毕业答辩-郑惠芬 2

1、姓姓 名：郑惠芬名：郑惠芬指导老师：李步洪指导老师：李步洪 教授教授攻读专业：生物光学检测与成像攻读专业：生物光学检测与成像研究方向：细胞光动力治疗实验研究研究方向：细胞光动力治疗实验研究20132013届硕士研究生学位论文答辩届硕士研究生学位论文答辩5-ALA-PDT对鼻咽癌细胞对鼻咽癌细胞C666-1和和CNE2的杀伤效应研究的杀伤效应研究2013年6月7日论文结构论文结构第一章第一章 C666-1 C666-1和和CNE2CNE2细胞的细胞的EBVEBV检测检测第二章第二章 5-ALA 5-ALA在在NPCNPC细胞中的药代动力学研细胞中的药代动力学研究究第三章第三章 鼻咽癌细胞对鼻咽癌

2、细胞对5-ALA-PDT5-ALA-PDT的响应比较的响应比较第四章第四章 全文总结与研究工作展望绪绪 论论第一章第一章 C666-1 C666-1和和CNE2CNE2细胞的细胞的EBVEBV检测检测研究背景及选题意义研究背景及选题意义论文工作重点介绍论文工作重点介绍论文工作总结论文工作总结工作展望工作展望致谢致谢汇报大纲汇报大纲三四一研究背景和选题意义二论文研究内容介绍实验结果及分析全文总结及研究工作展望五个人科研成果与致谢一研究背景和选题意义光动力治疗鼻咽癌研究背景光动力治疗鼻咽癌研究背景鼻咽癌（NPC）发病机理EBV DNA(95%)NON-EBV DNA(5)细胞株C666-1细胞株H

3、K1,CNE2 光敏剂选择性潴留于病变组织 特定波长的光源实施靶向治疗1 1PDT具有双重选择性EBV- C666-12007年，杨小民等人研究5-ALA和HpD介导的PDT对EBV+C666-1和EBV-CNE2 的响应情况2009年，陈争等人研究HMME-PDT对EBV+ C666-1和EBV-CNE2细胞杀伤效应的实验研究现状研究现状PDTPDT对CNE2的杀伤作用大于C666-1研究结果：研究结果：CNE2对HMME的吸收能力高于C666-1不足之处：不足之处：未对5-ALA和HpD在细胞中的潴留情况潴留情况和亚细胞分布亚细胞分布进行分析1 1研究结果：研究结果：PDTPDT对CNE2

4、的杀伤作用大于C666-1原原 因：因：不足之处：不足之处：EBV对NPC-PDT疗效是否产生影响尚不明确研究现状研究现状1 1HMMEHMME（外源性）（外源性）: : 通过渗透作用进入细胞5-ALA5-ALA（内源性）（内源性）：本身不是光敏剂，进入细胞后，通过细胞的新陈代谢作用产生具有光敏性的物质PpIXPpIX细胞的生长状态生长状态以及新陈新陈代谢代谢情况会影响5-ALA合成PpIX，不同生长周期的同种细胞合成PpIX的能力不同。生长曲线几乎所有5-ALA-PDT实验都是在对细胞培养24h后开展，不能很好的反映5-ALA-PDT对细胞的杀伤效果。不足之处：不足之处：选题意义选题意义(创

5、新点创新点)首次选用EBV+C666-1EBV+C666-1、EBV-C666-1EBV-C666-1和 CNE2 CNE2 为研究对象，有望为探讨EBV在NPC-PDT的作用机制提供理论依据。 1 1首次研究相同浓度5-ALA在不同生长期细胞内的药代动力学规律二论文研究内容介绍22 25-ALA5-ALA在在NPCNPC细胞中的药代动力学研究细胞中的药代动力学研究5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在NPCNPC细胞内的细胞内的亚细胞分布亚细胞分布的检测的检测5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在不同生长期细胞内荧光量不同生长期细胞内荧光量的检测的检测2 25-ALA5-ALA在

6、在NPCNPC细胞中的药代动力学研究细胞中的药代动力学研究5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在不同生长期细胞内荧光量的检测在不同生长期细胞内荧光量的检测2424、4848、7272、9696和和120 h120 h5-ALA5-ALA在在NPCNPC细胞中的药代动力学研究细胞中的药代动力学研究5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在NPCNPC细胞内的亚细胞分布的检测细胞内的亚细胞分布的检测2 2共焦显微镜原理图共焦显微镜原理图NPCNPC细胞对细胞对5-ALA-PDT5-ALA-PDT的响应评估的响应评估PDTPDT实验实验2 2三株细胞以2105/孔的密度接种在六孔板中培养，24

7、、48和72小时后进行PDT实验细胞接种：（对照组和实验组）细胞接种：（对照组和实验组）照光光源：照光光源：光功率密度：15mW光 波 长：627nm照光剂量：照光剂量：09 、1.8、2.7和3.6 J/cm2NPCNPC细胞对细胞对5-ALA-PDT5-ALA-PDT的响应评估的响应评估%100对照组吸光度值实验组吸光度值细胞存活率细胞存活率检测细胞存活率检测用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其吸光度值Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒活细胞WST-8WST-8 formazan2 2三实验结果及分析5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在不同生长期细胞内荧光

