药物的杂质检查(4)

1、第三章药物的杂质检查 Test for purity药物的杂质检查(4)第三章 药物的杂质检查 Test for purity药物杂质与限量药物中一般杂质检查特殊杂质检查与鉴定方法杂质的检查方法药物的杂质检查(4)一、药物杂质与纯度 药物的纯度：是指药物的纯净程度，药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素。 杂质：ChP将任何影响药物纯度的物质均称为杂质。 对药物纯度的认识随着分离检测技术的进步而提高；注意区别试剂纯度与临床用药品的纯度 第一节 药物杂质与限量 药物的杂质检查(4)例：纯度要求Pethidine Hydrochloride盐酸哌替啶无效异构体I 无效异构体 II药物的杂质检查(4)

2、二、杂质来源 source and sorts of impurities1. 生产过程中产生 酸度：水解试剂带入 乙醇中不溶物：水解中间体(糊精) SO32-：产品用H2SO3漂白 可溶性淀粉：水解不完全药物的杂质检查(4)2.贮藏过程中产生 外界条件影响：日光、空气、温度、湿度、 微生物等引起药物产生 例如： 麻醉乙醚 醛及有毒的 过氧化物药物的杂质检查(4)按照来源分类：(1)一般杂质： （也称信号杂质） 在多种药物中普遍存在的杂质。 (Cl- SO42- Pb As Fe)(2)特殊杂质： （也称有关物质） 个别药物的生产及贮藏中引入的杂质。按毒性分类：有害杂质 ( Pb As )：考

3、察生产工艺，信号杂质 （Cl- SO42-）：反映药物的纯度水平按化学类别和特殊性分类：有机杂质、无机杂质、残留溶液 三、杂质的种类 药物的杂质检查(4)杂质的限量：药物中所含杂质的最大允许量。限量表示(g/g) ：百分之几（%） 百万分之几（10-6）限量检查： 检查所含杂质是否超过杂质限量的规定，通常不要求测定其准确含量。 四、杂质的限量检查（limit test）药物的杂质检查(4)杂质限量检查方法 杂质的限量检查多数采用对照法，也可采用灵敏度法和比较法 对照法：取一定量 (CV) 与被检杂质相同的纯品或对照品配成对照品溶液，与一定量(S)药物供试溶液在相同条件下处理后，比较反应结果，以

4、确定杂质含量是否超过规定。 采用该法注意平行原则药物的杂质检查(4)NaCl对照液葡萄糖稀硝酸10ml硝酸银1ml稀硝酸10ml硝酸银1ml对照液浊度 供试液浊度药物的杂质检查(4)杂质限量的计算：式中： L 杂质的限度（%） C 对照液浓度 （g/ml） V 对照液的加入体积（ml) S 供试品的量(g) 注意: 单位统一药物的杂质检查(4)例 1 ： 对乙酰氨基酚中氯化物的检查： 样 2.0g 溶于100ml水中，取25ml检查Cl-，与标准NaCl溶液(10g/ml) 5ml对照液相比，不得更深。 C= 10g/ml V=5.0ml S= 25 2.0 100=0.5g药物的杂质检查(4

5、)第二节 杂质检查方法一、杂质的研究规范1、有机杂质在药品质量标准中的项目名称 杂质的化学名称、某类杂质的总称、检测方法。2、杂质项目的确立 针对性3、杂质限度的确定 可根据原料药每日剂量来制定质控限度。4、杂质检查方法的选择与验证 化学法、光谱法、色谱法(特别是HPLC) 药物中杂质的检查主要是依据药物与杂质在物理性质和化学性质上的差异来进行。药物的杂质检查(4)第三节 一般杂质检查方法条件：硝酸酸性条件（稀硝酸10ml）反应试剂：硝酸银试液 1.0ml杂质对照：NaCl (10g/ml)灵敏度范围： 5080 g / 50ml 讨论：选择稀硝酸反应条件的意义。一 、氯化物（Chloride

6、 ）检查原理：药物的杂质检查(4)比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。平行操作原则。3. 若供试品有色，需经处理后方可检查。 注 意：药物的杂质检查(4)）干扰及排除 （1）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查， 可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。（2）内消色法：倍量法供试品有色处理方法药物的杂质检查(4)。二、硫酸盐检查法 1原理 是利用SO42-在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作用，生成硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的硫酸钡浑浊液比较，以判断供试品中硫酸盐是否超过限量。 药物的杂质检查(4) 2条件： SO42- 0.1mg0.5mg/50ml, 即相当

