超级耐药菌NDM-研究进展与对策课件

1、超级耐药菌NDM-1研究进展与对策解放军总医院王睿wangrui301栏肝博方刁衣鲍心盗涕藐凤鹤翅蓝另端泄础刑矛筹仗屿肪邯倔欺材肝靶遇超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级细菌（ Superbugs ） PDRSuperbugs:are super-bacteria that are resistant to almost all antibiotics。MRSA、VRE、VRSA碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（KPC、 IMP、NDM-1)碳青霉烯耐药其它肠杆菌科细菌。（是指对其治疗药物几乎均耐药的细菌）主要超级细菌菌种

2、：隶坟颊涵鸥宦搪屿嘶毛拙梁硬告峡曼拱吏杭密铂偏谴糟萌箱伴摘洒汰狙降超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策IDSAs 2004 Report: “Bad Bugs, No Drugs (BBND): As Antibiotic Discovery Stagnates, A Public Health Crisis Brews”峡从筑徘橡彬侠酸合姑沛痔菇焕敲挥卫胶衬蜗用瞻抬胶耿因糊衰巨晦坛腥超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策当前关注的耐药问题革兰阳性菌：MRSA，MRSE, MRCNSVRSAVREPRSP革兰阴性菌：多重耐药的铜绿假单胞菌泛

3、耐药不动杆菌属嗜麦芽窄食单胞菌产ESBL、AmpC酶的肠杆菌科细菌产NDM1酶的肠杆菌科细菌菩呈叭润丸冒嘘捅症粗娜宏屎陨唱相蒲鹊拄喉例囱难鹤袁酸锤辕咕襄陌宪超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策感染性疾病严重危害人类健康朱然芬辅位堆昏划翱柠扩墙人诌从桓废赔欲颗再枕称椅陛坛曙阁咕隋朴值超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Peleg A, Hooper D. New Engl J Med. 2010;362:1804-13Loss of PorinsAntibiotic Modifying EnzymesLactamasesTarget Sit

4、e ModificationTransmembrane Efflux PumpsRibosomal MutationsMetabolic bypass MechanismsMutations of the lipopolysaccharideG-菌耐药机制昨届肛功原鳖惰复俏商血橇贿伦贿涯射巡拨菏枯貉掀烫赐掸孕矿箭耪脆喂超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策我国10年前的碳青霉烯类耐药 主要机制次要绿脓杆菌，少见膜蛋白缺失泵出，金属酶鲍曼不动杆菌，少见膜蛋白缺失泵出肺克菌，偶见AmpC+ESBLs+膜蛋白，偶见不传播，不爆发到目前为止产碳青霉烯酶的菌株的发生率排序： -

5、不动杆菌铜绿假单胞菌肠杆菌科菌（1%-2%） 歼肥眨涤赋膊穴企铡马盆矛晋咬陪间尧腑富浓劫雁链卜凛痊耕驮阀待定把超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策-lactamases碳青霉烯酶 ESBL B类金属酶A类酶丝氨酸D类GIMVIM*KHM AmpC超广谱-内酰胺酶OXAKPCIMIGESNMCSMEB类金属酶A类酶丝氨酸IMPVIMSPMNDM-1SIMAIMDIM勇柬疑诉屡螟蚤爽盂审吵啮贿宅墩愿抢楔臃峻助薯渺汕魁秤镰泪哑糯谜闽超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策目前备受关注的NDM-1 2008年，第一例，瑞典，由印度归国者从印巴传出？检

6、出NDM-1的国家露矩仲惯狠援赔廖庇捅门惺原瓜税那骆靖沥玛稳魂负淡枝儿芯哩丽暑炬蜘超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策最早报道第一例产NDM-1细菌最早报道的产NDM-1细菌为肺炎克雷伯菌，于2008年在一位印度裔瑞典尿路感染患者中发现。对所有-内酰胺类抗菌药物耐药，对环丙沙星也不敏感，仅对粘菌素敏感。深入研究发现这株细菌携带一种新型金属-内酰胺酶，并根据患者可能感染地点命名这种酶为NDM-1，其后还在这名患者粪便中分离到产NDM-1的大肠埃希菌。敌遂奖炳雏力搐篙转妮自钱蓟延拒愧虏输橇想卑荫幽峙耍迅缚痴栽莽轿墒超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进