8、量在不同生长期细胞内荧光量2 2 3 32 25-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在NPCNPC细胞内的亚细胞分布细胞内的亚细胞分布3 3小结小结 1 12 2 3 3生长速度：生长速度：EBV-C666-1 CNE2 EBV+C666-1细胞吸收细胞吸收5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX的能力：的能力：5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX的亚细胞分布：的亚细胞分布：C666-1 :CNE2 :线粒体细胞膜EBV+C666-1 EBV-C666-1CNE2 EBV-C666-13 3NPCNPC细胞对细胞对5-ALA-PDT5-ALA-PDT的响应评估的响应评估EBV+ C66

9、6-1在48 h，72 h的5-ALA-PpIX单细胞荧光量与24 h的荧光量基本相同，且对PDT的响应程度无显著差异。因此，本实验只给出EBV+ C666-1在细胞培养24 h后的PDT存活率。5-ALA-PDT5-ALA-PDT对对EBV+C666-1EBV+C666-1细胞的杀伤作用最显著。细胞的杀伤作用最显著。3 3EBV-C666-1EBV-C666-1和和CNE2CNE2细胞存活率比较细胞存活率比较2 2 3 3EBV-C666-1EBV-C666-1和和CNE2CNE2细胞存活率比较细胞存活率比较24 h ：CNE2 EBV-C666-1 48 h ：CNE2 EBV-C666-

10、1 72 h ：CNE2 EBV-C666-1 CNE2 EBV-C666-1 72 h 48 h存活率存活率细胞膜线粒体19971997年，年，Tabata Tabata 等人提出定位于线粒体的等人提出定位于线粒体的5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX 比定位于细胞膜的比定位于细胞膜的PpIXPpIX对对PDTPDT疗效更好。疗效更好。小结小结 2 23 3细胞中细胞中PpIXPpIX的含量和分布是影响的含量和分布是影响PDTPDT疗效的重要因素。疗效的重要因素。19971997年，年，Tabata Tabata 等人提出定位于线粒体的等人提出定位于线粒体的5-ALA-PpIX5-ALA

11、-PpIX 比定位于细胞膜的比定位于细胞膜的PpIXPpIX对对PDTPDT疗效更好。疗效更好。EBV- C666-1EBV- C666-1和和CNE2CNE2细胞在分别培养细胞在分别培养4848和和72 h72 h后进行后进行PDTPDT实验，杀伤效果最好且两者存活率无显著差异。实验，杀伤效果最好且两者存活率无显著差异。5-ALA-PDT5-ALA-PDT对对EBV+C666-1EBV+C666-1细胞的杀伤作用最显著。细胞的杀伤作用最显著。四全文总结及研究工作展望不同细胞、不同生长期的同一种细胞吸收不同细胞、不同生长期的同一种细胞吸收5-ALA生成生成PpIX的能力不同，且的能力不同，且E

12、BV+C666-1对对5-ALA的选择性的选择性高于高于EBV -C666-15-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在C666-1C666-1细胞中主要分布在线粒体上，而细胞中主要分布在线粒体上，而在在CNE2CNE2细胞中主要分布在细胞膜。不同鼻咽癌细胞内细胞中主要分布在细胞膜。不同鼻咽癌细胞内的的5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX的亚细胞分布有所差异的亚细胞分布有所差异相同实验条件下，相同实验条件下，5-ALA-PDT对对EBV+ C666-1的杀的杀伤效果最明显。伤效果最明显。EBV- EBV- C666-1和和CNE2细胞在分别培养细胞在分别培养48和和72 h后进行后进行P

13、DT实验，杀伤效果最好且两者存活实验，杀伤效果最好且两者存活率无显著差异。率无显著差异。4全文总结全文总结1.1.比较比较EBV+C666-1和和EBV-C666-1细胞的粘附、运动和迁细胞的粘附、运动和迁 移能力，分析两株细胞的恶性生物行为，探讨移能力，分析两株细胞的恶性生物行为，探讨EBVEBV对鼻对鼻 咽癌细胞体外浸袭转移能力的影响。咽癌细胞体外浸袭转移能力的影响。2.2.利用不同亚细胞定位的光敏剂，研究当利用不同亚细胞定位的光敏剂，研究当EBV+C666-1 和和EBV- C666-1细胞内的光敏剂潴留浓度相同时，对细胞内的光敏剂潴留浓度相同时，对 PDT的响应情况。的响应情况。4工作

14、展望工作展望为什么为什么EBV+C666-1EBV+C666-1吸收吸收5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX高于高于EBV-C666-1EBV-C666-1？EBVEBV在在NPC-PDTNPC-PDT的作用机制的作用机制 ？4研究工作的创新点回顾与总结首次研究相同浓度5-ALA在不同生长期细胞内的药代动力学规律为为5-ALA-PDT5-ALA-PDT治疗肿瘤的研究提供一种新思路治疗肿瘤的研究提供一种新思路首次选用EBV+C666-1EBV+C666-1、EBV-C666-1EBV-C666-1和 CNE2 CNE2 为研究对象，有望为探讨EBV在NPC-PDT的作用机制提供理论依据。 五个人科研成果与致谢承担项目发表论文1. 郑惠芬郑惠芬，林黎升，郑秋萍，李步洪. 5-ALA-PDT对 两种鼻咽癌细胞EBV- C666-1和CNE2的杀伤效应 研究J. 中国激光医学杂志中国激光医学杂志，2013，22(02)，69-73.2. Chen D, Zheng H, Huang Z, et al. Light-emitting d