7、于标准 硫酸钾溶液15ml。 酸 度 稀盐酸2ml/50ml。 3干扰的排除 供试品有色：可采用内消色法。药物的杂质检查(4) 三、铁盐检查法 （一）硫氰酸盐法 1原理 Fe3+ + 6SCN- Fe(SCN)6-3- 红色 2条件：Fe3+ 0.01mg0.05mg/50ml, 即相当于标准铁 溶液15ml。 酸 度 稀盐酸4ml/50ml。 HCl药物的杂质检查(4) 3干扰的排除 （1） 当有Fe2+存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化Fe2+成Fe3+。 （2）当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。药

8、物的杂质检查(4) (二）巯基醋酸法 1. 原理 巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性试液中与Fe 2 + 作用生成红色配位离子。 2Fe3+ + 2HSCH2COOH 2Fe2+ + SCH2COOH + 2H+ SCH2COOH Fe2+ + 2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 + H+ Fe(SCH2COOH)2 Fe(SCH2COOH)2 2- + 2H2O 2OH-药物的杂质检查(4) 2. 说明 在加巯基醋酸溶液前，先加枸橼酸溶液，使其与铁离 形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉 淀。（此法灵敏度比较高，但试剂较贵）药物的杂质检查(4)四 、重金属（He

9、avy Metals ）的检查1、第一法 硫代乙酰胺法 适用对象：溶于水、稀酸和乙醇的药物原 理： Pb2+ + 醋酸盐缓冲液 + 硫代乙酰胺(CH3CSNH2) PbS (黄棕黑)条件：介质：醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 2ml 试剂：硫代乙酰胺 (CH3CSNH2) 2ml杂质对照液： PbNO3 (10g/ml)灵敏度范围： 1020 g / 27ml药物的杂质检查(4)葡萄糖中重金属的检查：样4.0g溶于23ml水，加入2ml缓冲盐，依法检查，其重金属不得超过 百万分之五，取标准铅（ 10g/ml），v=? C= 10g/ml L= 5 10-6 S=4.0g V = 2.0 ml

10、例 2：药物的杂质检查(4) 注意：供试品如有色，需经处理后方可检查。 1. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。2. 内消色法。3. 改用第四法，微孔滤膜过滤法。 药物的杂质检查(4)第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法 适用对象：含芳环或杂环的有机药物，如苯佐卡因、甲硝唑第三法: 硫化钠法 适用对象：溶于碱的药物或在稀酸产生沉淀的药物，如磺胺类、巴比妥类药物的杂质检查(4)C 垫圈(外径10mm,内径6mm) D 滤膜(直径10mm,孔径3.0m)E 辅助滤板CDABFE滤器下部滤器上盖连接头 微孔滤膜过滤法检查重金属装置药物的杂质检查(4)五、砷 盐 (arsenic) 第一

11、法 古蔡氏法 Gutzeit第二法 Ag-DDC法白田道夫法 Bettendorff 国内外常用方法：药物的杂质检查(4)古 蔡 氏 法 ：SbH3+HgBr2SbH2(HgBr)+HBr 锑斑 Zn+HCl药物的杂质检查(4)二乙基二硫代氨基甲酸银法Ag-diethyldithiocarbamateAg-DDC法药物的杂质检查(4)白田道夫法药物的杂质检查(4) 检查砷盐仪器装置8cm18cm有孔玻璃旋塞导气管AsH3发生瓶药物的杂质检查(4)六、干燥失重 （ loss on drying）恒温干燥 干燥剂干燥 减压干燥热分析法 thermal analysis,TA干燥失重物主要指水分 (

12、结晶水或吸附水) 或挥发性物质药物的杂质检查(4)七、水分测定费休法或K-F法，是在1935年由卡尔费休提出的测定水分的容量方法，属于碘量法，对于测定水分最为专一，也是测定水分最为准确的化学方法。费休氏法和甲苯法药物的杂质检查(4)八、炽灼残渣检查法(residue on ignition) BP称硫酸灰分（sulphated ash) 是检查有机药物中混入的各种无机杂质。常采用 重量方法进行检查。 残渣及坩埚重 坩埚重 残渣% = 100% 供试品重药物的杂质检查(4)九、易炭化物检查法 是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，常采用与标准比色液比色的方法

