刘海英-过敏变态反应实验室检查

1、 小儿过敏变态反应疾病实验小儿过敏变态反应疾病实验室检查与临床意义室检查与临床意义刘海英广州市妇女儿童医疗中心免疫实验室变态反应（变态反应（allergy)过敏反应（过敏反应（anaphylaxis)超敏反应（超敏反应（hypersensitivity) 均指机体受同一抗原物质再次刺激后产生的均指机体受同一抗原物质再次刺激后产生的一种异常或病理性免疫反应。机体防御反应的一一种异常或病理性免疫反应。机体防御反应的一种特殊表现形式。种特殊表现形式。类型类型过敏原过敏原抗体抗体细胞细胞相关介质相关介质发病部位发病部位I型型食物（鱼、虾、蟹、贝类、食物（鱼、虾、蟹、贝类、蛋白和牛奶等）；蛋白和牛奶等）

2、；植物花粉（法国梧桐、杨、枫柏、植物花粉（法国梧桐、杨、枫柏、蔾、律草、黄篙、雪松、豕草的蔾、律草、黄篙、雪松、豕草的花粉、人及动物皮屑、动物羽毛、花粉、人及动物皮屑、动物羽毛、昆虫、真菌、寄生虫、药物（青昆虫、真菌、寄生虫、药物（青霉素及其降解产物青霉烯酸）、霉素及其降解产物青霉烯酸）、屋尘和其他化学物质屋尘和其他化学物质IgE肥大细胞肥大细胞嗜碱细胞嗜碱细胞嗜酸细胞嗜酸细胞组胺组胺LTC4、D4PAFPGECP鼻咽鼻咽扁桃腺扁桃腺支气管支气管胃肠粘膜胃肠粘膜II型型ABO血型抗原、血型抗原、Rh抗原抗原被修饰过的自身抗原被修饰过的自身抗原血细胞碎片、变性血细胞碎片、变性DNAIgGIgMI

3、gA吞噬细胞吞噬细胞K细胞细胞中性粒细胞中性粒细胞补体补体Fc受体受体全身全身III型型变性变性IgG、肿瘤抗原、肿瘤抗原病原微生物、异种血清病原微生物、异种血清IgGIgMIgA肥大细胞肥大细胞嗜碱细胞嗜碱细胞中性粒细胞中性粒细胞补体补体肾脏肾脏关节关节IV型型微生物（微生物（TB、病毒、真菌）、病毒、真菌）寄生虫、组织抗原、化学物质寄生虫、组织抗原、化学物质TDTHTC淋巴因子淋巴因子皮肤皮肤 变态反应类型变态反应类型 过敏原检测过敏原检测（一）皮内特异性诊断（一）皮内特异性诊断原理：原理：I型或型或IV型变态反应型变态反应适应症：适应症：速发型外源性过敏、迟发型中属于接触性过敏；速发型外

4、源性过敏、迟发型中属于接触性过敏；应不在强烈过敏反应发作期；应不在强烈过敏反应发作期；近期内未使用有关治疗药物；近期内未使用有关治疗药物；无明显的皮肤划痕征；无明显的皮肤划痕征；受试皮肤没有没有湿疹、荨麻疹等皮肤损害。受试皮肤没有没有湿疹、荨麻疹等皮肤损害。 1、斑贴试验、斑贴试验前臂，前臂，24-48 h观察，观察，72 h报告阴性。报告阴性。I度：皮肤呈轻度红肿、皮疹、皮痒；度：皮肤呈轻度红肿、皮疹、皮痒；II度：散在小皮疹出现、明显痒；度：散在小皮疹出现、明显痒；III度：有成片的皮疹或大泡疹出现；度：有成片的皮疹或大泡疹出现；IV度：皮肤渗出、溃疡、坏死。度：皮肤渗出、溃疡、坏死。 注