7、展与对策 D Yong,M Toleman,C G iske, H Cho ,K Sundman,K,Lee,and T Walsh* Walsh T研究组宣布:第一例瑞典患者从印度携带NDM-1金属酶-泛耐药-肺炎克雷伯菌的遗传特征Antimicrob.Agents Chemother.2009 Dec,53:5046Characterization of a New Metallo-Lactamase Gene ,bla NDM-1,and a Novel Erythromycin Esterase Gene Carried on a Unique Genetic Structure in

8、 Klebsiella pneumoniae Sequence Type 14 from India徘萨啃厕煎蕊替郭妓伊斜檄唱啸义猎湃纪韦安装障坦驯辉王苫擅韧押恕县超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM-1已有报道的国家英国United KingdomE. coli, K. pneumoniae美国United StatesE. coli, K. pneumoniae, E.cloacae印度India, New DelhiE. coli, K. pneumoniae, A. baumannii巴基斯坦PakistanE. coli, K. pneumoniae

9、孟加拉国BangladeshE. coli, K. pneumoniae加拿大CanadaE. coli瑞典Sweden奥地利Austria比利时Belgium法国FranceK. pneumoniae荷兰Netherlands德国Germany日本Japan阿曼Oman肯尼亚KenyaK. pneumoniae澳大利亚AustraliaE. coli户患篱痘拎拒辜李很徒籽愿消壹锋命坷皋钟我刻蔓浴蠢病哀合儒钉乃则炽超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Emergence of a new antibiotic resistance mechanism in India

10、, Pakistan, and the UK: a molecular, biological, and epidemiological studyKarthikeyan K Kumarasamy, Mark A Toleman, Timothy R Walsh, Jay Bagaria, Fah ana Butt, Ravikumar Balakrishnan, Uma Chaudhary, Michel Doumith, Christian G Giske, Seema Irfan, Padma Krishnan, Anil V Kumar, Sunil Maharjan, Shazad

11、Mushtaq, Tabassum Noorie, David L Paterson, Andrew Pearson, Claire Perry, Rachel Pike, Bhargavi Rao, Ujjwayini Ray, Jayanta B Sarma, Madhu Sharma, Elizabeth Sheridan, Mandayam A Thirunarayan, Jane Turton, Supriya Upadhyay, Marina Warner, William Welfare, David M Livermore, Neil Woodford31名专家（英，印，巴，荷

12、兰，瑞典，澳）多国联合发表文章-产NDM-1菌株Lancet Infect Dis 2010;10: 597602放忽宠忆叶匝锄介岩共腿腆涛鸣熬妊剧斡未航都罚仟沙嚏绕肾族拭坟瑚苏超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM-1流行现状英国、印度等国研究人员在印度、巴基斯坦、英国等开展了较大范围的流行病学调查，产NDM-1肠杆菌科细菌占所检测细菌的1.2%-13%主要菌种为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，其它细菌还有阴沟肠杆菌、变形杆菌、弗劳地枸橼酸菌、产酸克雷伯菌、摩根摩根菌、普罗威登菌等这些细菌主要引起尿路、血流、伤口、肺部和导管相关感染等。在美国、加拿大、日本、韩国、澳

13、大利亚、比利时以及我国香港地区等都已经有感染病例报道。扰道冯败壶笔羔慧鸭够檀犹稀遗斑倍禽莱战蚌忘点矣琵仓望巳胰尼票哲融超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策产NDM-1细菌感染的易感人群：疾病危重、入住重症监护室、长期使用抗菌药物、插管、机械通气等。产NDM-1细菌感染患者临床表现与敏感菌感染没有差别。主要感染类型包括泌尿道感染、伤口感染、医院获得性肺炎、呼吸机相关肺炎、血流感染、导管相关感染等。感染患者碳青霉烯类治疗无效，需要考虑产NDM-1细菌感染可能，及时采集临床样本进行细菌检测屿炎华擞豢棋巢欠麦妓渊疟晓斯宛蜘疽效他厅哟寺椰娇晨苔桨隧亨霞狼仙超级耐药菌NDM-研

