5.3血红蛋白的提取及分离(1)

1、课题3 : 血红蛋白的提取和分离 PCR反应需提供的条件1:缓冲液中进行2:DNA模板3:分别与两条模板链相结合的两种引物4:四种脱氧核苷酸5：耐热的DNA聚合酶6：同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行 5引物15引物2第二次复制第一次复制55 55 5 5模板DNA55 555 5 552530 次循环（复制）后，模板DNA的含量可以扩大100万（220）倍以上。体内DNA复制与PCR的技术区别：体内复制PCR技术解旋引物一般用DNA片段DNA聚合酶细胞自身的DNA聚合酶（不耐高温）TaqDNA聚合酶复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。半保留复制，完全解旋后复制，从模板链的一

2、端开始复制。复制的方向子链的5端向 3端延伸子链的5端向 3端延伸在解旋酶作用下，细胞提供ATP，部分解开加热到94oC,双链全部解开，不需解旋酶一小段RNA血红蛋白介绍： 血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白是由574个氨基酸脱水缩合而成的含有四条肽链的蛋白质（两条链和两条链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素）。氧气结合在铁原子上，被血液运输。因含血红素血红蛋白呈红色。血红蛋白占红细胞干重97%、总重的35%。平均每克血红蛋白可结合1.34ml的氧气，是血浆溶氧量的70倍。一个哺乳动物血红蛋白分子可以结合最多四个氧分子。 血红蛋白也参与其他气体

3、的转运：它能携带机体的部分二氧化碳（大约10%）。回忆：蛋白质基本单位？合成场所？蛋白质的分子结构具有多样性的直接原因？根本原因？蛋白质的功能？思考： 蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。主要功能实例组成细胞的结构成分细胞膜中的蛋白质，染色体中的蛋白质等运输功能细胞膜上的载体蛋白、运输氧气的血红蛋白等催化功能胃蛋白酶、纤维素酶等调节功能生长激素、胰岛素等激素免疫功能B 淋巴细胞受到抗原刺激后产生的抗体一、基础知识： 凝胶色谱法（分配色谱法）： 1、凝胶：一些微小多

4、孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖） 2、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快（分子筛效应）用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 ( )A路程较长，移动速度较慢 B路程较长，移动速度较快C路程较短，移动速度较慢 D路程较短，移动速度较快4、具体过程D相对分子质量不同的蛋白质在

5、凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B 缓冲溶液：2、作用： 能够抵制（ ） 对溶液的（ ）的影响，维持PH 基本不变。外界的酸或碱PH值1、组成： 由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成如:H2CO3/NaHCO3;CH3COONa/CH3COOH，NaH2PO4/Na2HPO4; KH2PO4/K2HPO4等3、缓冲溶液的配制:通常由1-2种缓冲剂溶解于水中配制而成。 电泳：1、概念： 2、原理：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。从而实现样品中各种不同蛋白质分子的分离。3.分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定（ ）通常用 SDS聚丙