5、意事项注意事项假阴性：皮肤不能吸收变应原假阴性：皮肤不能吸收变应原假阳性：变应原对皮肤有非特异性刺激；假阳性：变应原对皮肤有非特异性刺激；局限性：每次受试品种有限，时间长，造局限性：每次受试品种有限，时间长，造 成反应过重的痛苦成反应过重的痛苦使用范围：化妆品、化学制剂过敏使用范围：化妆品、化学制剂过敏 接触性过敏接触性过敏 2、划痕试验、划痕试验成人前臂，儿童背心，成人前臂，儿童背心，15-20min。+：皮肤稍隆起，周边轻度红斑；：皮肤稍隆起，周边轻度红斑；+：丘疹样隆起超出划痕范围，周边明显红斑；：丘疹样隆起超出划痕范围，周边明显红斑；+：丘疹出现伪足，周边呈宽而不规则红斑；：丘疹出现伪

6、足，周边呈宽而不规则红斑；+：丘疹出现：丘疹出现2个以上伪足、发痒，周边红肿个以上伪足、发痒，周边红肿 明显。明显。 3、点刺试验、点刺试验 划痕试验的改良，因方法简便，近年广划痕试验的改良，因方法简便，近年广泛采用，尤其适用于儿童。泛采用，尤其适用于儿童。国际标准化试剂国际标准化试剂：德国阿罗格皮肤点刺液：德国阿罗格皮肤点刺液方法方法：患儿前臂内侧皮肤，酒精消毒，间隔：患儿前臂内侧皮肤，酒精消毒，间隔 2cm,滴点刺液，滴点刺液，5min吸去，吸去，20min后后 观察。观察。 结果判断结果判断 变应原与组胺风团直径之比判定结变应原与组胺风团直径之比判定结果，如风团出现伪足加一级。果，如风团

7、出现伪足加一级。 + 1：4 + 1：2 + 1：1 + 2：1 注意事项注意事项适应症、强烈反应、延长观察时间适应症、强烈反应、延长观察时间三岁以下幼儿不适合三岁以下幼儿不适合设置阴、阳对照设置阴、阳对照 4、皮内试验、皮内试验 方法同青霉素皮试方法同青霉素皮试不同变应原，浓度不同不同变应原，浓度不同其他注意事项、防范措施同青霉素皮试其他注意事项、防范措施同青霉素皮试5、眼结膜试验、眼结膜试验6、鼻内激发试验、鼻内激发试验7、支气管激发试验、支气管激发试验8、离子透入试验、离子透入试验9、舌下试验、舌下试验10、食物激发、食物激发（二）、体外特异性诊断（二）、体外特异性诊断放射变应原吸附试验

8、（放射变应原吸附试验（RAST）Radioallergosorbent test 为一种检测异性为一种检测异性IgE的固相放射免疫测定法。的固相放射免疫测定法。先将食物抗原与溴化氰活化的固相载体结合，加入先将食物抗原与溴化氰活化的固相载体结合，加入待检的血清共同孵育。再经洗涤离心后，加入待检的血清共同孵育。再经洗涤离心后，加入125I标记的抗标记的抗IgE血清，与结合在变应原上的特异性血清，与结合在变应原上的特异性IgE发生反应。孵育后再次洗涤，测定固相载体的放射发生反应。孵育后再次洗涤，测定固相载体的放射活性，以其判断血清中活性，以其判断血清中IgE含量。含量。变应原变应原：纯化、标准化：纯

9、化、标准化载体载体：试管法、纸片法、：试管法、纸片法、CAP 提高灵敏度提高灵敏度 缩短试验时间缩短试验时间 增强特异性增强特异性标记二抗标记二抗：多克隆、单克隆：多克隆、单克隆显示方法显示方法：放免法、酶标法、荧光酶标法：放免法、酶标法、荧光酶标法 保持灵敏度、特异性，安全性提高保持灵敏度、特异性，安全性提高RAST商品化检测系统商品化检测系统： CAP、Master、DPC、PXUniCAP100荧光酶标法：荧光酶标法：T-IgE, S-IgE,ECP变应原：变应原：单价单价多价，几种性质相似（真菌、花粉）多价，几种性质相似（真菌、花粉）过筛用变应原：吸入性过筛用变应原：吸入性Phadia