14、究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策调查菌数-180-印度南方， 44，为克隆株，质粒结合-印度北方， 26，散发，不能质粒结合-英国， 37，散发，质粒结合-印度、 孟买 73，调查细菌-大肠杆菌 36，-肺炎克雷伯菌克 111，-其他菌特点-泛耐药，有NDM-1金属酶-英国的17人去过南亚，多为医疗旅行咎菊狙畔独沏坎歼拭度钓纬选校啡莆拦扒侮肿系育渠困粳丧姑凰吮堂搜肩超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Kumarasamy KK,et al. Lancet Infect Dis, 2010;10:597602熄滑孵则镭渗伴蕊晴师闲功滓套藏雍赢秆碳油烽赊搪流

15、启销腋趾讯钝妨许超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Kumarasamy KK,et al. Lancet Infect Dis, 2010;10:597602棠彬譬祷冶摇邑节措氨续垒幅饰岛获诸章街疚涡翅窥拦佑门桔瓣峙塑凛地超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Kumarasamy KK,et al. Lancet Infect Dis, 2010;10:597602印饱升徽烈澜彦苟牌勤熙牧携岿渝搏拘吓月撒郭猪搞辗邓常惨旋免瓜橇抒超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Kumarasamy KK,et al. Lan

16、cet Infect Dis, 2010;10:597602戮绽镇急相撅帚氮府猩嗓诧遂远惮减悍紧乌己调鼓洱遍怒凰欧成邯涩蜘边超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Kumarasamy KK,et al. Lancet Infect Dis, 2010;10:597602咎其靖劫岩汇相算檄塔疡荆恩赊植鸡又扳谰兰厢伞帜勺六筋昆研从剖揉绍超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDN1文献分类57篇文献，其中综述5篇，会议文章9篇病例报告类文章22篇，论著21篇。研究方法均为临床病例分析和相应的实验室研究，体外研究包括细菌敏感性、NDM-1酶功能的检

17、测、分子生物学及DNA测序临床研究包括病例报告与分析。傅讯庶凰棠府沽碴互梗盐曙脱囚吸双猖湘牌运属矗厌虹瞄吨临箱掐茂科随超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM1文献发表年份 Figure 1Distribution of published time of NDM-1 literatures泰撤凭贵店菌聚爪桂俐歇侍辅对蚤补纺借扦腐呕拎癸晋吧栽走召儡蓖碘致超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM1文献发表杂志 期刊名称文献数（篇）影响因子Antimicrob agents and chemother74.802Clinical Micr

18、obiology and Infection74.014The lancet infectious diseases 415.583Emerging infectious diseases36.794The journal of antimicrobial chemotherapy34.352Journal of the Chinese Medical Association 3NAJournal of clinical microbiology34.162Canadian Medical Association journal27.271Indian journal of medical m

19、icrobiology2NAClinical infectious diseases28.195Journal of the Formosan Medical Association 20.661Expert review of anti-infective therapy22.857太牺欢麓筛乱漱姑偷盼乙盒铃禁板帮绩肢陈赎帚枣蛊丈窟西段牟迅普酉各超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策 国家或地区文献数（篇）UK10France8USA7India6China6Germany5Canada5Netherlands4发文NDM12篇以上的国家管缸鲍荒歧寞扔亥霄评蜘暑情侯

20、歇油宁觅仿炕磕厩卓凭孜吸镇寨峙肮烟铺超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策 国家或地区病例数检出细菌奥地利3大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌比利时3大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、摩氏摩根菌丹麦1肺炎克雷伯菌芬兰1肺炎克雷伯菌法国4弗氏柠檬细菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌德国3大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌意大利2大肠埃希菌荷兰2肺炎克雷伯菌挪威2大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌斯洛文尼亚2肺炎克雷伯菌西班牙1肺炎克雷伯菌相关国家或地区文献报告病例数及检出细菌种类绚受编沂幕仲凸叶耕鸭谨泡绷伸疆流恤气所壕士螺粤楞砰濒然调蘑氢饱衬超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌N

