基本操作程序第3课时

1、找出以下问题答案，背课本找出以下问题答案，背课本1111页页-13-13页内容。页内容。1.1.基因工程的核心？构建基因表达载体的目的？基因工程的核心？构建基因表达载体的目的？2.2.一个基因表达载体由几部分组成？一个基因表达载体由几部分组成？3.3.启动子？终止子？标记基因的作用？启动子？终止子？标记基因的作用？4.4.所有的基因表达载体的构建是一样的吗？为什么？所有的基因表达载体的构建是一样的吗？为什么？5.5.实施基因工程的第三步是什么实施基因工程的第三步是什么? ?6.6.什么叫转化？什么叫转化？7.7.将目的基因导入植物细胞的方法？将目的基因导入植物细胞的方法？8.8.农杆菌有什么特

2、点？农杆菌有什么特点？ 叙述农杆菌转化法的过程。叙述农杆菌转化法的过程。9.9.将目的基因导入动物细胞的常用方法？操作步骤？将目的基因导入动物细胞的常用方法？操作步骤？10.10.原核生物作为受体细胞具有的特点（优点）？原核生物作为受体细胞具有的特点（优点）？11.11.大肠杆菌作为受体细胞最常用的转化方法？大肠杆菌作为受体细胞最常用的转化方法？基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：它们有什么作用？它们有什么作用？目的基因目的基因启动子启动子终止子终止子标记基因标记基因载体载体与与表达载体表达载体的区别：二者都有标记基因和的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分复制原点两部分DNADNA片段

3、。表达载体在载体基础上片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。注意注意用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用既用到限制酶切割载体，又用到到DNADNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键。的化学键都是磷酸二酯键。启动子、终止子启动子、终止子对于目的基因表达必不可少。对于目的基因表达必不可少。目的基因不能单独进入受体细胞，目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达必需以表达载体的方式携带进去。载体的方式携带进去。第第三三步步将目的基因导入将目的基因导入

4、植物细胞植物细胞将目的基因导入将目的基因导入动物细胞动物细胞将目的基因导入将目的基因导入微生物细胞微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞法感受态细胞法 （CaCa2+2+处理法）处理法）农杆菌有什么特点？农杆菌有什么特点？转化过程转化过程: :TiTi质粒质粒目的基因目的基因构建构建表表达达载载体体导入导入植植物物细细胞胞植物组植物组织培养织培养转转基基因因植植物物转入转入农农杆杆菌菌操操作作程程序序提纯含目的基因表达载体提纯含目的基因表达载体取取受精卵受精卵显微注射显微注射移植到输卵管或子宫内移植到输卵管或子宫内新性状动物新性

5、状动物将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞显微注射技术显微注射技术胚胎早期培养胚胎早期培养常用法常用法：CaCa2+2+处理处理常用菌常用菌：大肠杆菌：大肠杆菌微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少过程：过程：CaCa2+2+处理大处理大肠杆菌肠杆菌感受态感受态细胞细胞表达载体表达载体与感受态与感受态细胞混合细胞混合感受态感受态细胞吸细胞吸收收DNADNA将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞用用CaCa2 2处理，增加细菌处理，增加细菌细胞壁的通透性细胞壁的通透性四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定总结：总结：检测是否插入目的基因，检测是否插入目的基因，利用利用DNADNA分子杂交技分子杂交技术术，目的基因，目的基因DNADNA一条链（作探针）与受体细胞一条链（作探针）与受体细胞中提取的中提取的DNADNA杂交，看是否有杂交带。杂交，看是否有杂交带。检测是否转录出了检测是否转录出了mRNAmRNA，利用利用分子杂交技术，分子杂交技术，目的基因目的基因DNADNA一条链（作探针）与受体细胞中提一条链（作探针）与受体细胞中提取的取的mRNAmRNA杂交，看是否有杂交带。杂交，看是否有杂交带。检测目的基因是否翻译成蛋白质。检测目的基因