指和食

11、指捏住颈背部皮肤(p f)提起，右手持针沿纵轴方向刺入皮下，进针时感觉有阻力，继续刺入，突然阻力消失，活动针头，确认刺入皮下即可注射药液。皮下注射(p xi zh sh)30共五十七页俯卧保定，与皮肤平行刺入捏住的皮肤，注射(zhsh)部位局部形成皮丘。为避免药液流出，停留片刻，再将针头拨出皮内注射(zhsh)31共五十七页血液采集(cij)（断尾采血、眼眶采血、动脉采血等）尿液采集粪便采集生物标本(biobn)的采集 32共五十七页固定用手轻揉鼠尾静脉(jngmi)充血后剪尾尖（1-2mm）用手从尾根向尾尖推挤采血干棉止血。每次0.1mL尾尖静脉(jngmi)采血法33共五十七页左手固定动物

12、滴少量10%可卡因于动物眼内右手持消毒(xio d)过毛细吸管以抗凝剂湿润内壁眼睑和眼球间旋转刺入采血后消毒纱布止血30秒。每次0.2-0.3mL眼眶(ynkung)后静脉丛采血34共五十七页动物(dngw)仰卧固定器固定剪左侧心区毛皮肤消毒小号针头注射器在3-4肋间刺入。可达0.5mL心脏(xnzng)采血法35共五十七页脊椎脱臼法：用左手按住动物的头部于实验台上，右手抓住尾根部，快速、不间断地向后、略向上使劲拉，使动物的颈椎以致脊椎脱臼死亡。过量(guling)麻醉法动物(dngw)的处死36共五十七页将动物固定于解剖台上，从耻骨联合至下颌沿正中线切开皮肤，再从耻骨联合至肋骨下缘沿腹正中线

13、切开腹壁肌肉（不要用力过猛，以免切破腹腔脏器，特别是膀胱(png gung)）。从肋骨下端向脊柱方向，将两侧腹壁剪开，以便观察腹腔内脏器。应注意不可将腹腔内脏器翻乱，应有次序地检查。脏器标本(biobn)的采集37共五十七页38共五十七页39共五十七页40共五十七页41共五十七页42共五十七页43共五十七页44Tissue Collection for Systematic Phenotyping in the Mouse ,Current Protocols in Molecular Biology 29A.4.1-29A.4.23, October 2007共五十七页45PAP Stain

14、ing Rats C.H. Hubscher,et al. Biotech Histochem, 80 (2005) 79-87.Estrous cycle identification Giemsa Staining mice H. Meziane,et al. Genes Brain Behav, 6 (2007) 192-200.Cornified cellnucleatedLeukocytes 共五十七页抓取称重(chn zhn)给药采血麻醉(mzu)解剖共五十七页1. 抓取与操作动物时小心不要被咬伤，如果被咬伤需立即用清水冲洗并用碘酒消毒。2. 抓取动物时用力要恰当(qidng),防

15、止动物窒息死亡。3. 注射染毒时要注意安全，注射器不用时要盖上盖子，不要被扎伤。4. 实验动物在做完所有操作后才进行处死，处死后的动物不要与其他垃圾混合丢弃。注意事项：47共五十七页48实验动物的饲养与管理 饲养器具主要(zhyo)有饲养架、饲养笼、食器、饮水器、以及洗涤和灭菌。应有(yn yu)科学的方法：实验室：通风良好，光线充足，温度适宜。日常饲养：注意其饮食调节和笼舍的干燥清洁，及时除去动物的粪尿及污染的塾料、残余的饲料。笼内不宜过于拥挤，动物必须按繁殖、供应、实验等不同，分别按区圈养，以便于调整饲料及特殊照顾(如手术和麻醉动物等)。饲料要保持卫生，根据动物及实验目的加以配制。要求成分

16、中不含影响实验的物质。饲料保存宜防止腐败和污染。饲料含水份在8%以下时，不易发霉或虫蛀。但在10%以上时，则易发霉。共五十七页药物研究 主要用于药物筛选性实验、毒性实验和安全评价等。病毒、细菌和寄生虫学研究肿瘤学研究某些(mu xi)品系的小鼠自发性肿瘤与人体肿瘤在肿瘤发生学上相近，所以常选用小鼠自发的各种肿瘤模型进行抗癌药物的筛选。例如C3H/he小鼠四、小鼠的实验(shyn)应用49共五十七页遗传学研究主要(zhyo)用于研究黑色素病、白化病、尿崩症、家族型肥胖和遗传性贫血等。免疫学研究乳腺干细胞研究等 50共五十七页应用(yngyng)举例51疫苗免疫(miny)研究共五十七页52乳腺(

17、rxin)干细胞研究共五十七页53共五十七页上海史莱克实验动物有限公司 /南京大学模式动物研究所/?sortid=67北京(bi jn)维通利华实验动物技术有限公司 /Jackson Lab /Harlan /小鼠资源库54共五十七页引物设计 从以下10个小鼠基因中任选3个基因设计进行荧光(ynggung)定量PCR的特异引物。 actin, Actr10, CD24,CD49f, FoxA1,Lmo4,Elf5,Lgr5,Axin2,Sca1作业(zuy)155Primer IDgeneSequenceProduct lengthAcession No.1m-csf3-FCCTGGAGCAA

18、GTGAGGAAGAT181bpNM_009971.12m-csf3-RCTGGCTTAGGCACTGTGTCT共五十七页作业(zuy)256All You Need is Love: Reproductive Biology of MiceWe regret that you were unable to attend our webinar. Below are web links to therecording and presentation slides for this webinar to view at your own convenience:/p4coc18z1hq/webinar/Mouse_Reproductive_Biology_091814.pdf 共五十七页内容摘要模式动物-小鼠。例如C57-GFP,