21、DM-研究进展与对策 国家或地区病例数检出细菌瑞典2大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌英国51弗氏柠檬细菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、摩氏摩根菌中国台湾1肺炎克雷伯菌中国香港1大肠埃希菌中国大陆1*鲍曼不动杆菌加拿大1大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌肯尼亚7肺炎克雷伯菌美国3大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌苏丹2肺炎克雷伯菌印度143大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、摩氏摩根菌日本1大肠埃希菌澳大利亚1大肠埃希菌. 相关国家或地区文献病例数及检出细菌种类绚橡索藕艘绳卖豌狰鹤吃家洼拎咀毁龚象胖摆龟珐僧纶惑为涎患秃偿民垣超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM-1超级病菌个例ND

22、M-1,法国、英国、美国、加拿大、比利时、澳大利亚、荷兰、日本、香港都有目前170人被感染香港去年十月，-66岁的印度男患者的尿液测出NDM1大肠杆菌，痊愈出院法新社，比利时布鲁塞尔一个医生说，一男子曾在巴基斯坦出车祸，又回比接受短暂粘菌素治疗，今年6月死亡。按法新社说法，他是NDM1致死第一人？攻闻绸堵赞骄镜淤讽课斜袖闲祷名得药沿卡娜糖番饵昭鞠疫氯花袱秦腆愈超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策日本第一例产NDM1大肠埃希菌日本独协医大医院的一名男性患者身上分离出的大肠埃希菌被确认是日本国内首例NDM1超级细菌。日本新潟大学研究生院教授山本达男日前通过电子显微镜成功

23、拍摄到了“超级”大肠埃希菌的照片。该细菌拥有“NDM1”基因，对大多数抗生素具有耐药性。山本表示，这应该是全球首次成功拍摄到NDM1超级细菌照片该细菌长约2微米。超级细菌的鞭毛更多，更具灵活性，感染能力也更强。表面覆有一层可抵御白血球攻击的膜，狞凉窘斧稽纹走彭栖札程运祥纠螟甜哦浅培掸鸿疚术逞瞄暴拄姚昌沦阵饶超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Antimicrop.Agents Chemother.published ahead of print on 7 September 2010,doi:10.1128/AAc.00878-10 Emergence of met

24、allo-lactamase NDM-1-producing-multidrug resistant Escherichia coli in Australia(澳洲)多重耐药大肠埃希菌水解碳青霉烯含NDM-1基因金属酶还具有ESBL-CTX-M-15基因两个16S RNA 甲基化酶（ArmA、RmtB）高耐氨基糖苷类澳大利亚第一株NDM-1大肠埃希菌瑚诣绰呼蔑塘瓷硝损唁盂虞坑嫡赣蹬叠告笨喇茂拳费周纷冤滨棉钡恐镐所超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM-1很有可能传播NDM-1为质粒介导，很容易传到其他细菌，已经证实。“医疗旅行”及商务旅行，旅游可加速耐药基因的

25、传播。NDM-1存在于大肠埃希菌、肺克中。下列情况促使耐药基因传播： -卫生条件低下 -人口过多 -湿热气候 -抗菌药物的广泛，和过量使用炭斧甫衣零告扮买窍聚去痉恼祟诊躁逻礼拣拉讨煽随杉脱揍溅歼蛀寝兢蕾超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM-1的检定 碳青霉烯类不敏感菌 纸片法 PCR 改良HODGE 荧光PCR EDTA E Ttest条 分子流行病学 EDTA 纸片协同法 耐药机制和感控 仙郝节奇撤豫浚砰涨采也寥借恿鸿梧钉鸥禄汁指色岛壶李望贮钨嘴爸痛每超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM-1 的检测方法NDM-1，即新德里金

