项目九 细胞培养技术 ppt课件

1、工程九 细胞培育技术工程导入：Vero细胞和狂犬病毒的培育工艺DMEM培育基胎牛血清其他成分锥形瓶逐级放大培育加碱碳酸氢钠加糖葡萄糖灌注培育液微载体5L种子罐培育培育液50L生物反应器接种狂犬病毒出液口收获病毒动物细胞培育、 动物细胞交融、单克隆抗体、胚胎移植、动物细胞核移植等动物细胞培育技术是其他动物细胞工程技术的根底。提问：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培育, 植物体细胞杂交动物细胞工程常用的技术手段有哪些？动物细胞培育和核移植技术动物细胞培育就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培育基中，让这些细胞生长和增殖。1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织

2、、器官，它们细胞增殖才干强，分裂旺盛，分化程度低，容易培育。在进展动物细胞培育时，用胰蛋白酶分散细胞，阐明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培育适宜的PH为7.27.4，此环境下胃蛋白酶2.0没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。2.分散成单个细胞3.动物细胞生长特性：细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求： 培育瓶或培育皿的内外表光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到外表相互接触时，细胞就会停顿分裂增殖，这种景象称为细胞的接触抑制。 4.过程：细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培育传代培育细胞株细胞系5.如何界定原代培育和

3、传代培育；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在外表生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停顿分裂增殖遗传物质改动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培育液制成细胞悬浮液细胞株细胞系细胞增值无限传代去掉组织间蛋白动物细胞培育不能最终培育成生物体动物细胞培育条件：1、无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素，定期改换培育液2、营养葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。3、温度和PH 36.5+-0.5度, 7.2-7.44、气体环境： O2和CO295%空气和5% CO2 保证细胞顺利的生长增殖动物细胞培育液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。与植物培育基相比其特点是

4、：1液体培育基2含有动物血清一动物细胞培育动物体细胞大都生活在液体的环境2.动物细胞培育技术的运用1消费蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。3用于检测有毒物质2获得大量本身的皮肤细胞，用于植皮。4用于生理、病理、药理等方面的研讨，为治疗和预防疾病提供实际根据细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培育结果获得细胞或细胞产物快速繁衍、培育无病毒植株等培育目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培育基特有成分液体培育基固体培育基培育基性质细胞增殖原理动物细胞培育植物组织培育比较工程植物细胞和动物细胞培育的比较二动物细胞交融1.过程：诱导方式物理法化学法生物法：灭活的病毒仙台病毒紫外线丧失感染性不感染细

5、胞保管交融活性诱导细胞交融二动物细胞交融1.过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞外表细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜衔接细胞交融，构成杂种细胞细胞膜具有一定的流动性主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法同左灭活的病毒物理离心、振动、电刺激化学聚乙二醇诱导方法使细胞分散后诱导细胞交融去除细胞壁后诱导原生质体交融细胞交融的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞交融植物体细胞杂交比较工程植物、动物细胞交融的比较(三单克隆抗体 抗体1。抗原 动物体内刺激效应B 抗原 动物体内刺激效应B 抗体抗原不纯抗体不纯挑选单一效应B细胞不能增值产生大量抗体2。特异性差、纯度低；产量低、反响

6、不够灵敏(三单克隆抗体设计方案：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖-化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞 ？ ？诱导其交融的方法有哪些？ 抗原 效应B细胞(三单克隆抗体2.制备过程：除经过杂交瘤细胞产生单克隆抗体外，还有什么方法？3.单克隆抗体的运用： 在根底实际研讨中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹(三单克隆抗体总结一种诱导细胞交融的新方法一种新细胞灭活病毒杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势动物的胚胎移植 处理某些妊娠时间长、每胎产子数量少的优良种畜的繁衍速度问题。二、动物体细胞核移植技术:将动物的

7、一个细胞的细胞核，移入一个曾经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植难度高受体细胞：M期的卵母细胞多莉与“母亲卵细胞母绵羊母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程交融后的卵细胞克隆动物的研讨意义1.克隆动物作为生物反响器，消费医用蛋白2.改良动物种类 3.治疗人类疾病，作为供体4.维护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。6.世界上第一只

8、克隆绵羊“多莉的培育等程序如下图。请仔细看图后回答以下问题：黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊卵腺细胞核重组细胞早期胚胎另一头母绵羊子宫克隆绵羊多莉ab电脉冲处置妊娠、出生写出 、所指的细胞工程各称：。实施细胞工程时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的缘由是： 。多莉面部的毛色是 ，判别根据： 。继植物组织培育之后，克隆绵羊培育胜利，证明动物细胞也具有 。 请举例阐明克隆绵羊培育胜利的实践意义： 。1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞交融，得到杂交细胞，经培育可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞交融的是 A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴

9、细胞A稳定练习2.动物细胞交融的目的中最重要的是- A.抑制远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体 C.培育新种类 D.消费杂种细胞3.动物细胞交融与植物体细胞杂交的比较中，正确的选项是 诱导交融的方法完全一样 B.所用的技术手段根本一样 C. 所采用的原理完全一样 D. 都能构成杂种细胞 BD4. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是- A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞交融 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导交融而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导交融而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导交融而成 D 1、在动物细胞培育过程中遗传物质发生改动的细胞是 - A细胞系 B细胞株

10、C原代细胞 D传代细胞2、动物细胞工程技术的根底是 - A.动物细胞交融 B.单克隆抗体 C.胚胎移植 D.动物细胞培育AD3、用于动物细胞培育的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要缘由是这样的组织细胞 A.容易产生各种变异 B具有更强的全能性 C.取材非常方便 D分裂增殖的才干强D 4.动物细胞培育与植物细胞培育的重要区别在于- A.培育基不同； B.动物细胞培育不需求在无菌条件下进展； C.动物细胞可以传代培育，而植物细胞不能； D.动物细胞可以大量培育，而植物细胞只能培 养成植株。A作业：1、在动物细胞培育过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进展处置？ 胰蛋白酶处置动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞，从而使每个细胞都能与培育液充分接触。2、在动物细胞培育过程中为什么不用胃蛋白酶？ 胰蛋白酶最适PH值为7.2 8.4 胃蛋白酶最适P