13、进行检查。(标准比色液为CoCl2, K2Cr2O7, CuSO4) 药物的杂质检查(4)十、残留溶剂测定法 主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、二氧六环等）。常采用气相色谱法方法进行检查。常用的方法有二种： 直接进样法和顶空进样法（试用于挥发性大的样品测定）色谱系统性试验的要求： (1) N1000; (2) 用内标法测定时，要求R1.5; (3)外标法测定时，待测物的峰面积的RSD10%。药物的杂质检查(4)残留有机溶剂测定的方法和限量有机溶剂 柱温（） 内标 物 测定方法 限量（%） 二氧六环 170 吡啶 1 法 0.038吡啶 1

14、70 二氧六环 1 法 0.02苯 170 甲苯 1 法或2 法 0.0002甲苯 170 苯 1法或2 法 0.089氯方 140 二氯甲烷 1 法或2 法 0.006二氯甲烷 140 1法或2 法 0.06环氧乙烷 80 2 法 0.001返 回药物的杂质检查(4)十一、溶液颜色检查法 溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量的方法。中国药典收载有三种方法： 1. 标准比色液进行比较的方法,标准比色液2. 分光光度法3. 色差计法 通过测定供试品与标准比色 液或水之间的色差值K2Cr2O7 黄、绿CoCl2 橙黄,橙红CuSO4 棕红药物的杂质检查(4) 是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与

15、浊 度标准液比浊的方法进行检查。浊 度标准液制备原理： (CH2)6N4 + 6H2O 6HCHO + 4NH3 HCHO + H2N-NH2 H2C=N-NH2 + H2O 甲醛腙白色混浊 不同级号浊度标准液 级 号 0.5 1 2 3 4浊度标准原液（ml） 2.5 5.0 10.0 30.0 50.0水 （ml） 97.5 95.0 90.0 70.0 50.0十二、溶液澄清度检查法药物的杂质检查(4)嗅味及挥发性的差异颜色的差异溶解行为的差异旋光性质的差异吸附或分配性质的差异对光选择吸收性质的差异第四节 特殊杂质检查物理性质上差异：药物的杂质检查(4)酸、碱性质的差异氧化还原性的差异杂

16、质与一定试剂产生沉淀杂质与一定试剂产生颜色反应杂质与一定试剂反应产生气体化学性质上差异：药物的杂质检查(4)旋光性质的差异Ch.P规定黄体酮在乙醇中的比旋度为：186198黄体酮及其中间体的比旋度（溶剂：乙醇） 化合物 浓度% 温度 D 黄体酮 11.4 2025 +1934 醋酸双烯醇酮 0.9 20 -312 醋酸妊娠烯醇酮 1 常温 +202药物的杂质检查(4)220 260 300 nm肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线max310nm药物的杂质检查(4)药物的杂质检查(4)吸附或分配性质的差异薄层色谱法 TLC一般要求：颗粒直径1040m薄层涂布：无粘合剂 含粘合剂：常加入 1015%

17、 煅石膏 (CaSO42H2O,180烘4h) 或0.50.7%羧甲基纤维素钠水溶液比移值药物的杂质检查(4) 常 用 方 法：杂质对照品法供试品自身对照法对照药物法药物的杂质检查(4)供试品10l N-甲基哌嗪10l 50mg/ml 50g/ml 枸橼酸乙胺嗪I2蒸气显色药物的杂质检查(4) 规定： 如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照品主斑点相比较，不得更深。地塞米松磷酸钠 地塞米松 20mg/ml 0.20mg/ml 药物的杂质检查(4)如有12个杂质点超过时，应不得深于0.01%对照液的主斑点。其中有1个杂质点应不深于0.002%供试品的主斑点。氨苯砜中检查“有关物质”规定：0.0

18、1%供试品100g/ml1%供试品10mg/ml0.002%供试品20g/ml药物的杂质检查(4) 分类 柱填充剂流动相正相色谱硅胶极性小的有机溶剂极性化学键合硅胶正己烷,氯仿,二氧六环等反相色谱十八烷基硅烷键合硅胶甲醇/水乙腈/水四氢呋喃/水离子对色谱ODSRP流动相中加离子对试剂离子交换色谱离子交换填料电解质水溶液排阻色谱 凝胶渗透有机凝胶有机溶剂 凝胶过滤玻璃微孔球水溶液高效液相色谱法 HPLC药物的杂质检查(4)主 要 方 法：峰面积归一化法不加校正因子的主成分自身对照法 加校正因子的主成分自身对照法：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。外标法测定供试