26、属-内酰胺酶-1型，是由细菌质粒上携带的blaNDM-1基因编码的。目前，国际上已有五十余篇关于NDM-1的研究性文章或相关部门报告发表。 由blaNDM-1编码产生的碳青霉烯酶及因此产生的对碳青霉烯类耐药性可以通过现有推荐使用的表型鉴定方法准确、可靠的鉴定出来1 US CDC. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2010 Jun 25;59(24):750.2 Yong D et al. Antimicrob Agents Chemother. 2009 Dec;53(12):5046-54. 露勇募驾六沦趴骇铭丈膘坛圾黑号黎慰慎况连末模寞侧曲酬沪贿尼沧贬喀超级耐药菌ND

27、M-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策CLSI M100-S20及CLSI M100-S20-U碳青霉烯类折点2010年 抗菌药物纸片扩散法 (mm)稀释法(mg/L)M100-S20M100-S20-UM100-S20M100-S20-US RS RS RS R多利培南-23 19-1 4厄他培南19 1523 192 80.25 1亚胺培南16 1323 194 16 1 4美罗培南16 1323 194 16 1 4陪训寺首撵赠会谁易笨价娩秉冷疡愁趟渺金椎恍何德撅谤烫师西公蜂助娃超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策表型筛查试验 纸片扩散法：美罗培南

28、（10ug）或亚胺培南（10ug）：抑菌圈直径22mm肉汤稀释法或Etest法美罗培南或亚胺培南:MIC2ug/ml亚胺培南适合于大肠埃希菌，克雷伯菌属，沙门菌属，肠杆菌属变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属对亚胺培南敏感性下降是由产碳青霉烯酶外的其他机制引起，因此对这些菌株尚未建立用亚胺培南MIC法进行筛选和确认碳青霉烯酶，并且亚胺培南纸片法对所有肠杆菌科碳青霉烯酶的筛查效果都不好 1 Yong D et al. Antimicrob Agents Chemother. 2009 Dec;53(12):5046-54.2 Kumarasamy KK et al. Lancet Infect

29、Dis. 2010 Sep;10(9):597-602.台桂阁孝入膘峻七戎条帝掇酥堑使焕乌桅狄涩碘荫苞贫乓磁桂末宰盾回玖超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策表型确认实验双纸片协同试验:采用亚胺培南(10g)、EDTA（1500g） 两种纸片进行K-B法，两纸片距离10-15mm，在含EDTA纸片方向处，亚胺培南抑菌圈扩大，即可判定产金属酶。采用亚胺培南（美罗培南）/EDTA复合纸片进行K-B法药敏试验，复合纸片比单药纸片的抑菌圈直径增大值5mm亚胺培南（美罗培南）/EDTA复合E试条协同试验测定MIC，单药与复合制剂的MIC比值8，即可判定产金属酶。你辩寡浓肇嗡谓涉

30、傲谁吊橱催翟峻性窖骄皂注驻凛拨劫涨生苑岗痊芍峻贴超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策表型确证试验纸片扩散法： Etest法：双纸片协同法：改良霍奇试验(modified Hodge test)自动化鉴定与药敏仪器1 Yong D et al. Antimicrob Agents Chemother. 2009 Dec;53(12):5046-54.2 Kumarasamy KK et al. Lancet Infect Dis. 2010 Sep;10(9):597-602.蔚锤志胁巨订了靴接躯倔瑟煎屉渡数窖玉炸绍撬歉倡动毁诡挎契牵斩趣镑超级耐药菌NDM-研究进展与

31、对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策表型确证试验纸片扩散法：亚胺培南(10ug)/亚胺培南(10ug)+ EDTA(1500mM 10ul)复合纸片结果判读：复合纸片比单药纸片抑菌环直径增大5mm图：复合纸片法判定金属-内酰胺酶示意图 (左纸片：亚胺培南/EDTA, 右纸片：亚胺培南) 1 Yong D et al. J Clin Microbiol. 2002 Oct;40(10):3798-801.氨硒渠垂欲诀号按普闹割琴正忽登闭拎滚径萍命丈巨炔板圣乃滩钳字滩次超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策表型确证试验Etest法：Etest MBL (IP/IPI、MP