10、top 食物性食物性Fx5E 标准标准CAPCAP：T-IgET-IgE羊抗人羊抗人IgEIgE ECP - ECP - 羊抗人羊抗人ECPECPIgEIgE标准品标准品：6 6个浓度，个浓度，WHO75/502WHO75/502荧光酶标二抗荧光酶标二抗：-半乳糖苷酶标记抗人半乳糖苷酶标记抗人IgEIgE底物底物：4-4-甲基伞桂甲基伞桂- - -半乳糖苷半乳糖苷标本采集要求标本采集要求： T-IgE,S-IgE: 空腹静脉血空腹静脉血3-5毫升，干燥管毫升，干燥管ECP：2-3毫升，硅化真空管（毫升，硅化真空管（SST管）管）严重溶血、脂血标本不可用！严重溶血、脂血标本不可用！荧光酶法分级荧

11、光酶法分级S-IgES-IgE（KU/LKU/L）S-IgES-IgE水平水平临床意义临床意义0 0 0.35 0.35无或不能检出无或不能检出 无过敏无过敏1 10.350.35低低可疑或轻度过敏可疑或轻度过敏2 20.70.7较低较低轻度过敏轻度过敏3 33.53.5中中中度过敏中度过敏4 417.517.5较高较高中、重度过敏中、重度过敏5 55050高高重度过敏重度过敏6 6100100特高特高特重度过敏特重度过敏特异性特异性IgE(S-IgE)定量结果分级标准及临床意义定量结果分级标准及临床意义参考范围：参考范围：T-IgE： 60 KU/LECP： 15g/L （SST管）管）影响

12、因素：影响因素：年龄年龄 性别性别 种族种族 寄生虫感染寄生虫感染建议建立每个试验室的正常参考区间建议建立每个试验室的正常参考区间 结果分析结果分析 1、T-IgE正常，正常，S-IgE升高升高 S-IgE 18 KU/L IV级 T-IgE 18 KU/L 结论：结论：T-IgE高不一定是过敏，过敏者高不一定是过敏，过敏者T-IgE 不一定高，不一定高，S-IgE检测有重要意义检测有重要意义 结果分析结果分析 2、S-IgE与皮试差别与皮试差别区域差别：豚草区域差别：豚草国外多，国内少国外多，国内少 葎葎草草国内常见，国外少国内常见，国外少特殊物质：特殊物质：S-IgE对某些小分子变应原对某

13、些小分子变应原（青（青 霉烯酸）检测灵敏度不高。霉烯酸）检测灵敏度不高。S-IgE低或正常并不能排除该项过敏的可能性低或正常并不能排除该项过敏的可能性 结果分析结果分析 3、吸入性过筛试验、吸入性过筛试验 Phadiatop包含多种吸入性变应原，阳性者包含多种吸入性变应原，阳性者分为分为1-6级，为多种级，为多种S-IgE的总和，浓度越高，的总和，浓度越高，表明体内表明体内S-IgE越多。越多。可以是某种可以是某种S-IgE很高，也可能是多种变应原很高，也可能是多种变应原S-IgE累加的结果。累加的结果。未包括我国重要的变应原未包括我国重要的变应原葎葎草花粉、蚕丝及真菌，草花粉、蚕丝及真菌，可能会漏检只对这三种过敏的患儿。可能会漏检只对这三种过敏的患儿。 结果分析结果分析 4、ECP ECP反映了反映了EOS激活的程度及其分泌激活的程度及其分泌毒性蛋白能力，其含量与活化毒性蛋白能力，其含量与活化EOS数目呈数目呈正相关。但是，活化的正相关。但是，活化的EOS并非末梢血中并非末梢血中EOS的全部。的全部。 因而因而EOS计数不能代替计数不能代替ECP检测。检测。实验特点实验特点皮肤试验皮肤试验S-IgE检测检