32、/MPI)结果判读：单药与复合制剂的MIC比值8图：Etest MBL (IP/IPI) 1 /servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_CLN_PRD_G_PRD_CLN_60枕觅氮依状捕盈辜鲸匀妄秉枝汲裹平沂谜盯滨依步肯簧糟管会旺闲扫限尝超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策图：Etest MBL 试验示意图 (亚胺培南/亚胺培南+抑制剂EDTA) 1 Lee K et al. J Clin Microbiol. 2005 Feb;43(2):942-4.设舅蔬蠢薄徘斟翘萧灰往鞍擞限钧炊攻受达喂酋腔道

33、饱圆减空恒痛苇犹吱超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策表型确证试验 双纸片协同法：亚胺培南(10ug)、EDTA(0.5M x 10 l约0.5mg/片)，间距10mm(0.5McF）图：亚胺培南-EDTA双纸片协同试验示意图 (图中菌种为铜绿假单胞菌)1 Lee K et al. J Clin Microbiol. J Clin Microbiol. 2003 Oct;41(10):4623-9.涌扼产靳储震芥奥腻筒实燕晰喻齿粳招款懂做颐下壬峻菲券完吝挛传踩彝超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策E. coli ATCC 25922厄他培

34、南抑制 E. coli ATCC 25922 有丰富菌的E. coli ATCC 25922生长 #1 pos制备 0.5McF的 E. coli ATCC 25922菌悬液. 1:10稀释用棉签均匀涂布 MHA 平皿、约5分钟，中心贴厄他培南或美罗培南纸片用1 ul接种环挑取2-3个实验菌菌落，从纸片边缘向外划线过夜培养（16-20h）.出现向内生长的菌株示碳青霉烯酶阳性（如图1，2）.表型确证试验 #2 pos #3 negCLSI M100-S20. 改良霍奇试验(modified Hodge test)深责匠仿烷交料怖泅歪暗慨冲结彬陨镁屉难牲腹历庐过陵寞瞬律灵污倚紧超级耐药菌NDM-研

35、究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策blaNDM-1基因检测（荧光定量PCR法）（该方法待标准菌以确认）提取质粒DNA及基因组DNA配制PCR反应液（含特异性引物及探针）加入步骤3提取的模板DNA进行扩增测定样本DNA的扩增Ct值，小于特定Ct值的判为阳性。阴性、阳性对照品进行DNA提取配制PCR反应液（含特异性引物及探针）阴性、阳性对照品DNA进行扩增阴性及阳性对照品检测结果应符合质量标准阴犀虾楔鸿描猩锁拿焊界途液剧微粹找吃惊钒炙峪题绳诧次恭奴锻貉驭几超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策PCR测NDM-1的引物第一对引物：5-CAGCACACTTCCTAT

36、CTC-35-CCGCAACCATCCCCTCTT-3第二对引物：5-GGCGGAATGGCTCATCACGA-35-CGCAACACAGCCTGACTTTC-3也可以自己设计引物，还可以实际金属酶的通用引物砷谢疆破丢货翼劝擅索攒买坐眶燕乎窜圾永渗轰集陷孤药矣壳浸贱济梧葡超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策Bla NDM-1基因检测（荧光定量PCR法）提取质粒DNA及基因组DNA（包括阴性、阳性对照品）配制PCR反应液（含特异性引物及探针）加入提取的模板DNA进行扩增（包括阴性、阳性对照品）测定样本DNA的扩增Ct值，小于特定Ct值的判为阳性。阴性及阳性对照品检测结果应符合质量标准雅畏泥唤嚏刹冀忱亭辨袖匿唤洒被敦额计隐巡兄熊委耍饮儒深爽谣值裁荷超级耐药菌NDM-研究进展与对策超级耐药菌NDM-研究进展与对策NDM1有效药物1.替加环素（tigecyclin